肠出血性大肠杆菌(O157：H7)的特异性荧光探针检测方法的建立

目的:建立一种real-time PCR,快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7。方法:以肠出血性大肠杆菌0157:H7 rfbE为待检靶基因,设计一对引物和一条Taqman探针,探针5’端用FAM基团标记,3’端用TAMRA标记。通过重组质粒的构建,建立并优化了大肠杆菌0157:H7的荧光定量PCR检测方法。结果:在人工污染样本无需富集的情况下,检测的最低DNA浓度是10拷贝/反应(3CFU/mL);特异性检测实验中,0157菌株检测结果均为rfbE阳性,而非0157:H7菌株检测结果均为阴性;重复性实验中,批内、批间变异系数均小于3%。结论:实验结果显示此荧光定量PCR方法特异性、灵敏度高,重复性好,可对分离的可疑大肠杆菌0157:H7菌株进行快速鉴定。     

快速康复外科护理在胃肠道肿瘤围手术期的实践与进展

快速康复外科(fast track surgery,FTS)是胃肠道肿瘤围手术期护理发展的新趋势,它全面改变了胃肠外科的面貌,并且对传统护理学形成强烈冲击,传统的护理模式已无法适应现代FTS的发展。本文对近年来FTS在胃肠道肿瘤围手术期的护理进行综述,并结合临床工作实践,探讨目前护理理念的转变,并对未来的胃肠道肿瘤围手术期的护理模式进行展望。     

老年牙周病与糖尿病的相关性分析

目的:探讨老年人糖尿病患者牙周疾病的发生情况,以及牙周病与糖尿病之间的相互关系。方法:选择我院就诊的140名同时伴有糖尿病的老年牙周病患者,将其随机分成A、B、C3组,A组86例为实验组,同时进行牙周病与糖尿病的系统治疗。B、C组为对照组,其中B组28例只进行牙周病的治疗,C组26例只进行糖尿病的治疗。结果:牙周治疗效果A组明显高于B组(P<0.05),糖尿病的治疗效果A组高于C组(P>0.05)。结论:老年牙周病和糖尿病之间存在相关性,糖尿病治疗与牙周病治疗之间相互影响。     

用凝胶电泳发现肝素与染料之间的相互作用

目的:观察肝素与23种染料之间的相互作用.方法:利用淀粉琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察染料加肝素后电泳行为的变化.结果:淀粉琼脂糖凝胶电泳中染料加肝素后多数结果是泳速变慢,有一些留在原点,也有前移、后退者.二氯荧光素、荧光红、荧光素、甲酚红、苯胺蓝、溴酚蓝、茜素红S、胭脂红、亮绿、氨基黑10B、丽春红G、曙红、苯胺黑、氯酚红加肝素后泳速变慢.亚甲蓝、灿烂甲酚蓝、甲基紫加肝素后电泳留在原点.刚果红、洋红加肝素后电泳变化不明显.四氯荧光素、氯化硝基四氮唑蓝加肝素后电泳荧光看不清.聚丙烯酰胺凝胶电泳中溴酚蓝加入肝素后泳速明显变慢,随着肝素量增加溴酚兰的泳速加快.与淀粉琼脂糖凝胶电泳结果一致,但它的电泳结果更明显.结论:本次所研究的23种染料,几乎都能与肝素发生相互作用,给它们的进一步深入研究打下基础.     

辛伐他汀对IFN-γ 诱导的人外周血单个核细胞OX40L 表达的影响

目的:探讨经IFN-γ刺激后,人外周血单个核细胞OX40L表达的变化,以及辛伐他汀对单个核细胞OX40L表达的影响.方法:将实验标本随机分为2组,分别干扰素-γ(IFN-γ)刺激组、辛伐他汀干预组.应用RT-PCR及Western blotting技术,观察IFN-γ诱导的人外周血单个核细胞OX40L表达情况及辛伐他汀对人单个核细胞OX40L表达的影响.结果:1.1000U/mlIFN-与人单个核细胞共同培养24h后,OX40L mRNA和蛋白水平的表达明显增加.2.预先给予10 mol/L的辛伐他汀干预1h可以明显降低IFN-诱导的OX40L表达.结论:IFN-可诱导人单个核细胞OX40L表达.辛伐他汀可以抑制IFN-诱导人单个核细胞OX40L表达的增强,从而可能抑制了OX40L信号通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程.     

干扰素α缓释微球的制备及体外释放研究

目的:开发一种有效地长效缓释干扰素α微球制剂。方法:利用S/O/W乳剂-挥发法制备了包裹干扰素α多糖颗粒的PLAG微球,对其外观形态进行了考察,并用ELISA方法考察了微球体外释放效果。结果:制备的干扰素α微球圆整光滑,粒径均匀;经24天体外释放,累计释放率达到80%以上。结论:通过包封包裹干扰素α的多糖颗粒进PLGA微球,有效地保护了干扰素α在微球中的活性,实现了长效缓释,是一种可行的缓释方案。     

紫山药的营养保健价值及产品开发

紫山药又称为"紫人参",其肉色亮紫,富含特有的多糖、粘液质、蛋白质、淀粉、多种氨基酸、矿物元素等营养性成分,还具有多种功能性成分,如薯蓣皂苷(天然的DHEA)、尿囊素、多酚、植物固醇,有8种类黄酮物质花青素等。因此,紫山药具有较高的营养价值和保健功能,是集美味和保健养生作用于一体的珍贵药食兼用的绿色食品。在食品、化妆品、医药方面已显示出巨大的应用潜力。本文对紫山药的营养性成分、保健功能性成分及产品开发等方面已有的研究进行分析总结和展望。旨在提高人们对紫山药保健功能的认识,为今后科学地开发利用紫山药资源,促进紫山药营养和保健功能的开发提供参考。     

L-谷氨酸氧化酶与CBD的融合表达及其在微晶纤维素上固定化分析

酶的固定化作为一种重要的技术,已在生物催化领域得到了广泛的应用。现将来源于普拉特链霉菌3304(Streptomyces platensis NTU3304)产生的胞外L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,Gox)基因gox融合到来源于粪碱纤维单胞菌Cellulomonas fimi的纤维素结合域(CBDcex)的基因上,构建表达载体p ETM10-Gox-CBD,并在大肠杆菌中表达。通过蛋白纯化获得融合蛋白,并命名为Gox-CBD。利用CBD对微晶纤维素特异性吸附的特性将其固定在微晶纤维素上,并对固定化酶的制备条件、结合量、酶学性质及其微晶纤维素结合稳定性等进行了研究。在4℃条件下结合约1 h,融合蛋白Gox-CBD结合在纤维素上的结合量即可达到9.0 mg/g。通过对重组型、融合表达游离的以及固定化在微晶纤维素上的谷氨酸氧化酶的酶学性质进行比较发现,固定化酶的比酶活有所降低;但固定化酶的热稳定性相对于游离酶有了很大的提高,在60℃孵育30 min后还保留有约70%的活性,而游离的重组Gox在相同条件下几乎完全失去活性。当固定化结合蛋白在p H10或者盐浓度5 mmol/L的Na Cl条件下可以牢固结合。并且可以通过一步纯化方法固定化融合蛋白Gox-CBD于微晶纤维素上。因此,L-谷氨酸氧化酶与纤维素结合域融合表达的研究为蛋白的纯化及酶的固定化提供了一种新策略。     

拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定

该研究采用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别对拳参中的主要成份———没食子酸以及总鞣质进行含量测定。其中,用高效液相色谱法测定没食子酸的含量,HPLC 条件为 Hypersil GOLD Phenyl 柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),甲醇－0.1％磷酸梯度洗脱,流速为1.0 mL?min-1,检测波长为276 nm。用紫外分光光度法测定总鞣质的含量,采用2010版《中国药典》一部附录 XB 中鞣质含量测定方法,用干酪素沉淀鞣质,通过干酪素沉淀前后鞣质的变化来确定样品中总鞣质的含量。结果表明：没食子酸在0.051~1.02μg 范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.1％、100.3％、101.9％,RSD 分别为2.1％、0.8％、2.0％;总鞣质在2.09~10.48μg 范围内呈现良好线性关系,平均加样回收率分别为102.2％、100.2％、102.1％,RSD 分别为1.3％、1.4％、1.0％。利用上述方法,还测定了贵州贵阳和四川成都各3批样品中没食子酸和总鞣质的含量差异,发现成都样品中的没食子酸与总鞣质均大于贵阳拳参中的含量,初步分析导致这一结果的原因可能与拳参的生长海拔有关,而成都的海拔范围更适合拳参的生长。上述两种方法快速、简单、重现性好,可以作为拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定方法,而该方法也是首次被用来同时测定拳参中没食子酸和总鞣质的含量,为今后的地方药典标准甚至《中国药典》标准的补充和完善提供了重要依据。     

限制性液体复苏对失血性休克复苏患者血浆TNF-alpha、IL-6 水平的影响

目的：探究限制性液体复苏对失血性休克复苏患者血浆肿瘤坏死因子（TNF-alpha）、白细胞介素-6（IL-6）水平的影响,为临床治 疗失血性休克选择液体复苏方式提供依据。方法：选择2010 年1 月~2015 年6 月期间,我院收治出血性休克患者63例为研究对 象;采用随机数字法将其分为观察组（32 例）和对照组（31 例）,观察组患者给予限制性液体复苏,对照组患者给予传统充分复苏; 观察并比较两组患者治疗前后血浆TNF-alpha、IL-6 水平的变化。结果：观察组患者给予复苏液体的输入量为（1.95± 0.35）L,对照组 患者给予输液量为（3.61± 0.56）L,观察组患者给予的复苏液输入量显著低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗前两组 患者血浆TNF-alpha及IL-6 水平不存在显著差异（P>0.05）;治疗后两组患者血浆TNF-alpha及IL-6 水平均显著上升,且观察组患者血浆 TNF-alpha及IL-6水平均显著低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：限制性液体复苏能够明显降低失血性休克患者的出 血量,稳定机体血流动力学,保证机体重要脏器的血流灌注,有利于改善患者血浆TNF-琢和IL-6 水平,提高治疗效果,改善预后。