染色体DNA琼脂糖包埋法辅助的ExoCET技术克隆放线菌天然产物生物合成基因簇

【目的】本研究旨在通过将琼脂糖包埋染色体DNA的方法与ExoCET重组技术相结合,建立放线菌天然产物生物合成基因簇的捕获方法。然后将克隆基因簇导入通用底盘宿主中,实现目标生物合成基因簇的异源表达。【方法】首先,利用低熔点琼脂糖包埋技术制备菌株的染色体基因组总DNA,再用限制性内切酶消化含有染色体DNA的琼脂块,获得线性化的DNA样品;然后利用ExoCET重组技术,以p15A线性载体片段将目标基因簇线性片段进行捕获;再通过PCR-targeting的方法向目标质粒中引入所需的接合转移DNA元件。接着,将改造质粒通过接合转移导入到Streptomyces coelicolor M1252宿主中,获得不同的重组菌株。最后,对不同的菌株进行发酵并提取化合物,最后进行活性检测以及质谱检测。【结果】通过该方法,从菌株S.lincolnensisNRR2936中成功获得了林可霉素生物合成基因簇(lmb-BGC),从菌株Nonomuraea nitratireducens WYY166^T中克隆得到了2个核糖体肽类化合物的生物合成基因簇(nioblantin,niob-BGC和nitblantin,nitb-BGC),并实现了lmb-BGC在天蓝色链霉菌M1252中的成功表达。【结论】本研究通过将低熔点琼脂糖包埋技术与ExoCET重组技术进行合理整合,定向克隆得到了林可霉素以及2个新颖的羊毛硫肽类化合物的生物合成基因簇。然后,分别对重组质粒改造后,在天蓝色链霉菌M1252宿主中进行表达,分别获得重组菌株MJX01、MJX02和MJX04。最后,利用质谱以及活性测试的手段对发酵提取物进行了检测,确定了林可霉素生物合成基因簇在天蓝色链霉菌M1252中成功表达。本研究为通过基因簇克隆和异源表达发掘新化合物奠定了基础。     

氯化镁增强鸡胚细胞对森林脑炎病毒减毒株敏感性的研究

减毒活疫苗的免疫效果与病毒滴度有直接关系,如何提高病毒的滴度,增强其稳定性,是提高减毒活疫苗免疫效果的重要途径之一。本文报告,在鸡胚单层细胞培养森林脑炎(以下简称森脑)病毒减毒株,加有10mM氯化镁可提高     

富铬酵母的应用与展望

铬是人体必需的微量元素,三价铬为葡萄耐量因子GTF的主要成分。成人每日膳食中适宜的铬摄入量为20~50μg。缺铬可以导致粥样动脉硬化、糖尿病、冠心病,并影响蛋白质与RNA合成。富含三价铬的富铬酵母,可以降低Ⅱ型糖尿病患者血糖及血浆胰岛素,又可降低高血脂患者的TC,TG,LDL-C,并升高HDL-C。富铬酵母可作为预防和治疗上述疾病的食品应用于医学和食品工业中,也可作为饲料添加剂应用于畜牧业中。     

肠道菌群代谢产物及酶对骨代谢的影响机制初探

骨质疏松症是一种常见的代谢性骨病,其发病并非是由单一因素引起,而是由多种因素所致。人们生活水平和医疗条件的提高使人们寿命延长导致老龄化现象,对应的骨质疏松症的发病率也处于上升趋势。骨质疏松在全球范围都是一个值得关注的健康问题。骨质疏松的治疗一直以基础治疗为主,包括生活方式干预和基础营养素补充,药物治疗,还有治疗后期的康复训练。但近年来愈来愈多的研究表明骨质疏松症和肠道菌群之间密切相关,因而肠道菌群已成为抗骨质疏松的一个新靶点。本文结合国内外相关文献就骨质疏松是如何受肠道菌群代谢产物及酶的影响作一综述。     

GTP结合蛋白与哺乳动物精子顶体反应过程中的信息传导

ＧＴＰ结合蛋白与哺乳动物精子顶体反应过程中的信息传导贾振宇，石其贤（浙江省医学科学院杭州３１００１３）关键词Ｇ－蛋白，信息传导，顶体反应，分子机制在多细胞动物体内，细胞通过相互间的信息交流以调节他们的生长，发育和繁殖，协调他们的不同活动和功能。细胞信...     

细胞辐射敏感性与核骨架系统

哺乳动物细胞辐射敏感性的分子学基础,是放射生物学及肿瘤生物学研究中的关键问题之一,本文以核骨架系统及其功能为基础,阐述了核骨架系统、染色质结构与细胞辐射敏感性三者间的重要相关性。     

玉米群体陕综5号果穗性状遗传特征分析

对玉米群体陕综５号果穗性状进行了综合分析,结果表明：陕综５号群体遗传基础丰富,丰产性突出,果穗各数量性状均趋正态分布。分析认为就该群体进行籽粒产量改良时,直接对行粒数、粒型、粒重选择的意义不大,而对穗行数进行选择基本不受其它性状选择的干扰。陕综５号群体的主要选择目标应是：穗行多,果穗长,结实性好。     

乌骨鸡

乌骨鸡又叫泰和鸡、武山鸡、乌鸡、白毛乌骨鸡、羊毛鸡及绒毛鸡等。它的外貌美观,肉色乌黑,柔嫩爽口,营养价值较高,为我国所特产,是驰名中外的优良药用鸡种。 乌骨鸡原产江西省井冈山地区泰和县武山西岩汪陂涂村。据记载,从明朝开始经过纯系繁殖,人工选     

人纤溶酶原激活剂的抑制物2在昆虫细胞中的表达

纤溶酶原激活剂（Plasminogen Activator,PA）对血液中蛋白水解酶的活性有重要的调节作用。纤溶酶原激活剂的抑制物（Plasminogen Activator Inhibitor,PAI）可物异地抑制PA（t-PA和u-PA）,其作用迅速,是PA活性的重要调节因子。很多证据表明,PAI、Pat和体内许多生理反应有密节的关系,如炎症^[1]、组织重塑^[2]、肿瘤生长及恶性细胞的转移^[3,4]等。目前已发现了四种类型的PAI,PAI-2是基中的一种,它可由人胎盘滋养层细胞合成,在孕妇血浆中大理存在^[5].该蛋白具有两种形式：一种分子量为43~47kDa的非糖基化形式：另一种分子量为58~60kDa的糖基化形式^[6,7].对其结构与功能深入的研究将有助于了解许多生于现象,但由于PAI-2基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中的表达都不理想,不能获得足够量的该活性蛋白,本文在以轩状病毒为载体在昆虫细胞中成功地表达了该基因。     

云南牛栏江云南鳅属鱼类二新种记述(鲤形目,爬鳅科,条鳅亚科)

记述了1992～2003年间采自云南牛栏江(属金沙江下游南侧直流)的云南鳅属Yunnanilus 2新种,横斑云南鳅Y.spanisbripes sp.nov和干河云南鳅Y.ganheensis sp.nov..两新种均具不完全的侧线,应归属侧纹云南鳅组群Y.pleurotaenia group.