共聚焦显微镜对蒸发过强型干眼眼表结构的观察

目的:干眼已成为影响人们生活质量的主要眼表疾病之一。有关干眼的研究已成为当今眼科的研究热点,本文通过激光共焦显微镜对蒸发过强型干眼患者眼表结构特征进行观察,从细胞层面对干眼进行研究。方法:海德堡激光共焦显微镜(HRT3)对35例(60只眼)干眼患者及35名(60只眼)正常人的角膜上皮层朗格汉斯细胞,睑板腺腺泡密度,睑板腺开口直径及形态进行观察,并对观察结果进行描述记录。结果:正常眼角膜中央上皮层朗格汉斯细胞(LC)个数的平均密度为58±19个/mm2,干眼组为(137±29)个/mm2,两者比较差异具有统计学意义(P0.05)。正常眼组角膜上皮下朗格汉斯细胞突起较短,分支较少,干眼患者角膜上皮下朗格汉斯细胞突起呈树支状,其突起较正常眼组数量多且长度较长,正常组睑板腺(MG)腺泡的平均密度为115±28个/mm2,干眼患者的睑板腺腺泡的平均密度59±16个/mm2,两者比较差异具有统计学意义(P0.05)。干眼组睑板腺腺泡内呈中等程度反光,对照组腺泡内呈低反光。正常组睑板腺开口呈圆形,内壁光滑,直径为62±14μm,干眼组睑板腺开口欠光滑,直径35±11μm,两者比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:共聚焦显微镜观察到在蒸发过强型干眼患者中,睑板腺腺泡直径增大,密度降低,睑板腺的开口直径变小,同时,角膜朗格汉斯细胞活化,数量增多,共聚焦显微镜可从细胞层面观察蒸发过强性干眼的眼表结构改变,使干眼病理变化的研究更为直观,为今后的进一步研究提供了更为准确的材料。     

不同CO2浓度升高和氮肥水平对水稻叶绿素荧光特性的影响

为研究不同CO₂浓度升高和氮肥水平对水稻叶绿素荧光特性的影响,利用由开顶式气室（OTC）组成的CO₂浓度自动调控平台开展田间试验。以粳稻9108为试验材料,CO₂浓度设置CK（对照,环境大气CO₂浓度）、C₁（CO₂浓度比CK增加160 μmol/mol）和C₂（CO₂浓度比CK增加200 μmol/mol）3个水平;氮肥设置低氮（N₁：10 g/m²）、中氮（N₂：20 g/m²）和高氮（N₃：30 g/m²）3个水平。结果表明,在低氮条件下,与CK相比,C₁处理使拔节期的F_o上升4.8%（P=0.031）;C₂处理使拔节期的F_o上升6.3%（P=0.015）,F_v/F_m下降4.8%（P=0.003）,使孕穗期的F_o上升12.7%（P=0.039）,F_v/F_o下降18.2%（P=0.039）。在高氮条件下,与CK相比,C₂处理使灌浆期的F_m、F_v和F_v/F_m分别下降3.6%（P=0.039）、4.9%（P=0.013）和1.3%（P=0.039）。在中氮条件下,与CK相比,C₁和C₂处理的影响不明显。在整个生育期内,CO₂浓度升高与施氮处理交互作用对水稻叶绿素荧光特性的影响未到达显著水平。研究表明,大气CO₂浓度升高使水稻叶片光系统Ⅱ受损,抑制其电子传递能力、电子受体Q_A氧化还原情况、最大光化学效率和潜在活性,通过适量施氮可以有效地缓解其负面效应。     

川东獐牙菜的化学成分研究

从川东獐牙菜 (SwertiadavidiFranch .)中分离得到 3个化合物 ,经理化和光谱分析鉴定为 1,3,8 三羟基 5 甲氧基酮 (1)、齐墩果酸 (Ⅱ )和乌苏酸 (Ⅲ )。化合物Ⅰ为首次从本植物中分离得到。     

小鼠β-防御素30的原核表达和纯化

目的:在原核细胞中表达小鼠β-防御素30(DEFB30),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:用RT-PCR方法扩增小鼠Defb30的cDNA序列,将2个拷贝的cDNA序列串联连入原核表达载体pET28(a),构建重组表达载体pET28(a)-Defb30,并将重组表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,以Western印迹分析表达产物His-DEFB30,用Ni-NTA亲和柱纯化融合蛋白。结果:构建了Defb30基因的原核表达载体,经IPTG诱导,相对分子质量约15×103的融合蛋白获得表达,Western印迹分析证实此蛋白即为目的蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了高纯度的融合蛋白His-DEFB30。结论:获得了在大肠杆菌中表达的DEFB30,为研究该蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定了基础。     

表达小鼠白细胞介素21的Sp2/0细胞体外对鼠肿瘤特异性淋巴细胞增殖及功能的影响

目的:研究表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的Sp2/0细胞与用Sp2/0细胞预先免疫的小鼠淋巴细胞体外共培养,是否对预致敏淋巴细胞增殖及功能有影响.方法:获取灭活Sp2/0细胞免疫的小鼠淋巴细胞,在mIL-2存在的条件下,以miL-21转染的Sp2/0细胞为刺激细胞,用流式细胞术检测CFSE标记的淋巴细胞增殖和7-AAD标记的细胞毒活性;用ELISpot法确定分泌IFN-y/的淋巴细胞数量.结果:转染mIL-21的Sp2/0细胞对预致敏的淋巴细胞增殖有明显影响,活化的淋巴细胞对靶细胞的杀伤率(39.57%±4.72%)与对照组(23.18%±2.94%)相比有较大的提高(P＜0.05),且分泌IFN-y的细胞数量明显增加.活化增殖后的淋巴细胞回输至环磷酰胺预处理的小鼠,能延长小鼠的成瘤时间.结论:表达mIL-21的Sp2/0细胞可有效促进肿瘤抗原特异性淋巴细胞活化及增殖,并增强其对肿瘤细胞的杀伤功能.     

北京地区实验树晌的饲养管理方法

树鼩作为低等灵长类动物,在生物学研究中的价值日益引起研究者重视,将其作为实验动物的实验需求越来越多。作为南方亚热带动物,树嗣如何适应北方地区的生活是北方地区将其用作实验动物的前提。本实验室探索出适宜树购居住的饲养笼具,确定了饲养环境温度、湿度、光照时间、噪声及通风等条件,制定了规范化的卫生管理标准,建立了北京地区长期人工培育树晌的饲养管理方法,为今后利用树嗣进行中医药病证结合动物模型的研究奠定了基础。     

爬竹胚胎学研究

爬竹胚胎学研究庞延军,胡成华,喻富根（南京大学生物科学与技术系,南京２１００９３）本文初步报道了爬竹（Ｄｒｅｐａｎｏｓｔａｃｈｙｕｍｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）大小孢子发生,雌、雄配子体发育,胚及胚乳和果实发育,其观察结果如下：１．幼嫩花药的药壁由表皮...     

五味子甲素对溃疡性结肠炎小鼠血液流变性及凝血功能的影响

目的:考察五味子甲素对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血液流变性及凝血功能的影响。方法:以三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠制备溃疡性结肠炎小鼠模型,UC小鼠随机分为模型组、阳性对照组及五味子甲素高、中、低剂量组(80,40,20mg/kg),同时设立正常对照组,每组10只。灌胃给药,正常组、模型组分别给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予500 mg/kg柳氮磺吡啶(SASP),连续给药14 d。观察五味子甲素对UC小鼠全血黏度及凝血功能的影响。结果:与UC模型组小鼠比较,五味子甲素可显著降低UC小鼠全血黏度(P0.05),延长出血时间(bleeding time,BT)(P0.01)及凝血时间(clotting time,CT)(P0.05),其中甲素高剂量组作用最强,与SASP阳性对照组相当,并呈剂量依赖性。结论:五味子甲素可改善UC小鼠血液流变性及凝血功能,此作用有利于UC溃疡黏膜的修复与疾病的治疗。     

猪髓样分化因子MyD88特异性shRNA干扰载体的构建筛选及干扰效果评价

髓样分化因子My D88(myeloid differentiation factor 88)信号通路是一个具有多种调节功能的传导通路,在免疫反应、炎症反应及肿瘤的发生和发展过程中均发挥重要作用。构建猪(Sus scrofa)My D88基因的shRNA干扰载体,并在转录水平和蛋白质表达水平对其干扰效果进行验证,以筛选出干扰效果最优的干扰载体。根据猪My D88基因(Gen Bank登录号:KC766424.1)全长c DNA序列,利用Invitrogen公司在线设计软件设计出4对shRNA干扰序列,退火成双链后,分别将其插入到p Yr-1.1载体中,构建My D88基因的shRNA真核表达载体p Yr-1.1-pig My D88-sh1、p Yr-1.1-pig My D88-sh2、p Yr-1.1-pig My D88-sh3、p Yr-1.1-pig My D88-sh4,并通过双酶切和测序对其进行鉴定。构建成功后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/2,通过Real-time PCR及Western blot验证My D88基因的表达水平,以及对LPS刺激后炎症因子TNF-α基因表达水平的影响。结果表明,所构建的猪My D88基因的特异性shRNA表达载体均可显著降低猪My D88 mRNA和蛋白质的表达水平(P0.05),干扰效率分别达到36%、67%、60%、69%;相比于未干扰组,LPS刺激My D88沉默之后的巨噬细胞,炎症因子TNF-α基因表达水平显著下降(P0.05),表明所构建猪My D88干扰载体干扰效果较好。