含荧光素酶基因的黑胸大蠊浓核病毒重组质粒的构建与表达

黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa)是我国分布最广的蟑螂种类.黑胸大蠊浓核病毒(Periplaneta fuliginosa densovirus, PfDNV)是我室1991年在国内首次报道并在国内外第一个分类鉴定的蟑螂细小病毒[1].我们构建了PfDNV全基因组克隆和酶切亚克隆重组质粒,测定并分析了病毒基因组全序列与结构.序列分析表明该病毒基因组具有细小病毒基因组的结构特征,其末端具有反转重复序列(Invert Terminal Repeatant, ITR)和回文结构,这类病毒基因组两端的特殊结构可能是与病毒复制,整合,拯救,包装有关的必需顺式元件[2～5].为了进一步研究黑胸大蠊浓核病毒基因复制及表达机理,尤其是其末端结构在病毒基因复制中的作用,我们将荧光素酶基因插入了PfDNV基因组保留了两个完整的末端结构而其它部分缺失的重组质粒中.将这种重组质粒转染虫体后,在虫体中检测到了荧光素酶的表达,说明在缺失基因组中间部分时,插入的外源基因依然可以复制、表达.本结果证实了PfDNV基因组的末端结构是PfDNV复制的必需结构.这一实验为将外源基因引入病毒基因组,构建基因工程杀虫剂提供了有效的技术途径.现将结果报告如下.     

盐渍条件下野大豆群体的遗传分化和生理适应：同工酶和随机扩增多态D…

黄河三角洲野大豆盐渍群体的耐盐性高于附近的正常群体。群体内个体间耐盐能力差别很大。盐渍群体有比最耐盐的栽培大豆品种耐盐能力高得多的个体,也有对盐相当敏感的植株。同工酶分析表明群体内高水平多态性,但酶谱与抗性没有相关性。盐渍与正常群体间的遗传一致性高达０．９６。用改良的随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法,１０个引物扩增得出群体内多态位点百分数为６８／１８８＝０．３６。看来,绝大多数位点与耐盐能力无关     

超声波介导法转化玉米愈伤组织及可育转基因植株的获得

应用超声波介导法,首次成功地将Bt毒蛋白基因导入了重要的禾谷类作物玉米,并获得了可育的转基因植株及后代.Southern分子杂交结果证明,外源基因已整合进R_0植株和R₁代的染色体组中.超声波声强和处理时间是决定超声波介导法转化效率的2个最重要的参数,以 0.5W/cm²的声强、30min处理的转化效果最佳,最高相对转化频率达到13.3%.适当参数的超声波处理能使细胞表面形成大量的小孔,又减少了外源DNA分子的断裂,从而使外源DNA分子进入细胞.     

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原和抗体

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。     

植物胚胎学实验方法（一）：花粉生活力的测定

采集的花粉和经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴定其质量。测定花粉生活力的方法主要有三种。即离体萌发、活体萌发和用氧化还原染料的非萌发分析测定法。这里介绍三种经常用的和在短时间可以得到结果的方法:花粉离体萌发法,用氧化还原染料染色法和荧光素二醋酸脂的荧光方法。     

肾透明细胞癌相关微小RNA的研究进展

微小核糖核酸(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子,miRNA通过与靶mRNA 3'端非翻译序列完全或部分互补结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制,从而调控靶基因的表达.最新研究显示人类血清/血浆中miRNA表达稳定,并在肿瘤患者血清中发现多种miRNA,其中的一些已经被证实与肾癌发生及发展相关,以往miRNA与肾癌的研究方.向多集中于肾癌组织,尽管发现很多有差异的miRNA,但不同研究者之间的结果常难以相互验证,而最近研究证实血清miRNA具有组织相关性和器官特异性,并对某些肿瘤具有高敏感性和特异性,因此其有望成为新的肿瘤标志物.肾癌是国内泌尿系统的第二常见恶性肿瘤,而且其近年来发病率和死亡率有逐年增高的趋势.由于肾透明细胞癌是肾癌的主要亚型,因此本文就血清miRNA在肾透明细胞癌的表达及其作用的研究进展作一综述.     

烟草病程相关蛋白基因启动子的克隆及序列分析

在植物的防御反应中,会诱导产生一些宿主编码的蛋白,叫做病程相关蛋白。该文通过PCR扩增,从烟草(Nicotiana tobacwn ce.Samsun)中克隆了水扬酸诱导表达的PR—1a基因的两个启动子TP12及TP13。以期用于构建诱导表达基因敲除系统,并用于无性繁殖植物的无标记基因转化。序列分析表明,启动子TP12含1313个核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为98．6％;TP13含654个核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为99．4％。     

创新应用型人才培养的课堂教学改革

创新应用型人才培养已成为当前我国高校人才培养目标。为此, 本文提出教师在课堂教学中应营造亲切、和谐、激励、快乐、讨论、探索的良好氛围, 充分发挥学生学习的主体作用, 激发创新精神, 锻炼应用能力, 培养自学技能。     

枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆及表达*

利用鸟枪法构建了供体菌的基因组文库,通过VP反应显色法进行筛选,从约7000个转化子中选出携带ALDC基因的重组质粒（pBG4～pBG5）．绘制了pBG4插入片段的限制酶图谱．Southern杂交证明该外源片段来源于供体菌。酶活性测定结果表明ALDC基因在大肠杆菌中获得了表达,为构建带有ALDC的啤酒酵母工程菌奠定了基础．     

新型饲草开发利用的基础生物学问题

饲草是发展草食畜牧业的基石。然而,现阶段由于饲草品种匮乏以及饲草种植结构单一引起的饲草短缺已成为饲草产业的一大瓶颈问题。因此,在大力发展传统优质饲草的基础上,亟须挖掘新型饲草的生产潜力。新型饲草是指在产量、营养品质、适应性和抗逆性等单方面或多方面较传统饲草具有明显优势、近年来饲用价值才被开发利用的饲草。该文以狗牙根(Cynodon dactylon)、小黑麦(×Triticosecale Wittmack)、藜麦(Chenopodium quinoa)、饲用油菜(Brassica napus)、籽粒苋、田菁(Sesbaniacannabina)和野大豆(Glycinesoja)等为主要对象,系统梳理了新型饲草的国内外研究现状与发展趋势,分析了我国在该研究领域的核心竞争力,探讨了新型饲草育种中存在的重要基础生物学问题,并提出了推动新型饲草产业健康发展的策略和建议,以期促进新型饲草的种业创新和饲草产业的可持续发展,保障国家大粮食安全。