人脐静脉内皮细胞的原代培养和鉴定

目的：探索建立稳定有效的脐静脉内皮细胞体外培养方法。方法：用0．1％II型胶原酶消化分离人脐静脉肉皮细胞,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养液中培养,用胰蛋白酶-EDTA进行消化传代培养,用光镜和免疫组化方法对培养的细胞进行形态观察和鉴定。结果：原代培养的内皮细胞在接种后24h后完全贴壁生长,第445天后融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组化可见胞浆中第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为内皮细胞。结论：脐静脉灌注II型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,细胞可传代5—6次,但细胞产出量不高,不能传10代以上,5代以后细胞形态变化较大,对于复杂的基础研究应用受限。     

Cu2+对泥鳅精子运动的影响

以泥鳅精子为受试材料,应用计算机辅助精子分析(CASA),研究不同浓度Cu2+暴露对运动型精子和静止型精子的毒性.结果 显示,运动型精子和静止型精子暴露在10 μM的Cu2+中,两者运动能力均受到明显抑制;在30 μM及以下浓度中运动型精子受影响程度较静止型精子大,而在更高浓度中出现相反结果.表明泥鳅精子对Cu2+毒性较敏感,不同能量代谢状态时其敏感性不同;Cu2+对泥鳅精子运动能力有较大影响,对淡水鱼具有潜在生殖毒性.     

油菜高含油量基因工程研究

油菜是世界上重要油料作物之一,是世界食用植物油的重要来源。近十年来,随着其种植面积的不断扩大,目前已成为世界第二大植物油来源,因此提高油菜种子含油量具有重大的经济利用价值。近年来,基因工程技术的飞速发展带来了优化油菜品种资源的新方法。三酰甘油对种子油脂的形成十分重要,它是油菜种子最主要的储藏脂类。将三酰甘油合成代谢途径中的关键酶基因及一些转录因子转入到油菜组基因中,一方面增加种子中关键酶基因的表达;另一方面增加转录因子表达以增强糖酵解和三酰甘油形成的相关基因表达,增加底物浓度和三酰甘油合成的速度,期待获得高含油量的转基因油菜。本文综述了国内外关于油菜油酯代谢关键酶基因及调控基因的研究进展,并展望了未来提高油菜含油量的发展思路。     

高压氧预处理对减压病大鼠肺组织的影响

目的:研究高压氧预处理对减压病大鼠肺组织的影响及其意义。方法:SD大鼠30只,随机分为正常对照(CN)组,高压氧预处理(HBO)组,减压(DCS)组,减压组采用20min匀速升压至7.0ATA,停留20min使大鼠充分换气,2min内快速减压常压方案。减压24h后观察肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化;并通过HE染色观察肺组织病理学变化。结果:减压组肺泡腔不够完整,肺泡破裂融合,肺泡壁增厚,有中度炎性细胞浸润,高压氧组与减压组相比,病理改变明显减轻;与对照组相比,单纯减压使大鼠肺组织GPx、MDA升高,SOD降低,高压氧预处理组GPx、MDA降低,SOD降低升高;高压氧组与减压组相比GPx、MDA下降,SOD升高(P<0.05)。结论:高压氧预处理对减压病大鼠肺组织具有一定的保护作用。     

辐射所致小鼠肾脏氧化损伤及川芎嗪的保护作用

目的:研究川芎嗪对辐射所致小鼠肾脏氧化损伤的预防和治疗作用。方法:采用60Co-γ射线5 Gy全身单次照射小鼠造模,在照射前和照射后分别于每天腹腔注射川芎嗪130 mg/kg,连续给药10 d,进行预防和治疗,并设对照组,观察肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及总抗氧化力(T-AOC)的变化。结果:与阴性对照组比较,照射可显著增加肾组织中MDA的含量(P<0.05),降低SOD、CAT的活性(P<0.05),升高GSH-Px活性(P<0.05),降低GSH含量(P<0.05),使肾组织T-AOC下降(P<0.05),。与照射组比较,给予川芎嗪预防和治疗后,均可降低肾组织MDA含量(P<0.05),升高肾组织T-AOC(P<0.05),且治疗组优于预防组,与阴性对照组无显著性差异。同时,预防组可使SOD活性和GSH含量升高(P<0.05),治疗组可使SOD和CAT活性增高(P<0.05),但均对GSH-Px活性无显著影响(P>0.05)。结论:川芎嗪具有很好的抗氧化作用,无论预防和治疗均可降低辐射所致小鼠肾脏的氧化应激损伤,并且治疗效果优于预防效果。     

慢病毒介导的大鼠肝BRL-3A 细胞Tmub1 基因沉默及稳定感染细胞 系的建立

目的:构建Tmub1基因慢病毒干扰载体,建立稳定转染细胞系,检测大鼠肝BRL-3A细胞中Tmub1基因表达的干扰效果。方法:设计并构建4对针对大鼠Tmub1基因的特异性shRNA干扰质粒,酶切鉴定、DNA测序所得质粒。将由pRSV-Rev、pMDLg-pRRE、pMD2G和pll3.7干扰质粒组成的包装系统共转染293T细胞,产生慢病毒。所得慢病毒感染大鼠正常肝细胞BRL-3A,Western Blot检测不同靶点RNAi后Tmub1蛋白表达情况,确定有效靶点。针对有效靶点大量包装慢病毒。测定病毒滴度并以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染BRL-3A细胞后,G418抗生素筛选稳定感染细胞系BRL-3A/256。RT-PCR和Western Blot检测各组细胞Tmub1 mRNA和蛋白质的表达差异。结果:结果显示Tmub1 RNAi慢病毒载体构建成功,C0020Sh2-Hops-256干扰靶点RNAi效果最强。成功包装Tmub1基因RNAi慢病毒,测定病毒滴度为2.3×108TU/ml,对293T细胞的最适感染复数为60。成功建立Tmub1 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系BRL-3A/256,且在该细胞系中Tmub1 mRNA和蛋白质表达明显降低。结论:成功构建Tmub1 RNAi慢病毒载体,有效干扰BRL-3A细胞中Tmub1 mRNA和蛋白表达;成功筛选出Tmub1RNAi慢病毒稳定感染细胞系BRL-3A/256。     

甘肃省苹果蠹蛾卵的空间分布格局

为准确掌握苹果蠹蛾Cydia pomonella(L.)的田间发生动态,本文对苹果园中苹果蠹蛾卵的空间分布格局和抽样技术进行了研究。结果表明:在第2代卵发生高峰期,苹果叶片上的苹果蠹蛾卵量显著高于果实上的卵量(叶片上着卵量占总卵量的58.2%,P<0.05),叶片上的卵主要分布于叶片正面(正面着卵量占叶片上总卵量的69.6%,P<0.05);在树冠不同方位上,东、南两面的着卵量最大,但在不同空间层次上分布的卵量没有差异。卵在叶片和果实上均呈聚集分布,且聚集强度随种群密度的升高而增加,其聚集是由环境因素造成的。文中还根据Taylor幂法则参数建立了苹果蠹蛾卵的理论抽样数模型。     

类产碱假单胞菌核心杀虫蛋白基因的转化及杀虫活性

[目的]利用类产碱假单胞菌核心杀虫蛋白基因(Core Pseudomonas pseudoalcaligenes insecticidal protein gene,cppip)构建植物表达载体并转化烟草,以研究cppip在高等植物体内表达产物的活性.[方法]cppip在烟草基因组中的整合及转录通过烟草转化系T0代种子发芽的抗生素抗性分离及其T1代株系的分子检测来证明;烟草转化系后代表达产物的杀虫效果通过测定蝗虫死亡率来分析.[结果]证明了cppip能以一定拷贝数插入到烟草基因组内,并按照孟德尔遗传方式传递给后代;比较含信号肽(signal peptide sequence,SPS)和不含信号肽的类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(Pseudomonas pseudoalcaligenes insecticidal protein gene,ppip)表达产物的杀虫活性,发现不含SPS的ppip烟草转化系蛋白表达产物对2～3龄蝗虫幼虫的平均致死率为83.37%,并对幼虫的生长发育有明显抑制作用,而含有SPS的ppip烟草转化系蛋白表达产物对2～3龄蝗虫幼虫的平均致死率为15.65%,两者之间有着显著的差异.[结论]推测ppip的SPS会影响该基因在高等植物体内表达产物的活性,本研究结果对于高效利用ppip进行植物转化及抗虫具有重要参考价值.     

菊苣开发与利用

对菊苣（Cichorium intybus L．）植物学特征、生物学特性、种类、组成成分与利用现状等领域的研究进行了综述与展望,为进一步加强菊苣研究提供参考。     

大豆皂甙对高盐饮食小鼠血压和肠道菌群的影响

目的：探究大豆皂甙通过影响肠道菌群对高盐引起的小鼠高血压的调控,并筛选起到稳定血压作用的目标肠道菌群,为新的功能食品和益生菌的开发提供科学依据。方法：15只健康成年雄性小鼠被随机分成3组：（1）喂食含0.5%NaCl的饲料（正常饮食,NSD组）;（2）喂食含8%NaCl的饲料（高盐饮食,HSD组）;（3）喂食含8%NaCl的饲料,高盐饮食9w后,饮食中添加大豆皂甙Bb,持续3w（高盐饮食+大豆皂甙,HSD_SI组）。实验结束前,分别收集3组小鼠新鲜粪便,提取粪便总DNA,并对16s rDNA的V3 V4区进行高通量测序,微生物多样性分析和差异OTU比对。结果：大豆皂甙可以显著降低由高盐饮食诱导的小鼠血压升高。同时减少部分在高盐饮食过程中显著增加的OTU的丰度,这部分OTU中可能包含使机体血压升高的有害菌;另外使部分在高盐饮食过程中减少的OTU的丰度得到恢复和增加,这部分OTU中可能存在潜在的可以降低机体血压的益生菌。推论：大豆皂甙可能通过影响肠道菌群而调控血压。