一种提取小鼠表皮总RNA的新方法

目的:建立一种从小鼠表皮组织提取高质量RNA的方法。方法:用热击法分离小鼠表皮,用TRIzol法提取RNA,用紫外分光光度计测定RNA的产率和纯度,用琼脂糖电泳和RT-PCR检测RNA的质量和完整性。结果:采用新方法提取的小鼠表皮总RNA,其D260nm/D280nm值为1.8～2.0,大于1.5,且RNA产率高于100μg/g;琼脂糖电泳出现5S、18S和28S等3条清晰的rRNA条带,而且28SrRNA条带的亮度约为18S的2倍;用新方法制备的总RNA可成功地用于RT-PCR实验。结论:采用热击法分离表皮并结合TRIzol法可提取到高质量、完整性好的小鼠表皮总RNA,并能用于相关的分子生物学实验。     

地中海拟无枝菌酸菌专一的噬菌体φMMR1的研究

从生产力复霉素ＳＶ的地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ１１９的工业发酵罐裂解液中,分离到一株新的噬菌体φＭＭＲ。该噬菌体经多次单斑分离、纯化,得到的噬斑多数为清亮的（约占９０％）,其它噬斑为浑浊斑,但未能从中分离到溶源菌。在被测试的可能的宿主菌中,φＭＭＲ１不能感染除地中海拟无枝菌酸菌以外的菌株,说明寄主范围很窄。对φＭＭＲ１的增殖和储存条件,诸如ｐＨ值、温度、二价金属离子、有机溶剂等对φＭＭＲ１的影响进行了较详细的研究。电子显微镜观察揭示,φＭＭＲ１为长尾无收缩尾鞘,头为正多面体,属长尾噬菌体科Ｂ１亚群。制备了φＭＭＲ１的兔抗血清,并测定了φＭＭＲ１以地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２为宿主菌的一步生长曲线。使用２４种限制性内切酶对φＭＭＲ１ＤＮＡ进行了单酶切分析。结果表明,φＭＭＲ１基因组ＤＮＡ为线状双链,未找到粘性末端,大小约为５９６ｋｂ。φＭＭＲ１ＤＮＡ的Ｇ＋Ｃ含量为６７％。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了噬菌体的外壳蛋白多肽的组成。纯化的裸露噬菌体ＤＮＡ可利用电穿孔技术成功地转染地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２。     

琥珀酸放线杆菌发酵培养基的优化

对琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC1593发酵产生琥珀酸培养基的主要成分,及其含量进行优化。通过单因素试验,得出发酵培养基中葡萄糖、酵母膏和玉米浆的含量对产生琥珀酸有显著影响;采用响应面法(RSM),得出多元二次回归方程拟合的三种因素与琥珀酸含量间的函数关系,并根据优化结果与实验,CGMCC1593产琥珀酸达到41.69g/L。     

5种杀虫剂对西花蓟马和花蓟马的毒力及其生理酶活性的影响

【目的】探究不同杀虫剂对重要入侵害虫西花蓟马及其本地近缘种花蓟马的毒力及对保护酶和解毒酶活性的影响,为进一步研究2种害虫的抗性管理提供依据。【方法】采用浸渍法测定5种田间常用杀虫剂对西花蓟马和花蓟马的毒力,并测定杀虫剂亚致死浓度(LC25)下2种蓟马体内保护酶和解毒酶活性的差异。【结果】不同杀虫剂对2种蓟马的毒力依次为:乙基多杀菌素甲维盐阿维菌素吡虫啉噻虫嗪,乙基多杀菌素对西花蓟马和花蓟马的LC_(50)分别为0.28和0.03 mg·L~(-1)。不同药剂的亚致死剂量(LC_(25))对西花蓟马和花蓟马体内保护酶和解毒酶活性普遍具有诱导作用。其中,阿维菌素对西花蓟马超氧化物歧化酶(SOD)活性诱导作用最强,为326.40 U·mg~(-1),是对照的9.37倍,而乙基多杀菌素对花蓟马SOD活性诱导作用最强,为245.35 U·mg~(-1),是对照的9.32倍;吡虫啉对西花蓟马和花蓟马过氧化物酶(POD)诱导作用最强,分别为298.67和246.79 U·mg~(-1),是对照的37.10和20.57倍;阿维菌素对西花蓟马和花蓟马过氧化氢酶(CAT)和羧酸酯酶(CarE)诱导作用最强,分别为298.67、246.79 U·mg~(-1)(CAT活性)和12.53、11.99 U·mg~(-1)(CarE活性);乙基多杀菌素对西花蓟马和花蓟马谷胱甘肽转移酶(GST)和乙酰胆碱酯酶(AChE)诱导作用最强,分别为77527.59、66927.39 U·mg~(-1)(GST活性)和2.34、2.22 U·mg~(-1)(AChE活性)。【结论】5种杀虫剂中,乙基多杀菌素对2种蓟马的毒力最强;西花蓟马对杀虫剂的解毒代谢能力强于花蓟马。     

猕猴血清B病毒抗体三种检测方法的比较

目的对B病毒（B virus）抗体检测的3种方法进行比较,寻求准确、可靠、经济的检疫方法。方法对以HSV-1为抗原的玻片酶免疫法、B病毒为抗原的玻片酶法（EIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）的猕猴血清B病毒抗体检测结果进行比较。结果HSV-1为抗原的EIA与B病毒为抗原的EIA、ELISA检测结果符合率分别为97.7%和95.5%。结论HSV-1为抗原EIA的检测结果与B病毒抗原EIA和ELISA的检测结果一致性较好,可以做为初筛手段,且检测效果较好,投入资金相对最低,达到节约成本的目的。     

高尔基体对小鼠卵母细胞体外发育进程的影响

目的初步探讨高尔基体在小鼠卵母细胞体外发育进程中的作用。方法布雷菲德菌素A（Brefeldin A,BFA）处理小鼠未成熟,成熟卵母细胞,利用特异性标记物阻COP标记高尔基体。激光扫描共聚焦显微镜观察BFA处理对高尔基体产生的影响;同时。观察并比较不同处理组小鼠未成熟／成熟卵母细胞的体外成熟率、孤雌激活率、体外受精率及2-细胞率。结果GV期卵母细胞经BFA处理后,高尔基体的形态和分布发生明显改变。其体外成熟率（2．5％）与对照组（70．4％）比较统计学差异显著（P〈0．001）;洗掉BFA后,其体外成熟率（67．2％）与对照组无统计学差异（P〉0．05）。另外,成熟卵母细胞经BFA处理后。其体外受精率及2．细胞率均与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论小鼠卵母细胞体外成熟的正常进行需要高尔基体主导的膜运输。而体外受精和受精卵卵裂过程中不需要功能性的高尔基体。     

海南儋州橡胶树、桉树人工林碳储量及其动态变化

量化橡胶树和桉树人工林碳储量, 为评价海南地区碳汇功能和可持续管理功能提供重要依据。在海南省儋州市选择不同林龄的橡胶树和桉树人工林, 设置样地测算乔木层、林下植被和枯落物的生物量, 土壤分层采集0-100cm 土样,依据相对方程, 计算橡胶树和桉树人工林生态系统的碳含量和碳储量。结果表明: 不同林龄橡胶树和桉树人工林林下植被碳含量变化幅度为38.09%-45.31%, 枯落物碳含量为38.50%-47.52%之间。0-100 cm 土层碳含量变化幅度为0.31%-1.62%, 各林分土壤含碳率均随土层深度增加而减少, 除底层(50-100cm)土壤外, 其它层次不同林分土壤有机碳的含量均表现为橡胶林＞桉树林。橡胶树、桉树人工林生态系统总碳储量分别为160.01 和86.33 tC·hm–2, 桉树人工林生态系统碳储量均表现为随林龄的增加而增加, 橡胶树各林龄碳储量均高于桉树。橡胶树、桉树人工林乔木碳储量分别占其总碳储量的36.87%和23.92%。橡胶树和桉树人工林下植被碳储量表现为橡胶树(0.78 tC·hm–2)>桉树(0.49 tC·hm–2), 枯落物碳储量分别占其总碳储量的1.00%和1.56%。橡胶树、桉树人工林土壤碳储量分别为96.22 和63.88 tC·hm–2, 橡胶树人工林土壤碳储量高于桉树, 0-50 cm 土层碳储量成为土壤的主体, 橡胶树0-50 cm 土层碳储量占其土壤总碳储量的64.39%, 桉树为54.35%。乔木层和土壤层碳储量是整个森林生态系统碳贮量的主要部分。橡胶人工林生态系统的固碳速率和固碳潜力分别为4.20 tC·hm–2·a–1 和64.78 tC·hm–2, 桉树人工林生态系统的固碳速率和固碳潜力分别为11.06 tC·hm–2·a–1和23.98 tC·hm–2。两个树种均具有较高的固碳能力, 是海南营造高效固碳人工林的理想树种。     

血栓弹力图评估胃癌患者围手术期凝血状态的应用研究

目的:探讨血栓弹力图评估胃癌患者围手术期凝血状态的临床应用价值。方法:选择2013年8月至2016年8月在我院进行治疗的胃癌患者80例作为观察组,同时选择同期在我院治疗的胃部良性疾病患者80例作为对照组。采用TEG评估两组患者的凝血功能,并且与常规凝血检查比较,分析两种凝血评估方法的准确率。结果:Ⅰ期胃癌患者的TEG各指标与对照组相比差异无统计学意义(P0.05),Ⅱ期胃癌患者的R值、K值、MA值以及CI值与对照组比较差异显著,具有统计学意义(P0.05),Ⅲ和Ⅳ胃癌患者的TEG各指标与对照组相比差异显著,具有统计学意义(P0.05);发生淋巴结转移的胃癌患者TEG各指标与对照组相比差异显著,具有统计学意义(P0.05),而没有发生淋巴结转移的患者与对照组相比差异无统计学意义(P0.05);进展期胃癌患者的TEG各指标与对照组比较差异显著,具有统计学意义(P0.05),而早期胃癌的TEG各指标与对照组差异不显著(P0.05);观察组患者治疗后,TEG检测血液发生低凝状态的检出率77.23%,常规检出率是46.15%;54例非出血患者中,TEG检出血液非凝状态的检出率为94.44%,常规检出率为77.78%。两种检测方法的检出率比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:胃癌患者的血液处于高凝状态,且高凝状态与病情发展的恶性程度呈正相关,TEG评估胃癌患者围术期的凝血状态较常规凝血检验更准确。     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的：对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法：使用MILLIPOREPELLICON超滤、PEG6000沉淀、蔗糖．甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果：HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86％;PEG浓缩方法回收率平均72．5％;蔗糖．甘油离心浓缩方法平均回收率53．3％。结论：蔗糖／甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高。以免样品损失。     

乳酸乳球菌表面表达Brazzein甜味蛋白系统的建立

参照甜味蛋白Brazzein基因序列,结合乳酸乳球菌的密码子偏嗜性的相关分析,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,将第29位天冬氨酸、31位的组氨酸和第41位的谷氨酸分别突变为赖氨酸、丙氨酸和赖氨酸,以期提高目的蛋白的甜度。采用重叠PCR的方法合成目的基因,目的片段亚克隆到pMD18-T载体上。经序列测定分析后,目的片段克隆入分泌表达载体pNZ8112,电转化乳酸乳球菌中,构建成表面展示表达甜味蛋白Brazzein的乳酸乳球菌表达系统。