香蕉线条病毒病研究进展

香蕉是重要的经济作物和粮食作物,广泛种植于热带、亚热带地区.在我国的广东、福建、海南、广西和云南等地均有大面积种植,产销量一直居南方四大水果之冠.然而,近年来,许多病毒病害成为香蕉生产发展的主要限制因素,主要包括香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)、香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)、香蕉苞片花叶病毒(banana bract mosaic virus,BBrMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)等引起的病害.     

番木瓜环斑病毒弱株系保护作用的研究

本文报道了在番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）弱株系保护作用中,保护接种与攻击接种的深度,以及攻击接种的部位等因素对ＨＡ５－１弱株系保护作用效果的影响结果。通过分析弱株系和强株系在保护接种后攻毒的植株体内的病毒浓度,表明ＨＡ５－１弱株系对Ｓｍ株系的保护作用的崩溃是由于强株系在植株顶端叶片听病毒浓度越来越高所致。本文还就ＰＲＶ弱株系在田间的应用技术作了一些讨论。     

番木瓜环斑病毒PCR检测技术研究

建立了检测番木瓜环斑病毒 (PRV)的免疫捕捉 PCR (IC PCR)法、ELISA PCR法和巢式 PCR法 ,它们分别能从 10 - 4、10 - 7和 10 - 14 稀释度的番木瓜叶粗汁液 (所含鲜叶组织的量分别 0 .5ug、0 .5ng和 5× 10 - 6ng)中检测出PRV。     

植物组织粗汁液中的番木瓜环斑病毒的ELISA检测技术

本研究建立和改进了检测番木瓜和西葫芦组织粗汁液里的番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。用不同的ＥＬＩＳＡ方法来检测不同寄主植物粗汁液里的ＰＲＶ,其所用的合适的制备粗汁液的缓冲液是不同的。用ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测西葫芦粗汁液时,以０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．５,内含０．１ｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠）为宜;而检测番木瓜粗汁液时,则还要加入０．２５ｍｏｌ／Ｌ脲。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测时,在上述磷酸盐缓冲液中加入２％聚乙烯吡咯烷铜能提高对西葫芦粗汁液的检测效果。应用合适的制备粗汁液的缓冲液,ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法的灵敏度分别提高到１／４０９６和１／１０２４（稀释度）。本研究还表明,影响ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的定过测定的主要因素是粗汁液的稀释度和包被液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ碳酸盐缓冲液,ｐＨ９．６）的用过。在较高粗汁液稀释度和包被液的用量相同时,粗汁液里的病毒含量与ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的ＯＤ４９２ｎｍ值呈真实的线性关系。     

香蕉束顶病毒DNA组分4的克隆与序列分析

香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)基因组中至少含有6个DNA组分,我们实验室已经对BBTV广东两个株系(NS和NSP)基因组中的DNA组分1、3、6进行了测序和报道.现又对NS和NSP的DNA组分4分别进行了克隆和序列分析.     

影响体胚发生途径香蕉(Musa spp.,AAB Group)植株再生的因素

香蕉品种‘Agbagaba'和‘Orishele'的胚性细胞悬浮系(ECS)在液体培养基中分别预培养1和2周后,将其接种在RD1和M3培养基上,于光照或黑暗条件下进行体胚的再生.从沉积细胞体积(SCV)为1 mL(1 mL SCV)的ECS获得的再生体胚数量因预培养时间、再生培养基的种类及培养条件的不同而异.植株的再生率及从1 mL SCV的ECS获得的再生植株数量也受上述体胚再生条件的间接影响.     

香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析

本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α-螺旋,7个β-折叠.NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间.NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,Rb)的基元序列"LXCDE"附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率.     

香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆和序列分析

香蕉束顶病(banana bunchy top disease,BBTD)是香蕉生产上重要的病害之一,它威胁着世界约1/4香蕉产区的生产[1].到1998年7月,世界上报道发生该病害的国家和地区达20多个,遍及亚洲、南太平洋地区和少数非洲国家.     

烤烟栽培品种G28和K326抗黄瓜花叶病毒的遗传转化

采用根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将ＣＭＶＢＳ（香蕉株系）的ＣＰ基因转入广东烤烟栽培品种Ｇ２８和Ｋ３２６,获得了再生转基因烟株。在卡那霉素（Ｋｍ）１００μｇ／ｍＬ浓度下转化体叶片分化形成愈伤组织;用ＰＣＲ和ＤＡＳＥＬＩＳＡ分析,结果证明ＣＰ基因已整合到转化烟株的染色体中,并得到不同程度的表达。利用广东地区香蕉、烟草和番茄上的ＣＭＶＢＳ、２７和３７株系,采用机械接种和蚜虫传毒法分别进行攻毒试验,结果证明转基因烟株对这三个株系的攻击都表现出明显的抗病能力,其抗性程度与烟株中的ＣＰ表达量呈正相关。采用五种攻毒浓度处理,发现随着攻毒浓度的增加,转基因烟株的抗病能力逐渐减弱。