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蓖麻毒素对肝癌细胞有丝分裂原激活蛋白激酶的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
为进一步探讨蓖麻毒素的毒作用机理 ,采用 Western印迹和免疫组化方法研究蓖麻毒素对人肝癌细胞内磷酸化状态和有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)的影响 .其结果表明 :蓖麻毒素能够影响细胞内的磷酸化状态 ,并能激活细胞内的有丝分裂原激活蛋白激酶 ,对 MAPK的激活有时间依赖性和剂量依赖性 . MAPK信号传导途径参与了蓖麻毒素对肝癌细胞的毒作用 . 相似文献
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肺癌细胞学亚型巴氏染色的计算机图像色度学定量分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用计算机图像处理技术,对痰涂片中巴氏染色的角化性鳞癌细胞(KSCC)、非角化性鳞癌细胞(NKSCC)和腺癌细胞(ACC)胞浆进行了色度学定量分析。测试参数为红(R)、绿(G)、蓝(B)三基包含量和R、G、B的三色系数,同时还测算了胞浆的色度、饱和度、亮度和灰度,并进行了逐步判别分析。结果表明:KSCC的R、G、B及其三色系数、色度、饱和度与NKSCC和ACC相比差异非常显著;三基色的改变较灰度敏感.用三色系数、色度、饱和度对KSCC与NKSCC、KSCC与ACC进行计算机判别,准确度可达95.3%和97.1%。这些结果提示:三基色、三色系数及色度、饱和度分析对判别KSCC与NKSCC、KSCC与ACC有重要价值。对有关问题进行了讨论。 相似文献
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筛选差异表达基因和蛋白质的方法进展 总被引:9,自引:1,他引:9
分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能,更有助于揭示某些疾病的发生机理.目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法(differential display RT-PCR,DDRT-PCR)、消减杂交法(subtractive hybridization,SH)、基因芯片技术(DNA chip technique)和基因表达的系统分析(serial analysis of gene expression,SAGE)等,其中消减杂交法中又先后建立了代表性差异分析技术(representational difference analysis,RDA)、抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)和获得全长基因的消减杂交法(full-length-gene-obtainable subtractive hybridization).筛选差异表达蛋白质的方法主要有双向电泳技术(two-dimentional gel electrophoresis)和噬菌体全套抗体库技术(phage display antibody repertoire library technique).这些方法各有特点,各有利弊,研究者可根据自己的需要选择适合于自己的方法. 相似文献
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目的:观察精子数目异常与小Y染色体及内分泌性腺激素水平。方法:对262名少精及无精症患者检测染色体,并对其中11例小Y染色体及随机抽取的15例Y染色体正常的患者运用磁性分离酶免疫测定法分别检测性腺激素。结果:小Y染色体检出率为4.19%(11/262),其内分泌性腺激素均呈高卵泡刺激素、高黄体生成素和低睾酮水平,与Y染色体正常的无精及少精症患者相比较.差异有显著性(P〈0.05)。而小Y染色体不同精子数组各内分泌性腺激素比较,差异无显著性(P〉0.05)。结论:精子数目畀常可能与小Y染色体有关,小Y染色体基因改变可能是导致其内分泌性腺激素的变化因素。 相似文献
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OS-9基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备 总被引:6,自引:0,他引:6
OS 9基因广泛表达于人体多种组织 ,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关 .为获得可溶性表达的OS 9蛋白 ,制备多克隆抗体 ,深入了解OS 9基因的功能 ,将OS 9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET2 8a中 ,IPTG诱导 ,利用金属螯合亲和层析 (MCAC)进行纯化 ,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量 .免疫家兔制备多克隆抗体 ,利用间接ELISA法检测抗体效价 ,Western印迹检测抗体特异性 .经表达形式分析证明 ,融合蛋白大部分可溶 .薄层扫描分析纯度可达 90 %以上 ,Bradford法检测蛋白浓度约 0 1mg ml.抗血清效价可达 1∶32 0 0以上 ,Western印迹检测证明抗体特异性良好 .经诱导表达及纯化制备出可溶的纯度较高的OS 9蛋白产物 ,并获得高效价特异性良好的多克隆抗体 相似文献
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人源性抗TNFα小分子抗体的改构和分析 总被引:6,自引:0,他引:6
在获得人源性抗人TNF α单链抗体 (ScFv)基因序列的基础上 ,对ScFv的连接肽部分进行基因改造 ,并构建了Fab抗体基因。改构前后的ScFv分别重组入表达载体pBV2 2 0 ,经 42℃热诱导 ,在E .coliDH5α中表达了ScFv蛋白 ,得到分子量约为 30kD的重组蛋白质 ,改构前后ScFv的表达量分别占菌体总蛋白质的 6 .5 %和13 .8%。同时构建Fab可溶性表达载体并转化非抑制型菌株HB2 15 1,经IPTG诱导 ,在约 5 0kD分子量处呈现一条新生蛋白质条带。从大肠杆菌裂解液中对ScFv进行了复性和层析纯化 ,对Fab基因的表达产物进行了亲和层析纯化 ,并证实 :(1)改构后ScFv在大肠杆菌中的表达量有所提高 ;(2 )改构前后的ScFv与Fab均具有与hTNF α相结合的活性 ,具有GGGGS连接肽的ScFv与hTNF α的亲和常数为 6 .70× 10 4 (mol/L) -1,而改构后具有(GGGGS) 3 连接肽的ScFv的亲和常数提高为 7.2 7× 10 5(mol/L) -1,Fab与hTNF α的亲和常数为 7.6 1× 10 5(mol/L) -1,Fab与改构后ScFv的亲和力无明显差异 ;(3)ScFv与Fab均有中和hTNF α细胞毒的作用 ,具有(GGGGS) 3 连接肽的ScFv与Fab的中和活性基本相同 ,但均明显低于一株鼠源性单抗 相似文献
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一种用少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库的方法 总被引:1,自引:1,他引:1
为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库.在文库中随机挑取的22个克隆中,1 000 bp以上的片段有7个,占31.8%,750 bp以上有15个,占68.2%.所得cDNA片段较大,可以满足下一步研究需要.改良消减杂交法结合选择性PCR法可以从少量标本中快速有效地获得大片段高质量的消减cDNA文库. 相似文献
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目的:在毕赤酵母中表达融合Myc—His标签的靶向性甲基化酶B1—3a并进行鉴定。方法:以含有B1—3a基因的pcDNA4.0-myc/his质粒为模板,通过PCR扩增获得融合有myc/his标签序列的目的区段B1—3a基因,然后克隆入表达载体pPIC3-5k;电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115,经G418筛选后进行甲醇诱导表达,并以SDS—PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中可见与目的蛋白相对分子质量(50000)相符的条带,该条带可被Myc标签单克隆抗体特异识别。结论:正确构建了靶向性甲基化酶Bl-3a的酵母表达载体,靶向性甲基化酶能够在毕赤酵母中成功表达。 相似文献