高效表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌的发酵参数优化

运用正交试验对影响重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大肠杆菌DH5α中表达水平的因素进行了研究。结果表明,在培养阶段,培养温度是影响rhG-CSF表达的显著性因素;在诱导阶段,诱导pH是影响rhG-CSF表达的显著性因素。将实验得到的优化参数运用到NBS MPP-40发酵罐进行工程菌株的发酵培养,结果表明rhG-CSF表达量可占细菌总蛋白量的25.83％。     

土壤产铁载体细菌的筛选及其对铁氧化物的活化与利用

【背景】土壤中铁主要以难溶态铁氧化物的形式存在,有效性较低,产铁载体细菌对铁氧化物的活化是提高铁利用效率的有效途径。【目的】从林木土壤筛选产铁载体细菌,并观察菌株对难溶性铁氧化物的利用效应,可为土壤微生物资源开发及其在养分调控中的作用提供理论依据。【方法】通过CAS检测法从林木根系附近表层土壤中分离产铁载体细菌,借助生物培养实验分析温度和pH对微生物生长和铁载体产生的影响,通过振荡平衡实验,探究细菌产铁载体对铁氧化物的活化效应。【结果】通过CAS检测法从林木根系附近表层土壤中分离得到12株产铁载体细菌,16S rRNA基因扩增子测序初步鉴定结果显示筛选细菌均为假单胞菌属。选取铁载体产生能力和生长活性较高的两株细菌ARSB02和CNRSB01作为重点研究对象,结果显示,不同条件下CNRSB01的生物量和铁载体产量均高于菌株ARSB02,22 h时菌株ARSB02和CNRSB01的铁载体活性单位分别达到67.07%和84.60%。pH 5.0-8.0的范围内两株细菌可以保持较好的铁载体产生能力,菌株ARSB02和CNRSB01在pH7.0时铁载体产生能力最强,铁载体活性单位分别达到38.9...     

超氧化物歧化酶活性的肾上腺素自氧化紫外测定法

实验表明肾上腺素自氧化过程的325nm吸收峰远比480nm吸收峰高和稳定,并用超氧化物歧化酶(SOD)标准样品和人红细胞样品建立了SOD活性的肾上腺素自氧化紫外分光测定法(A₃₂₅)。方法简便、快速,比用480nm的方法更为灵敏,并有良好的定量性和重复性。     

EPO对高脂喂养小鼠棕色脂肪组织PRDM16、FGF21表达及STAT3磷酸化水平的影响

目的：探索促红细胞生成素（EPO）对高脂饲料（HFD）喂养小鼠血糖和血浆胰岛素水平、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、糖耐量,以及棕色脂肪组织中含PR结构域蛋白16（PRDM16）、信号转导与转录激活因子3（STAT3）磷酸化水平（p-STAT3/STAT3）、成纤维细胞生长因子21（FGF21）mRNA以及蛋白质表达的影响,为肥胖及其并发症的发生机制提供线索。方法：20只高脂饲料喂养的C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组（HFD-Con）和EPO组（HFD-EPO）,两组分别腹腔注射生理盐水和EPO（200 IU/kg）,每周3次,连续4周。4周后检测两组动物的体重、血糖与血浆胰岛素水平、HOMA-IR及糖耐量的变化;分别使用实时定量PCR法和Western blot法检测棕色脂肪组织中PRDM16、STAT3、FGF21 mRNA和蛋白质水平。结果：腹腔注射EPO 4周后,HFD-EPO组小鼠体重为（26.65±0.85）g,HFD-Con组体重为（31.50±1.60）g,P<0.01。HFD-Con组血糖为（91.06±9.86）mg/dl,HFD-EPO组为（62.79±8.09）mg/dl,P<0.01;HFD-EPO组小鼠血浆胰岛素水平为（10.56±1.06）μU/ml,HFD-Con组为（13.2±1.1）μU/ml,P<0.01。与HFD-Con组比较,HFD-EPO组的糖耐量水平显著改善,胰岛素抵抗指数下降;HFD-EPO组动物棕色脂肪组织中PRDM16、FGF21mRNA以及蛋白质表达,p-STAT/STAT3水平均显著增加,两组小鼠肝脏中FGF21 mRNA含量、血浆中FGF21含量无明显差异。结论：EPO可能通过增加棕色脂肪组织中PRDM16表达促进棕色脂肪组织的分化,降低高脂喂养小鼠的血糖水平、改善高脂喂养小鼠的糖代谢状态。     

不同黄腐酸用量对‘红将军’苹果产量、品质和15N-尿素去向的影响

以15年生红将军/八棱海棠为试材,运用¹⁵N同位素示踪技术,设置单施尿素(CK)及尿素配施不同用量黄腐酸处理(黄腐酸用量分别为75、150、300和450 kg·hm^-2,分别以NF₁、NF₂、NF₃和NF₄表示),研究不同黄腐酸用量对苹果植株¹⁵N-尿素吸收、利用、残留、损失及果实产量和品质的影响.结果表明: 至果实成熟期,苹果根系、一年生枝和叶片的Ndff值(植株器官从肥料中吸收分配到的¹⁵N量对该器官全氮量的贡献率)均为NF₃>NF₄>NF₂>NF₁>CK,且各处理间差异显著.植株全氮量和¹⁵N吸收量均以NF₃处理最大,其次为NF₄处理,CK处理最低.与CK处理相比,NF₁、NF₂、NF₃和NF₄处理¹⁵N利用率分别提高了14.2%、33.5%、64.2%和50.0%,而¹⁵N损失率分别降低了9.1%、18.5%、37.1%和28.7%.不同处理土壤¹⁵N残留量不同.配施黄腐酸处理0～60 cm土层¹⁵N残留量显著高于CK处理,其中以NF₃处理最多,而在60～100 cm土层显著低于CK处理.NF₃处理单株产量和纯收益较CK处理增幅最大,分别为15.8%和20.2%,其次为NF₄处理,同时,NF₃处理果实硬度、可溶性固形物含量和糖酸比均达到最高水平.通过对果实产量和氮素利用率与黄腐酸施用量进行拟合分析,得出本试验条件下适宜的黄腐酸用量为326.41～350.61 kg·hm^-2.     

滨海沙地人工林树种水分利用效率和叶片养分浓度比较及其关系分析

以福建省福州市滨海后沿沙地人工营造的湿地松、木麻黄、尾巨桉、肯氏相思和纹荚相思人工林为研究对象,运用稳定碳同位素法测定植物水分利用效率,探索叶片氮、磷养分状况与水分利用效率之间的差异及相互关系。结果表明:(1)湿地松和肯氏相思的叶片δ13 C均与尾巨桉差异显著(P0.05),但湿地松、木麻黄、肯氏相思、纹荚相思之间的叶片δ13 C均无显著差异;肯氏相思、纹荚相思的叶片δ15 N均显著高于湿地松、木麻黄和尾巨桉。(2)不同树种水分利用效率大小依次为:湿地松肯氏相思木麻黄纹荚相思尾巨桉,且湿地松叶片的WUE显著高于尾巨桉36.87%,而与其他树种的水分利用效率均无显著差异。(3)各树种叶片氮浓度大小依次为:肯氏相思纹荚相思尾巨桉木麻黄湿地松,但仅肯氏相思和纹荚相思与湿地松之间差异达到显著水平;各树种叶片磷浓度大小依次为:尾巨桉肯氏相思纹荚相思湿地松木麻黄,其中尾巨桉与湿地松、木麻黄、纹荚相思之间差异显著;木麻黄和纹荚相思人工林叶片的N/P显著高于尾巨桉人工林,其余树种之间的叶片N/P均无显著差异。(4)叶片δ13 C与叶片N浓度呈显著二次曲线相关关系,叶片δ15 N与叶片N浓度呈极显著线性正相关关系(P0.01)。研究发现,滨海沙地不同树种人工林间水分利用效率、叶片氮浓度、磷浓度、N/P均存在显著差异,水分利用效率与叶片氮浓度、磷浓度均呈显著负相关关系,氮、磷含量是影响滨海沙地沿海防护林树种水分利用效率的重要因子。     

不同黄腐酸用量对‘红将军’苹果产量、品质和15N-尿素去向的影响

以15年生红将军/八棱海棠为试材,运用¹⁵N同位素示踪技术,设置单施尿素(CK)及尿素配施不同用量黄腐酸处理(黄腐酸用量分别为75、150、300和450 kg·hm^-2,分别以NF₁、NF₂、NF₃和NF₄表示),研究不同黄腐酸用量对苹果植株¹⁵N-尿素吸收、利用、残留、损失及果实产量和品质的影响.结果表明: 至果实成熟期,苹果根系、一年生枝和叶片的Ndff值(植株器官从肥料中吸收分配到的¹⁵N量对该器官全氮量的贡献率)均为NF₃>NF₄>NF₂>NF₁>CK,且各处理间差异显著.植株全氮量和¹⁵N吸收量均以NF₃处理最大,其次为NF₄处理,CK处理最低.与CK处理相比,NF₁、NF₂、NF₃和NF₄处理¹⁵N利用率分别提高了14.2%、33.5%、64.2%和50.0%,而¹⁵N损失率分别降低了9.1%、18.5%、37.1%和28.7%.不同处理土壤¹⁵N残留量不同.配施黄腐酸处理0～60 cm土层¹⁵N残留量显著高于CK处理,其中以NF₃处理最多,而在60～100 cm土层显著低于CK处理.NF₃处理单株产量和纯收益较CK处理增幅最大,分别为15.8%和20.2%,其次为NF₄处理,同时,NF₃处理果实硬度、可溶性固形物含量和糖酸比均达到最高水平.通过对果实产量和氮素利用率与黄腐酸施用量进行拟合分析,得出本试验条件下适宜的黄腐酸用量为326.41～350.61 kg·hm^-2.     

供钾水平对苹果砧木M9T337幼苗生长、光合特性与15N、13C吸收利用的影响

以苹果M9T337幼苗为试材进行水培试验,采用¹⁵N和¹³C同位素示踪技术,研究不同供钾水平(0、3、6、9、12 mmol·L^-1,分别以K₀、K₁、K₂、K₃、K₄表示)对M9T337幼苗生长、光合特性与¹⁵N、¹³C吸收利用的影响.结果表明: K₂处理M9T337幼苗各器官干质量、根系长度、根系表面积、根尖数和根系活力均显著高于其他处理.叶片净光合速率(P_n)随着供钾水平的升高先上升后下降,在K₂处理时达到最高值,为15.5 μmol CO₂·m^-2·s^-1.处理30 d后,硝酸还原酶(NR)和碳代谢酶活性均以K₂处理最高,K₀处理最低.随着供钾水平的提高,各处理幼苗的¹³C积累量呈先升高后降低的趋势,且在K₂处理时各器官¹³C分配率最均衡.各处理间¹⁵N吸收量和利用率差异显著,K₂处理下幼苗的¹⁵N吸收量和利用率最高,分别为16.11 mg和17.9％,是K₀处理的3.0倍.因此,钾素供应过低或过高均抑制幼苗根系生长和叶片光合作用,不利于植株碳氮吸收,而适宜的钾素供应水平可以提高根系活力和净光合速率,增强硝酸还原酶(NR)和碳代谢酶活性,从而促进碳氮代谢.     

氮水平对苹果叶片13C光合产物和15N向果实转移分配的影响

以6年生‘烟富3’/M26/平邑甜茶苹果为试材,采用C、N双标记技术,研究在果实膨大后期用不同尿素浓度水溶液(N 0%、0.6%、1.2%、1.8%、2.4%,分别用CK、N₁、N₂、N₃、N₄表示)涂抹果实周围20 cm范围内叶片对叶片¹³C同化能力及¹³C光合产物、¹⁵N向果实转移分配的影响.结果表明: 随着尿素浓度的增加,叶片的叶绿素含量、氮含量、光合速率、山梨醇和蔗糖含量、6-磷酸山梨醇脱氢酶(S6PDH)和蔗糖磷酸合酶(SPS)活性及¹³C同化能力均先升高后降低,均以1.8%尿素涂抹处理最高,清水对照最低.¹³C自留量(自身叶片+自身新梢)以清水对照最高,为81.6%,1.8%尿素涂抹处理最低,为63.5%.向外输出的¹³C光合产物主要分布在标记果实,其次是未标记多年生枝,未标记叶片最低.果实¹³C吸收量随着尿素浓度增加呈先升高后降低趋势,以1.8%尿素涂抹处理最高(1.21 mg·g^-1),清水对照最低(0.51 mg·g^-1);果实¹⁵N吸收量随着尿素浓度增加呈持续升高趋势.表明尿素水溶液叶施可不同程度地提高叶片光合产物和氮素向果实转移分配的能力,以1.8%尿素涂抹处理叶片光合产物向果实转移分配能力最强,同时避免了过多的氮素向果实的输入.