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用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告分子筛选有效的siRNA 总被引:1,自引:0,他引:1
建立一种利用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告分子筛选能有效抑制目的基因表达的siRNA的方法.以巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因为研究对象,筛选能有效沉默MIF表达的质粒载体介导的siRNA.构建拥有同一Kozak共有翻译启始序列、翻译启始密码子ATG的MIF-GFP融合表达载体pEGFP-MIF.分别将3个靶向MIF的siRNA表达质粒与pEGFP-MIF共转化HEK293细胞,在荧光显微镜下观察HEK293细胞中GFP的表达,并用荧光定量PCR检测HEK293细胞中MIF mRNA的表达水平.同时,将MIF siRNA表达质粒分别与MIF表达载体共转化HEK293细胞,用荧光定量PCR检测HEK293细胞中MIF mRNA的表达水平.定量PCR结果显示,GFP表达低的细胞中,MIF mRNA的表达也明显降低;利用pEGFP-MIF和MIF表达载体筛选到的有效MIF siRNA的结果一致.因此,建立了目的基因与GFP融合表达,以GFP作为报告分子来筛选抑制目的基因表达siRNA的方法,并为进行多个基因的有效siRNA的筛选提供解决方案. 相似文献
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目的:观测大鼠骨骼肌钝挫伤(SMBI)恢复进程中腺苷酸活化蛋白激酶α2(AMPKα2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化,探讨SMBI恢复可能生物学机制。方法:雄性Wistar大鼠48只,随机选取6只作为正常对照组;另42只大鼠重物砸伤后肢小腿建立钝挫伤模型后分7组(n=6),造模后各组分别在伤后12 h、2 d、5 d、7 d、10 d、15 d、30 d取材,检测小腿三头肌HIF-1α、AMPKα2表达的变化。结果:损伤后12 h HIF-1α、AMPKα2表达均明显升高,在伤后15 d开始回落接近正常;HIF-1α、AMPKα2表达的峰值出现在伤后2 d内,伤后5 d后表达量开始下降;除HIF-1α mRNA在伤后2 d组表达出现峰值外,其余时间点二者mRNA与蛋白表达时程变化基本一致。结论:SMBI后,HIF-1α、AMPKα2可能通过参与调解缺氧适应、肌细胞再生、能量代偿起到促进伤后恢复的作用。 相似文献
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用放射免疫法测定松果腺中 PGF_(2α)、PGE_1含量;用放射受体法测定外周血浆和垂体组织的 LH 含量。实验结果表明,在静止期用雌激素、卵巢切除和卵巢切除加用雌激素的大鼠,PG_S、LH 含量皆明显高于正常静止期含量(p<0.01);在卵巢切除加用孕激素的大鼠,PG_S、LH 含量明显低于卵巢切除大鼠含量(p<0.01);卵巢切除同时加用雌激素和孕激素的动物,则 LH 含量不增加,而松果腺中 PG_S 含量则仍然高于对照。可见外源性卵巢甾体激素的变化将导致松果腺中 PG_S 含量的变化,即小剂量雌激素可增加松果腺中 PG_S 的合成或释放,而孕激素则抑制松果腺中 PG_S 的合成或释放,同时与垂体 LH 的释放相似。松果腺中 PG_S 的作用机理,作者在讨论中指出的假设认为:松果腺中 PG_S 释放,可通过血液或脑脊液,作用于下丘脑、垂体,从而参予下丘脑-腺垂体-性腺轴的调节。 相似文献
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急性心肌梗死(以下简称AMI)是冠心病的严重临床类型之一,也是主要死亡原因之一。自70年代中期以来,美国、日本等国家由于防治水平的提高,冠心病病死率持续下降,比1968年降低27.4%。我国自70年代以后,AMI的患病数亦比以前明显降低。据北京地区统... 相似文献
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