人细胞生长相关5个新基因的染色体定位及其基因结构

基因的染色体定位对我们研究基因相互关系、基因的组织与进化及理解基因与疾病关系具有重要的意义。本文采用RH-PCR方法及生物信息学方法对PP3898、PP1158、PP753、SP260、HC56等5条人细胞生长相关新基因进行染色体定位,并分析了其基因结构。PP3898及PP1158定位于19p13.3,PP753及SP260定位于1q21.1,HC56定位于17p13.3。PP3898含有19个外显子和18个内含子,可读框为2565bp;PP1158含有7个外显子和6个内含子,可读框为1218bp;SP260含有10个外显子和9个内含子,可读框为690bp;HC56为单外显子,可读框为3141bp。另外,对染色体定位获得的信息进行了分析。 Abstract:Five novel human genes related to cell growth control were newly isolated and identified by high-throughput functional screening.In this paper,the chromosomal localization of these five genes is reported.Radiation hybrid mapping and in silico mapping,and their genomic organization were analyzed respectively.PP3898 and PP1158 were assigned to chromosome 19p13.3,SP260 and PP753 to chromosome 1q21.1,and HC56 to chromosome 17p13.3.PP3898 contains nineteen exons and eighteen introns,PP1158 seven exons and six introns,SP260 ten exons and nine introns,and HC56 only one exon.The implications of chromosomal localization are discussed.     

连续性血液净化在重症急性胰腺炎患者中应用的临床疗效观察

目的:观察连续性血液净化(CBP)在重症急性胰腺炎(SAP)患者中应用的临床疗效,探讨提高SAP临床疗效的治疗措施方法:选择在我科就诊的SAP患者64例,根据患者自愿的原则,分为常规组和CBP组,常规组采用内科常规治疗措施,CBP组在常规治疗的基础上加行CBP治疗,比较两组患者治疗中血清淀粉酶的动态改变、治疗第5天各项生化指标及APACHEⅡ评分、病情稳定时间等临床一般情况。结果:两组患者在上述方面比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),CBP组优于常规组。结论:在治疗SAP患者的过程中,应积极加行CBP治疗措施,可提高临床疗效,改善患者预后。     

抗EGFRvⅢ噬菌体抗体库的构建和筛选

目的:应用噬菌体展示技术筛选针对表皮生长因子受体突变体Ш(epidermal growth factorreceptor variant typeⅢ,EGFRvIII)的单链抗体(single chain Fv,scFv)。方法:利用原核表达纯化的人EGFRvIIIex蛋白和高表达EGFRvIIIex的小鼠成纤维细胞系NIH3T3免疫小鼠,扩增VH和VL片段并拼装成scFv基因,连接至噬菌粒pCANTAB5E,电击转化Hpd3cells,构建噬菌体单链抗体库,并进行3轮富集筛选。在第4轮筛选时,采用了降低抗原浓度的方法。然后将筛选得到的阳性克隆测序分析,转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达。结果:构建了库容为7.9×107的噬菌体单链抗体库。经过第4轮低浓度抗原筛选,得到了较高亲和力的克隆。取单个阳性克隆测序分析结果表明,该抗EGFRvIII scFv基因序列长807bp,编码268个氨基酸。IPTG诱导后表达的可溶性scFv可分别与纯化的EGFRvⅢex抗原以及细胞表面的EGFRvⅢex结合。结论:利用噬菌体抗体库筛选得到了高亲和力的抗EGFRvⅢ scFv,为开发针对EGFRvⅢ...     

Inhibition of the growth of human hepatoma cell line both in vitro and in vivo by transducing CKI gene p21~(WAF-1) with GE7 targeting gene delivery system

The EGF receptor-mediated targeting gene delivery system GE7 was used to transduce exogenous gene pCEP-p21WAF-1 into human hepatocellular carcinoma cell both in vitro and in vivo. After in vitro transduction of the exogenous gene, the growth of the cell lines SMMC-7721 and BEL-7402 was significantly inhibited compared with the control. On day 8 the inhibition rates of the above cell lines reached 56.0% and 66.7%, respectively. The in vivo experiment showed that the growth of human hepatoma transplanted in nude mice injected with GE7 gene delivery system subcutaneously once a week for 3 weeks was remarkably inhibited compared with that of untrans-fected control. The average tumor weight of the experiment group was (0.083 ?0.043) g, while that of the control group was (0.28110.173) g. The difference is significant (P<0.05). It was indicated that GE7 gene delivery system could efficiently transduce exogenous gene pCEP-p21WAF-1 into hepatoma cell with high EGF receptor expression, and inhibit the cell growt     

DADS对人小细胞肺癌NCI-H446 细胞系增殖抑制的研究*

摘要目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）对人小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：体外培养NCI-H446 细胞,采用MTT、细胞计数实验方法检测DADS 抑制NCI-H446 细胞增殖;通过HE 染色和AO-EB 荧光染色方法,观察DADS 处理后NCI-H446 细胞的形态学改变。结果：MTT 结果显示：DADS作用于NCI-H446 细胞48 h后,代谢MTT 的能力明显降低,显示出较强的细胞毒性反应,IC50值介于20～40 滋g/ml之间。细胞计数结果表明：DADS 作用于NCI-H446细胞后,随DADS 浓度增加NCI-H446 细胞倍增时间延长。HE染色显示：NCI-H446 细胞经DADS处理24 h后,与对照组相比,细胞体积变小,胞浆丰富,细胞核变小,染色变淡。AO-EB 荧光染色显示：NCI-H446 细胞经DADS处理24 h后,与对照组相比,细胞皱缩、呈圆形,胞质黄色或橘红色,细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色或橘红色荧光,并可见橘红色碎片且随DADS 浓度增加,随DADS浓度增加细胞密度逐渐减少。结论：DADS 能抑制体外培养的NCI-H446 细胞增殖,作用效果与药物浓度及作用时间相关。     

肝癌相关基因研究进展

肝癌相关基因研究进展顾健人（上海市肿瘤研究所）肝癌是我国高发而且死亡率极高的一种癌症。上海市肿瘤研究所,“癌基因与相关基因”国家重点实验室十年来从事寻找和肝癌发生、发展相关的基因,即那些与生长有关但处于“静止”状态的基因被“激活”了（癌基因）,以及那...     

克隆新基因(cDNA)的几种常用方法

文章主要叙述了目前克隆新基因（ｃＤＮＡ）常用的几种方法--递减杂交,表达序列标记,ｍＲＮＡ差别显示,并对每种方法的原理,优缺点及应用情况作了简单介绍,以供有关研究者参考 。     

卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中端粒酶蛋白表达及活性的研究

目的　研究卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中端粒酶蛋白的表达水平及其活性 ,探讨其作为卵巢癌肿瘤标记物的可能性。方法　应用免疫组织化学方法检测了 30例卵巢癌和 10例卵巢腺瘤组织中端粒酶相关蛋白 1(TP1)和人端粒酶蛋白催化亚基 (hTRT)的表达水平 ,并采用TRAP -ELISA方法检测了 30例卵巢癌和 10例卵巢腺瘤组织中的端粒酶活性。结果　免疫组织化学结果显示 ,30例卵巢癌和 10例卵巢腺瘤组织中TP1和hTRT表达阳性率均为 10 0 %,其中卵巢癌的强阳性表达率高于卵巢囊腺瘤 (P <0 0 1) ,TP1和hTRT的表达强度无明显差别。TRAP ELISA方法检测发现 30例卵巢癌组织中 ,2 8例检测到端粒酶活性 ,阳性率为 93.3%;10例卵巢腺瘤中 ,仅 1例浆液性乳头状腺瘤检测到端粒酶活性 ,阳性率为 10 %(P <0 0 0 1)。结论　本研究的结果表明卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中端粒酶蛋白TP1和hTRT的表达水平与端粒酶活性之间无明显相关性 ,端粒酶活性的检测与卵巢癌的发生发展密切相关 ,有望成为卵巢癌的一种肿瘤标记物。     

贵州省喀斯特地区原始林水化学特征

降水是森林生态系统的一个主要的养分输入源,观测并分析降水化学对于准确地估算森林生态系统养分循环的养分元素浓度与量显得极为重要。对贵州省茂兰国家自然保护区原始林森林群落2007年9月-2008年8月的降水进行定位观测与分析。结果表明:(1)在林外雨、林内雨、树干流和溪流水中,除了Na+之外,pH值与大部分的养分元素的浓度表现出明显的季节变化,冬季与早春浓度较高,夏季浓度较低。这与各季节的降雨量不同而导致浓度稀释或者浓缩有关。(2)大气降雨通过林冠的过程中,养分元素的浓度出现了较大的变化,林内雨与树干流中的浓度基本高于大气降雨;养分元素变化中,浓度差异较大的元素是K+、Mg2+和Ca2+,K+在林内雨和树干流的浓度分别是大气降雨的14倍和21倍;Mg2+浓度分别为大气降雨的12倍和9倍;Ca2+浓度分别为大气降雨的4倍和3倍,这与大气降雨通过林冠,与树体的养分交换以及树体养分的溶脱有关。(3)通过林内雨,树干流输入样地较多的养分元素是K+和Ca2+,分别是35.8kg.hm-.2a-1和31.5kg.hm-.2a-1;通过溪流水输出的元素中,较多的是Ca2+和Mg2+,分别是-547.4kg.hm-.2a-1和-144.5kg.hm-.2a-1;其次是SO24-,而Na++K++NH4+-N总量不足阳离子总量的1%,Cl-+NO3-总量不足阴离子总量的1%。这可能与母岩风化是碳酸岩类岩石风化有关。(4)年养分的垂直移动量特征显示,土壤0cm到土壤5cm的养分元素量变化较明显,无机态N量的变化可能跟微生物的氮固定、无机化或者植被的吸收有关。(5)研究地的年间养分元素量收支分别为N2.9kg.hm-.2a-1;K25.2kg.hm-.2a-1;Ca-547.4kg.hm-.2a-1;Mg-144.5kg.hm-.2a-1;Na-4.0kg.hm-.2a-1;Cl2.5kg.hm-.2a-1和SO24-S-5.9kg.hm-2.a-1。在年间养分的输入与输出中,无机态N跟K+显示正收支,Ca2+、Mg2+为负收支,而Na+、Cl-相对较稳定。