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木糖异构酶的结构及蛋白质工程肖亚中,伍传金,崔涛(中国科学技术大学生物系合肥230026)关键词木糖异构酶,结构与功能,蛋白质工程木糖异构梅(D-XyloseIsomerase,EC5。3。1。5,下简称XI)催化五碳D-木糖转化为D-木酮糖,在体外亦能催化六碳D-葡萄糖至D-果糖的异构化反应[1,2]。该反应是工业上大规模以淀粉制备高果糖浆的关键步骤[3],故习惯上将木糖异构酶称为葡萄糖异构酶 。 相似文献
683.
为了研究鱼类的甲基转移酶set9 [SET domain containing (lysine methyltransferase) 9,也称作set7/setd7]在低氧耐受中的功能,以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,利用CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9)基因编辑技术,在斑马鱼set9基因的第一个外显子上设计了Cas9的靶位点,对其进行基因敲除,获得了缺失8个碱基的set9基因敲除的斑马鱼品系。对受精后3d的斑马鱼幼鱼和3月龄的斑马鱼成鱼进行低氧胁迫处理,比较了野生型及set9基因敲除的斑马鱼的低氧耐受能力;并对低氧胁迫处理后的3月龄的野生型及set9基因敲除的斑马鱼成鱼的脑组织取材、固定并进行TUNEL染色。结果显示:set9基因敲除的斑马鱼与野生型相比,其低氧耐受能力显著增强,脑组织中的细胞凋亡水平显著减少。研究为进一步揭示鱼类甲基转移酶set9在低氧耐受中的功能和分子机制提供了线索,并为培育耐低氧鱼类新... 相似文献
684.
在阐述反思性教学内涵的基础上,探讨了在民族地区本科院校生物技术专业基因工程课程教学中实施反思性教学的意义和策略。 相似文献
685.
目的:构建有效的小鼠神经粘附分子(NCAMl40)基因的RNA干扰(RNAi)质粒载体,为研究NCAMl40参与的细胞信号通j咯转导、其生物学作用以及以NCAMl40为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒。方法:使用基因序列软件设计、筛选符合公开文献筛选参数的4条靶序列以及1条阴性对照序列,由上海吉玛技术有限公司合成。与载体质粒pGPU6/GFP/Neo重组后.分别命名为pSi—ncal、pSi—nca2、pSi-nca3、pSi—nca4和pSi—control。转染大肠杆菌感受态细胞。选择阳性克隆进行DNA测序鉴定,、qCestemblot方法进行干扰靶点的筛选。选取干扰效率最高的质粒转染MN9D细胞,普通光学显微镜分别计数同一视野细胞总数及GFP阳性细胞数,计算转染效率。结果:酶切和DNA测序结果证实shRNA正确插入pGPU6/GFP/Neo质粒;Westernblot结果显示与空质粒对照组比较,pSi—nca4组细胞NCAMl40表达明显下调,细胞转染效率为62%。结论:成功构建靶向小鼠NCAMl40基因的RNAi质粒,为NCAMl40参与的细胞信号通路的研究以及以NCAMl40为靶点的基因治疗提供了稳定转染:细胞的干扰质粒,为研究其生物学作用奠定了分子生物学基础。 相似文献
686.
作为蛋白工程的一项突破性技术,交联蛋白晶体技术正受到广泛重视。蛋白晶体的交联形式不仅保留了蛋白的生物活性,而且显示了对热、极端pH和温度、有机溶剂和蛋白水解酶的更高稳定性。本文介绍交联蛋白晶体的制备和特性及其在生物医学、有机合成、环境催化和色谱分析中的应用 。 相似文献
687.
688.
689.
蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究 总被引:9,自引:0,他引:9
研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明,培养基初始pH5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶;与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比,纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高;有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成,当其含量为50%时,菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分,其主要活性(约占75%)组份漆酶A经 (NH4)2SO4沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一,SDSPAGE法测得酶亚基分子量59kD,凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kD。纯化的漆酶A等电点pI为4.0,氧化愈创木酚的最适反应pH为5.6,最适温度为60℃,在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min,在pH5.2~7.2范围内稳定性较好。100mmol/L Cl-对该酶有显著抑制作用,1mmol/L SO2-4 对漆酶有激活作用,1mmol/L NaN3可完全抑制酶活性,10 mmol/L EDTA对漆酶活没有明显影响,1mmol/L Cu2+对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时,测得酶的Km=1.026mmol/L,Vmax=5μmol/(min·mg);以ABTS为底物时,测得其Km=0.22mmol/L,Vmax=69μmol/(min·mg)。 相似文献
690.
菌草灵芝与段木灵芝的功效成分的比较研究 总被引:2,自引:0,他引:2
测定并比较菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率的差异。结果表明,菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率存在着差异,菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率都高于段木灵芝。 相似文献