预防仔猪腹泻无抗性基因工程菌株的构建

以原来含热不稳定肠毒素B亚单位基因质粒DNA为载体,插入lacZ基因,构建了一个既能表达LT-B亚单位又能表达B-半乳糖苷酶的含四环索抗性基因的重组体。在该重组DNA的四环素抗性基因内再插入K 88粘附因子抗原基因,从而灭活了四环素抗性基因。经测定该重组体能表达LT－B和K88两种抗原,lacZ基因取代四环素抗性基因,成为良好筛选标记。所构建的重组质粒能稳定存在。     

水稻染色体标本制备的风油精法

水稻的染色体较小,不同的染色体在形态上较难区分。常规的压片技术由于很难使染色体分散,且也不能完全排除细胞质的干扰,因而很不适用于水稻染色体核型分析及显带。Kurata 等(1978)采用酶解与火焰干燥技术制备水稻染色体标本,获得清晰的染色体图象,从而成功地进行了水稻染色体的核型分析。陈瑞阳等(1982)参照人类染色体     

人类基因命名的规则和过程

1 .概述如今 ,至少已有 1 0 0 0 0多条人类基因被发现 ,而且每天约有 9条新基因登录。在下一个 1 0年中 ,人类的所有基因将被发现。这些基因的命名往往在它的结构功能阐明以前就要进行 ,因此如果要求基因的命名能表明其功能就不可能。而且 ,当一个基因的功能已相当清楚时 ,一些习用的命名仍在使用 ,这就容易引起误解。白介素转化酶相关蛋白酶就是一个典型的例子。按命名者的偏好 ,这个酶曾被使用过ＦＩＬＣＥ、ＭＡＣＨ、Ｍｃｈ5、ＩＣＥｒｅｌⅡ、ＩＣＨ 2和ＴＸ等名字 ,现在则统一命名为ｃａｓｐａｓｅ ,依据该酶是一个在“天冬氨酸后切断…     

猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡

【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-?ORF3 (orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att (携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、 DNA断裂的原位末端标记法[terminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-?ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-?ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B (HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-?ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。     

关于系统动物学与物种进化过程的论争

近十年来,在国际生物学界(包括古生物学界),正展开着一场关于系统学(“分类学”)的基本原理和方法论的学术争论。生物学各分支学科,特别在分类学、生物地理学与古生物学界,争论最为热烈,但也涉及到胚胎学,生理学与生物化学,及数学生物等学科中,物种形成和生物进化史方面的一些基本问题。所以,争辩的激烈程度和涉及范围之广,是近半个世纪来所未见的。有关争论的文章,在生物科学的许多刊物中常占很大比重。以美国系统动物学会出版的《系统动物学报》     

测定RNA序列的化学裂解直读法

1979年Peattie在Maxam和Gilbert的DNA化学裂解序列测定直读法的基础上,建立了RNA的化学裂解直读法。该法利用几种不同化学试剂,在~(32)P末端标记的RNA链上进行碱基特异性的、限制性的修饰。经苯胺作用后,RNA分子在修饰部位断裂。凝胶电泳分离和放射自显影后,可以从G.A>G、C>U和U四组区带上直接读出RNA的序列。该法快速、微量、不需特殊酶试剂。不受被测RNA二级结构影响,因而比较准确,现已逐     

中国圆额盲蝽属一新种(半翅目:盲蝽科)

圆额盲蝽属Leptopterna为全北区广泛分布的类群。该属昆虫体为长形,被覆直立的长毛;体色由淡黄白或黄褐到橙褐色;头部在两复眼间有暗色长形纵斑,此斑在额部常分叉为二;额圆,略向前突出,但不盖住唇基;复眼与前胸背板的距离小于复眼宽度;雄虫前翅完整,雌虫则前翅退化短缩;足被覆浓密的长毛。雄性阳茎有两个大形刺     

鸭类mtDNA限制性酶切图谱的比较研究

本文报道了番鸭、建昌鸭、杂交鸭(♀建昌鸭×(?)番鸭)和北京鸭的mtDNA限制性酶切图谱。限制性内切酶HindⅢ、PsiⅠ、BamHⅠ和EcoRⅠ在番鸭mtDNA上分别有(?)、2、2和1个酶切位点。建昌鸭、杂交鸭和北京鸭的mtDNA限制性酶切图谱完全一致。以上4种内切酶在这3种鸭子mtDNA上分别有5、4、2和1个位点。比较研究4种限制性图谱,我们得到三点结论:(1)鸭类mtDN种间差异程度很高;(2)家鸭很可能不存在mtDNA种内异质现象;(3)鸭类mtDNA为母性遗传。     

黄素氧还蛋白参与的固氮链电子传递

棕色固氮菌中电子载体Fld直接向固氮酶铁蛋白传递电子。Fld_(ox)至Fld_R是双电子二步还原反应,极谱半波电位分别为-210、-550 mV。Fld_(ox)至Fld_(SR)的中点电位为-280 mV,Fld_(SR)至Fld_R为-500mV。铁蛋白中点电位为-256mV,加MgATP后为-390 mV。Fld_R与铁蛋白ox组成的电池电动势为244mV,电子传递可自发进行,反应的J△G~o为-23KJ/摩尔,铁蛋白被Fld_R还原的K_a=1.3×120~4,加入MgATP后△G~o为-10.6KJ/摩尔,K_a=72。因此,未加入MgATP时电子传递反应更易进行。     

类脂过氧化对竹红菌甲素引起膜蛋白光敏交联的影响

本文研究了丙二醛与红细胞膜温育后所形成的交联。当丙二醛浓度在5×10~-4mol/L以上时,膜蛋白发生交联,并且在460nm处有荧光特征峰出现。而甲素光敏所致膜蛋白的交联,在460nm处没有荧光峰,光敏所产生的内源丙二醛量很少,不足以引起红细胞膜反应形成交联。我们还研究了BHT和Vit E两种抗氧化剂对甲素光敏作用的影响。BHT能抑制类脂过氧化,不能抑制膜蛋白巯基的变化和膜蛋白的交联。而Vit E仅不能抑制膜蛋白的交联。以上结果均说明甲素光敏所致膜类脂过氧化是不参与膜蛋白交联的。