铜绿假单胞菌色素代谢相关基因的研究北大核心

首次应用Mu转座重组技术研究铜绿假单胞菌色素合成与调控的机制。通过一系列的表型筛选 ,得到 8株色素合成能力改变的突变子。经基因克隆、核苷酸测序研究 ,证明转座子分别插入到hmgA、ptsP、sucC、phzS、phzF1五个基因中。hmgA基因转座失活导致酪氨酸分解代谢中间产物尿黑酸的积累 ,后四种情况转座突变显著地影响了铜绿假单胞菌最重要的色素 绿脓素 (pyocyanin)的合成 ,其中PhzS和phzF1是绿脓素合成过程中的结构基因 ,ptsP基因是 1个磷酸转移酶系统的重要组分 ,sucC基因的产物是三羧酸循环中的琥珀酰辅酶A合成酶 。     

Pfk基因过表达对乳酸乳球菌N8产nisin速率的影响

【目的】通过基因工程手段增加糖酵解途径中编码限速酶6-磷酸果糖激酶基因Pfk在乳酸链球菌素(nisin)产生菌Lactococcus lactis N8中的表达,增快nisin的产生,从而提高单位时间内nisin的产量,缩短发酵周期。【方法】将pfk基因及编码以c AMP为依赖的蛋白激酶催化亚基基因pka C克隆到表达质粒p MG36e上,将共表达重组质粒转入L.lactis N8中,使Pfk-pka C基因过量表达,得到重组菌株L.lactis N8-p MG36epfk-pka C,并比较该重组菌株与野生菌的生长曲线、胞内6-磷酸果糖激酶活性、发酵上清液的抑菌活性及效价,并从转录水平分析两株菌nis A及pfk-pka C的转录差异,比较野生菌与重组菌在不同葡萄糖含量下培养产nisin的变化。【结果】Pfk基因与pka C基因的过表达对重组菌的生长速度没有明显的影响,却能提高重组菌产nisin的速度,在发酵10 h时nisin的产量比野生菌提高了20%,使得发酵周期缩短近2 h。野生菌及重组菌在不同葡萄糖含量下培养发酵上清液的nisin效价没有明显的变化。【结论】糖酵解途径中6-磷酸果糖激酶基因Pfk的过表达可以加快乳酸乳球菌N8产nisin的速率,缩短发酵周期。     

带状疱疹后遗神经痛患者脑基础活动改变的功能核磁共振研究

带状疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)是临床上一种慢性顽固性神经病理性疼痛,然而,对于其潜在的中枢机制还知之甚少.为了进一步探讨带状疱疹后遗神经痛患者的相关脑区活动,利用功能核磁共振成像低频振幅振荡(ALFF)技术观察带状疱疹后遗神经痛患者的基础脑区活动.8名带状疱疹后遗神经痛患者与8名性别、年龄相匹配的健康者行静息态功能磁共振(f MRI)成像扫描,用SPM8中的多重回归分析,在控制被试年龄、性别、教育年限的影响下,将每个体素的ALFF值同每个被试的病程、视觉模拟评分(visual analog scale,VAS)进行相关分析.与健康志愿者相比,PHN组与VAS评分相关的ALFF值增高的脑区有:右侧小脑后叶、前额叶背外侧区域(BA11/46/47)、右侧顶叶(BA40)、右侧舌回(BA17/18/19);与VAS评分相关的ALFF值降低的脑区有:右侧颞中回(BA21)、左侧舌回(BA17/18)、右侧小脑前叶、左侧后扣带回(BA30/19)和右侧中央前回(BA3/4/6);PHN组与病程相关的ALFF值增高的脑区有:右侧小脑后叶、前额叶背外侧区域(BA9/10/11/47)、左侧颞上回(BA38)、右侧顶叶和右侧舌回(BA17/18/19);与病程相关ALFF值降低的脑区有:左侧海马旁回(BA28)、右侧小脑前叶、左侧扣带回(BA24)、右侧颞上回(BA13)、左侧中央前回和右侧顶下小叶(BA39/40).研究结果提示,涉及疼痛的情绪、警觉行为、注意的脑区在带状疱疹后遗痛慢性疼痛的产生和维持中发挥重要作用.     

鼠疫菌PsaA 抗原的表达及抗体制备和应用

目的:制备鼠疫菌PsaA抗原及抗体,建立针对PsaA抗体的快速检测方法,并检测鼠疫感染猴血清标本中的PsaA抗体的阳性率。方法:利用PCR方法扩增出PsaA蛋白基因片段,在大肠杆菌原核表达系统中表达出重组PsaA抗原,以镍柱亲和层析纯化包涵体形式的表达蛋白,以尿素梯度透析复性成可溶蛋白。再以表达蛋白为免疫原,常规免疫家兔,收集兔血清制备多抗,并以正辛酸-硫酸铵法提纯获得PsaA抗体IgG。利用得到的PsaA抗原和抗体为材料,建立两种检测PsaA抗体的快速检测方法,即间接ELISA法和上转换发光(Up-converting Phospher Technology,UPT)免疫层析试纸条法。最后利用这两种方法检测18份猴血清标本中的PsaA抗体。结果:鼠疫菌感染猴血清标本中PsaA抗体的阳性率为62%(8/13)。结论:成功建立了针对鼠疫菌PsaA抗体的快速检测方法,并检测到13份鼠疫感染猴血清标本中的PsaA抗体的阳性率为62%。     

alpha- 乳香酸联用羟基红花黄色素A抗胃溃疡效果研究

目的：研究乳香红花提取物中主要药效物质alpha-乳香酸（alpha-BA）和羟基红花黄色素A（HSYA）联合应用的胃保护效果。方法： 36 只SD 大鼠随机分为6 组：正常组（生理盐水5 mL/kg）,模型组（生理盐水5 mL/kg）,西咪替丁组（100 mg/kg）,HSYA 组（100 mg/kg）,alpha-BA 组（200 mg/kg）,联合用药组（HSYA 50 mg/kg+alpha-BA 100 mg/kg）。预给药1 小时后,用乙醇诱导SD 大鼠胃溃疡造 模,评价溃疡指数、胃内容物酸度、胃壁黏液量,用ELISA法检测血清炎性因子TNF-alpha、IL-1beta、IL-8。结果：①与造模组相比,alpha-BA 组和联合用药组显著降低乙醇诱导胃粘膜损伤（P＜0.001）且联合用药组较西咪替丁组相比差异无统计学意义,但HSYA组差异 无统计学意义;与造模组相比,alpha-BA组和联合用药组显著升高胃内容物pH,增加胃黏液含量（P＜0.001）且联合用药组与西咪替 丁组相比差异无统计学意义,但HSYA 组仅胃黏液含量有一定升高（P＜0.05）,胃内容物pH 没有明显改变。②与造模组相比, HSYA 组、alpha-BA组、联合用药组均显著抑制血清TNF-alpha、IL-1beta、IL-8 的升高（P＜0.001）且联合用药组与西咪替丁组相比差异无统 计学意义。③H&E 染色观察可见HSYA组依然有明显出血性损伤;西咪替丁组、琢-BA组和联合用药组则明显保护胃黏膜、抑制 损伤和白细胞浸润。结论：alpha-BA有较好的胃保护效果,HSYA胃保护效果显著低于alpha-BA,但联合应用HSYA、alpha-BA能够抑制胃 黏膜出血、白细胞浸润、抑制胃内容物酸度,增加胃黏液含量,并且能够调节血清炎性因子从而发挥较单用药用量更少且效果更 好的胃保护作用。     

塔克拉玛干沙漠南缘防护林和自然群落中多枝柽柳的光合特征及水分利用效率

干旱区植物的生长和生存主要受水分限制,采用滴灌方式对防护林植物进行水分补给是维持人工生态屏障稳定性的重要手段.本研究通过测定塔克拉玛干沙漠南缘防护林和自然群落多枝柽柳的气体交换参数和稳定性碳同位素值,研究不同水分来源多枝柽柳的光合特征和水分利用效率.结果表明: 滴灌群落多枝柽柳受灌溉和土壤盐分的影响水势普遍较低;自然群落多枝柽柳清晨和正午水势较其他植物低,表明其遭受到严重的水分胁迫;滴灌群落多枝柽柳叶片净光合速率(P_n)、气孔导度(g_s)、胞间CO₂浓度(C_i)和最大光合速率(P_{n max})均明显低于自然群落多枝柽柳,表明滴灌群落多枝柽柳光合能力弱于自然群落多枝柽柳;灌溉造成的盐分胁迫导致滴灌群落多枝柽柳比自然群落拥有较高的长期水分利用效率.总之,现行的灌溉模式虽能提供防护林植物生长所需水分,但技术的缺陷和土壤盐分的积累可能会影响防护林体系的长期稳定性.     

花椒挥发油对离体豚鼠气管平滑肌作用的实验研究

目的研究花椒挥发油对组胺(Histamine,His)、乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)诱发的豚鼠离体气管条收缩作用的影响,以及作用的量效关系,为研发平喘类中药奠定基础。方法采用Medlab生物信号采集处理系统利用定量药理分析方法分别测定:(1)His的量效曲线;(2)Ach的量效曲线;(3)不同浓度的花椒挥发油对His诱发的豚鼠离体气管条收缩的影响;(4)不同浓度花椒挥发油对Ach诱发的豚鼠离体气管条收缩的影响。结果His、Ach在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩,其中His与Ach在10-2mol/L时均可以使气管条收缩达到最大值,花椒挥发油对His、Ach诱发的支气管收缩均有抑制作用,在花椒挥发油浓度达0.48 g/L时抑制率为49%;但对Ach诱发的支气管收缩在剂量为0.48 g/L时抑制率仅达到26%,抑制作用明显弱于His;结论花椒挥发油在体外浓度为0.08~0.48 g/L时均能有效地抑制His、Ach诱发的支气管收缩,对His诱导的豚鼠气管平滑肌收缩的抑制作用强于Ach,提示花椒挥发油对过敏性刺激诱发的哮喘有较好的抑制作用,将为开发抗过敏性哮喘疾病的中药研发奠定基础。     

辣椒红色素的提取纯化及稳定性研究

以干辣椒为原料,丙酮为提取剂,用索氏提取器回流提取2h,回收溶剂后得到辣椒树脂;用碱溶液洗脱辣椒树脂中辣椒素后,得到含脂肪酸酯的辣椒红色素的粗产品,将其再用碱溶液进行水解后,过氧化铝柱除去水解生成的脂肪酸盐,最后利用硅胶层析柱分离提纯得到色价为605的游离态辣椒红色素;利用红外光谱对提纯得到的辣椒红色素进行分析检测,并对其稳定性进行了研究,发现在相同光照条件下,脱酯后得到的游离态辣椒红色素稳定性比未脱酯的辣椒红色素稳定性差。     

超声波对感染根管消毒作用的实验研究

目的:通过与氢氧化钙药尖消毒作用的比较,验证超声波对感染根管的消毒作用并判断其消毒作用的临床应用价值。方法:10只3月龄的小型健康实验家兔随机分成二组后,制备成感染根管动物模型。对模型进行术前细菌培养后,分别做超声根管内消毒和氢氧化钙药尖消毒,术后细菌培养。结果:超声波和氢氧化钙对需氧菌和厌氧菌的杀灭作用无菌种之间的差别;但杀菌效果存在显著差异。实验发现超声波消毒的特点是:第一,无抗菌谱的差异。第二,无热效应,根管壁表面升温不明显。第三,作用无方向性,对任何角度方向上的有机物均能使其失活。第四,越是细小根管作用越强。这些正是根管消毒所要求的特殊条件。结论:1)超声波对感染根管的消毒作用明显优于氢氧化钙药尖。2)超声波对感染根管的消毒作用无抗菌谱的差异。3)超声波对感染根管具有较可靠的消毒作用,作为一种根管消毒手段值得进一步研究。     

测定心脏收缩时间间期在房间隔缺损中的应用

我们曾测量分析了房缺、室缺和动脉导管未闭患者中的心脏收缩时间间期(STI),发现心内分流和心外分流的心功变化有其不同的特点,其中房缺患者在STI上的变化是以PEP、ICT和Q-S_1延长,LVET缩短,PEP/LVET和ICT/LVET比值增大为特征的。本文在此基础上进一步分析了房缺患者中分流量、肺动脉压、年龄等与STI异常的关系,并比较手术前