炭疽芽胞杆菌BslA(260－652)蛋白的表达纯化与黏附功能鉴定

【目的】克隆表达炭疽芽胞杆菌BlsA的功能区片段并对其生物学功能进行鉴定。【方法】以炭疽芽胞杆菌A16R基因组DNA为模板PCR扩增bslA(260-652)基因片段,克隆至pET-28a(+)载体。将成功构建的重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,诱导表达后收集菌体经超声破碎后,对可溶表达部分用镍柱进行亲和层析纯化。以纯化后的蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠制备该蛋白的多抗,用ELISA和Western blot检测抗血清;使用间接免疫荧光实验和细菌黏附实验研究目标蛋白及其抗体的生物学功能。【结果】BslA(260-652)获得了可溶性表达,纯化后纯度约为87.4%。以纯化蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠制备的抗血清ELISA效价可达1∶20000。将BslA(260-652)蛋白与Hela细胞共孵育后,能够直接和Hela的细胞膜结合。细菌黏附实验表明BslA(260-652)蛋白及其相应的多抗血清都能够显著地抑制炭疽芽胞杆菌A16R对Hela细胞的黏附。【结论】大肠杆菌表达得到的炭疽芽胞杆菌BslA(260-652)蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性,为深入研究BslA蛋白在炭疽芽胞杆菌致病过程中的作用奠定实验基础。     

抗体介导的慢性排斥反应中内皮细胞基因的变化及分子机制

目前,抗体介导的慢性肾移植排斥反应难以预测,尚无有效的治疗方法。研究表明,通过对内皮细胞相关基因的分析,可以提高抗体介导的慢性肾移植排斥反应术前及术后的诊断特异性。该病的发病机制主要包括四个方面：（1）血小板在内皮细胞附近聚集凝固能力增强;（2）内皮细胞趋化炎性细胞作用增强;（3）干扰素-γ（IFN-γ）杀伤作用增强：（4）内皮修复再生能力降低。基因分析结合抗体分析有助于深化理解抗体介导的肾移植排斥反应的发病机理、提高诊疗效果、为新药开发提供新靶点,使肾移植成功率大幅提高成为可能。该篇综述将就上述内容作一介绍。     

检测中国对虾非包涵体型杆状病毒的PCR方法的建立

中国对虾非体型杆状病毒（ＰｃＮＯＢＶ）是中国大陆养殖的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）暴发性流行病－－白斑征的主要病原,与台湾流行的ＰｍＮＯＢⅢ、泰国的ＰｍＮＯＢⅡ及日本的ＲＶ－ＰＪ（＝ＰＲＤＶ）有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征。为了角ＰｃＮＯＢＶ与ＰｍＮＯＢⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系,并建立早期、敏感、特异的检测技术,利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了ＰｃＮ     

用间期荧光原位杂交检测卵巢癌细胞中X染色体数目的异常

为了探讨用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH）检测卵巢癌细胞中性染色体拷贝数目异常的实验方法及其应用价值,收集18例新鲜卵巢癌组织标本,以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA（pBamX7）探针与经处理的标本进行卵巢癌细胞核的原位杂交,分别用Avidin-FITC和Anti-avidin进行信号的检测与放大,PI复染。于Olympus AX-70型荧光显微镜下,通过WIB滤光镜观察杂交信号及其细胞核背景,并统计卵巢癌细胞核中的杂交信号颗粒数量。在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示绿色杂交信号,细胞核背景经PI复染显示桔红色;发现11/18（61%）卵巢癌标本中X染色体拷贝数增加,其余7例（39%）无拷贝数增加。X染色体拷贝数目增多在卵巢癌中有一定比例的发生频率,其在促进卵巢癌发病及其发展过程中起到某种作用,其意义值得进一步研究。