广西地不容种质资源的ISSR分析

采用简单序列重复区间扩增(ISSR)分子标记技术对广西地不容3个野生居群和1个引种居群共92个个体进行了遗传多样性研究。10个引物共扩增出61条带,其中60条具多态性,多态性位点百分率为98.36%。4个居群多态性百分率在73.77%～86.89%。Nei’s基因多样性指数(H)为0.3379,Shannon信息多样性指数(Ⅰ)为0.5055。3个野生居群Nei’s遗传分化系数(Gst)表明:83.87%遗传变异分布在居群内,16.13%的遗传变异分布在居群间。引种居群与3个野生居群间的遗传一致度达0.8846。引种居群有效地保护了广西地不容的遗传多样性。     

单启动子p53/p14ARF非融合表达载体的构建及其在MG-63中的表达鉴定

目的 构建单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的影响及其功能初探.方法 将p53与p14ARF全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,并通过PCR、酶切鉴定重组质粒.用Lipofectamin 2000将野生型pIRES-p53-p14ARF真核表达载体转染MG-63细胞,48 h后采用axiovent200型倒置显微镜、荧光免疫细胞化学,观察其在细胞内的表达并初步探究其抑瘤功能.结果 成功构建出含p53与p14ARF全长基因片段的单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,酶切鉴定质粒大小、位点均符合实验设计.荧光免疫细胞化学检测显示p53阳性细胞同时也表现为p14ARF免疫反应阳性,转染后瘤细胞可见散在凋亡现象.结论 pIRES-p53-p14ARF非融合表达载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功.     

施氏鲟仔鱼发育圾异速生长模型

施氏鲟仔鱼的生长发育可分为两个时期:卵黄囊期(或称为自由胚期),即从刚出膜(0日龄,10.17±0.63 mm)到初次开口(9日龄,18.93±0.74 mm);晚期,从开口摄食至器官发育基本完全(38日龄,41.89±5.09 mm).卵黄囊期仔鱼的感觉、摄食、呼吸、游泳等器官快速分化;晚期仔鱼各骨板分化并发育,在形态上逐渐完成向成鱼的转变.对施氏鲟仔鱼异速生长进行的研究表明,仔鱼许多关键器官均存在异速生长现象,如眼径、口宽、尾鳍长、胸鳍长分别在2日龄、8~9日龄、10日龄、11日龄出现生长拐点,拐点之前器官快速生长,拐点之后生长速度减慢甚至近似等速生长.施氏鲟仔鱼各器官呈现出协调和快速发育的特征,随着重要的感觉、摄食、呼吸、游泳等器官的发育和完善,仔鱼快速地具备了躲避敌害和摄食的能力,其生存能力大大提高.     

森林草莓MYB家族鉴定及生物信息学分析

为研究草莓MYB基因家族,采用生物信息学方法检索森林草莓(Fragaria vesca L.)基因组中MYB基因,并对其基因结构、蛋白保守结构域、染色体定位、基因进化及花药发育过程中表达水平进行分析。结果表明,草莓基因组中可能含有105个R2R3-MYB、4个MYB3R、1个MYB4R基因,它们不均匀分布在7条草莓染色体上,其中5号染色体上数量最多为26个,部分基因在染色体上形成基因簇。理化分析发现这些MYB蛋白长度和大小差异较大,但均具有保守的R2和R3型结构域,R重复单元均含有特征性的氨基酸,包括最保守的有序间隔出现的色氨酸(W)残基。通过系统进化关系和基因结构信息,草莓MYB基因家族被分成了34个亚组(A1～A34),同时利用拟南芥基因功能预测草莓中对应的直系同源基因的功能,结果表明草莓MYB基因家族参与调控黄酮物质合成、细胞发育、生物/非生物胁迫。花药发育过程中表达水平分析发现FvMYB2、FvMYB85、FvMYB74、FvMYB28在花药发育的5个时期中表达量逐渐升高,尤其是发育后期表达量较高,表明这些基因可能调控花药发育过程。本研究结果为草莓MYB基因家族的功能研究提供参考。     

口腔支持干预提高早产儿喂养效果

为了观察口腔支持干预在早产儿喂养中的应用效果,本研究选取2016年6月至2017年12月在长沙市口腔医院接受治疗的早产儿为研究对象,并根据其喂养方式分为对照组和观察组。对照组给予常规喂养,观察组在此基础上给予口腔支持干预。观察两组早产儿喂养效果、体重增长、住院时间的差异,比较两组早产儿营养指标和预后的差异。结果表明,观察组早产儿的开始经口喂养效率、摄入奶量比和完全经口喂养效率均高于对照组(t=11.060, 3.324, 5.934, p<0.001);观察组早产儿的出院时体重、体重增长率均高于对照组(t=8.844, 3.577, p<0.001),住院时间较对照组短(t=9.515, p<0.001);两组早产儿干预前的红细胞(red blood cell,RBC)、血清白蛋白(blood albumin, ALB)和前白蛋白(prealbumin, PA)水平无差别,干预后,观察组早产儿的RBC、ALB和PA水平高于对照组(t=1.951, 7.999, 11.724, p<0.05);观察组早产儿吐奶、吸吮吞咽无力和便秘发生率低于对照组(χ~2=4.891, p=0.027)。口腔支持干预在早产儿喂养中的应用效果较好,可明显提高其喂养效率,改善营养状况,具有良好的临床应用价值。     

丹参中尿黑酸茄尼酯转移酶基因的克隆及其生物信息学分析

尿黑酸茄尼酯转移酶(homogentisate solanesyltransferase, HST)是一种尿黑酸异戊烯基转移酶(HPT),催化尿黑酸和茄尼醇焦磷酸的聚合反应,为植物中质体醌9 (PQ_9)合成的关键酶。本实验利用RACE技术克隆了丹参中HST基因cDNA,将其命名为SmHST。SmHST的开放阅读框(ORF)为1 137 bp,编码378个氨基酸残基,蛋白大小为41.75 kD,等电点(PI)为9.68。SmHST为膜结合蛋白,具有复杂的高级结构。亚细胞定位预测该蛋白定位于叶绿体中,这和PQ_9合成部位是一致的。Real-time PCR分析SmHST基因在丹参嫩叶中表达量最高。SmHST响应PEG6000和Me JA处理,说明SmHST可能参与了丹参的抗逆过程。     

Biolog微生物鉴定系统中接种液的替代

目的：采用市售试剂自行配制Biolog菌种鉴定接种液,代替Biolog公司的原装接种液,用以降低菌种鉴定成本。方法：用实验室自行配制的接种液和Biolog公司的接种液,对120株细菌和50株丝状真菌进行Biolog微生物系统鉴定,对比鉴定结果。结果：用2种接种液进行菌种鉴定时,鉴定板上部分孔的颜色反应不同,但鉴定结果一致。结论：自行配制的接种液可以满足菌株鉴定的要求,具有推广意义。     

弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法建立

采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因, 即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联, 得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为FT)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6%。FT的开放阅读框架全长3225 bp, 编码1074个氨基酸残基, 预测分子量为120.4 kDa。将FT亚克隆至表达载体pET-22b(+)中, 再转化至E. coli BL21 (DE3)中进行表达, 经SDS-PAEG分析, 融合蛋白分子量与预测的相符。终浓度为1mmol/L的IPTG, 37 ℃诱导4 h, 融合毒素蛋白表达量最高, 经薄层扫描分析, 此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49%。融合毒素蛋白包涵体经纯化, 免疫豚鼠制备血清抗体, 确定间接ELISA的最佳工作条件, 并进行敏感性、特异性、重复性及模拟样品检测试验, 建立了食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法。     

口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立

目的：利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法：首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果： 回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R =0.99,检测范围为5~1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论：该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。     

人工养殖中华鲟幼鱼摄食不同饵料的转化效率与生长特性

利用水蚯蚓与人工饲料分别投喂7月龄中华鲟(Acipenser sinensis)幼鱼,研究不同饵料对中华鲟幼鱼转化效率与生长特性的影响.结果表明:经过60 d生长,水蚯蚓组、人工饲料组中华鲟幼鱼的平均体长分别从177.0、191.6 mm增至216.6、332.5 mm,体质量分别从32.73、44.39 g增至58.27、264.71 g;水蚯蚓组、人工饲料组中华鲟幼鱼的饵料转化率分别为6.67～39.33、0.89～1.26,特定生长率分别为0.19%～2.33%、1.38%～3.94%.生长效率分别为2.54%～14.99%、79.56%～204.44%;人工饲料组中华鲟幼鱼的生长速度快于水蚯蚓组,肥满度大于水蚯蚓组;2个试验组中华鲟幼鱼的体长与体质量均呈幂函数关系,各阶段幂指数b值均小于3,表明中华鲟幼鱼为异速生长;水蚯蚓组中华鲟幼鱼肌肉的水分湿质量含量为82.23%±0.79%,蛋白干质量含量为62.79%±1.34%,均略比人工饲料组高;综合饵料转化效率与各项生长指标,表明人工饲料比水蚯蚓更适宜作为中华鲟幼鱼阶段的人工养殖饵料.