基于翻转课堂教学模式的典型生物化学实验的设计研究

翻转课堂是以学生为中心,由课前任务、课堂指导和课后反馈组成,可以有效地调动学生学习的积极性。以"酵母蔗糖酶的提取与比活力测定"、"蔗糖酶进程曲线的制作"以及"固定化活性干酵母细胞的制备与转化糖的生产"三个典型的生物化学实验为研究对象,利用翻转课堂对其进行教学目标的探索和设计,为增强学生的学习热情、激发学习动力、提高科研动手能力及开发其创新思维打下良好的基础。     

流感病毒A/PR/8/34重配母本株高免疫原性HA蛋白制备及鉴定

制备流感病毒经典重配过程中所需的A/PR/8/34母本株血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)抗血清。A/PR/8/34流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化。5%~20%蔗糖连续密度梯度离心法纯化HA蛋白。单向免疫扩散法(Single Radial Immunodiffusion,SRID)筛选目的蛋白。SDS-PAGE法鉴定目的蛋白。纯化的A/PR/8/34 HA蛋白免疫兔子制备抗血清,血凝抑制试验(Hemoglutination Inhibition Assay,HI)测定HA抗血清效价,经SRID法鉴定HA抗血清纯度。成功制备了高免疫原性A/PR/8/34HA蛋白;兔抗血清HI滴度可达10240,SRID法鉴定为高纯度HA抗血清。制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础。     

A novel recombinant adeno-associated virus vector packaging system with HSV-1 amplicon providing helper functions

A novel packaging system for producing recombinant adeno-associated virus (rAAV) vector was described. Instead of the conventional method for rAAV production by two-plasmid co-transfection followed by superinfection with adenovirus 5, an HSV-1 amplicon system expressing AAV-2 rep and cap genes from their native promoters was used to provide complete helper functions for rAAV replicating and packaging. This HSV-1 ampticon stock consisted of two kinds of infectious HSV-1 virions, a replicating-defective HSV-1 amplicon pseudovirus harboring multi-copies of AAV-2 rep and cap gene and a temperature-sensitive HSV-1 mutant strain ts-KOS. High-titer rAAV was generated with this new packaging system. This packaging system gives a simple and scaleable process for rAAV production.     

高温敏感不育水稻育性敏感期幼穗和叶片中的总RNA含量变化(简报)

在育性敏感的两个时期──花粉母细胞形成期和花粉母细胞减数分裂期,１３５６Ｓ和衡农Ｓ－２不育株幼穗的总ＲＮ Ａ含量极显著低于可育株,分别是可育株的４２．３％、４６．５％、４１．８％和４０．１％,这必然影响花粉母细胞形成及分裂所必需的蛋白质的合成,以致花粉不能正常发育,最终导致花粉败育。     

甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单抗杂交瘤细胞株的制备与初步鉴定

目的:建立具有高特异、高效价的甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白(HA)单抗的杂交瘤细胞株。方法:以纯化的昆虫杆状病毒表达的甲型H1N1流感病毒HA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blot分析单抗的特性和特异性。结果:获得6株甲型H1N1流感HA抗原特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗原肽库ELISA检测结果表明其中3株(1E12,3F12,1C11)单抗只与甲型H1N1流感HA抗原肽库反应,不与H5N1病毒HA抗原肽库反应;Western blot分析表明,单抗1B3只特异识别甲型H1N1流感HA抗原,而与其他季节性甲流病毒(H1,H3)及人禽流感H5N1病毒不反应。结论:所获杂交瘤细胞株特异性强,效价高,分泌抗体性能稳定,为分析甲型H1N1流感病毒抗原性位点、建立诊断试剂奠定了基础。     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的：研究紫花牡荆素（Casticin）对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法：用终浓度为0、0.5、1.0、2.0umol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24、48h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果：MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加;Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;RT-PCR结果显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达。结论：Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。     

人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究

人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达;利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对(GSSG/GSH)、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案。研究结果表明:37℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kD的重组人源溶菌酶的表达,包涵体表达量约为380 mg/L(湿重)。包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法。进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度对人源溶菌酶复性效果的影响,表明当复性液中同时添加浓度比为1∶2的GSSG/GSH、4 mmol/L精氨酸和6%甘油时,复性后人源溶菌酶的最佳比活力值为1170 U/mg,显著高于3种复性物均不加时溶菌酶335 U/mg的比活力值,但低于溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值。成功地将人源溶菌酶基因在大肠杆菌中表达,并通过包涵体复性体系成功获得高活性重组人源溶菌酶。     

共轭亚油酸对草鱼生长、肌肉成分、谷草转氨酶及谷丙转氨酶活性的影响

<正>共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是十八碳二烯酸(亚油酸)的同分异构体,其共同特征为两个双键直接通过一个碳-碳单键连接,没有被亚甲基隔开。共轭亚油酸的双     

许家窑遗址马科动物的死亡年龄

普氏野马(Equus przewalskii)和野驴(Equus hemionus)是许家窑遗址动物群中的优势属种。本文基于对这两种动物牙齿材料的测量与分析,确定了遗址中马科动物的死亡年龄,并对上、下文化层的死亡年龄分布进行了研究,以期探知古人类获取肉食资源的方式与特点。通过与马科动物在自然生存状态下以及死于不同原因(如疾病或营养衰竭、食肉动物猎杀、现代人类狩猎等)的年龄结构对比,结果表明:古人类在许家窑文化早期(下文化层)可能通过捡拾自然死亡的动物尸体、与食肉类动物抢夺猎物、主动狩猎等多种方式获取马科动物,而在许家窑文化晚期(上文化层)可能以主动狩猎作为获取马科动物的主要方式。此外,古人类在遗址的早期就可能已经具有捕获整个马科动物居群中任意年龄个体的能力,并能做出最优化判断,有选择地去捕猎脂肪和肉量较高的壮年动物群体。