芹菜(Apium graveolens L.)叶细胞质5SrRNA的序列测定

应用Gupta等和Tanaka等建立的RNA序列双向直读技术,并辅以部分酶解法、化学法等,测定了芹菜叶细胞质的5SrRNA的全序列:与菠菜和蕃茄细胞质已知5SrRNA序列进行了比较,发现它们之间在序列上有高度的保守性。     

质粒提取

这里所介绍的方法已成功地用来提取不同菌株中的各种质粒。一般来说,质粒愈小,效果愈好。因为随着质粒分子量的增加,其性质就愈来愈接近宿主DNA的性质。对于大于25kb的质粒分子,用此方法分离是非常困难的,而且得率较低。然而,通常用于克隆的所有质粒相对来说是较小的,因而此方法可获得良好的结果。     

叶绿体4.5SrRNA——Ⅱ基因与起源

在植物叶绿体中,rRNA 基因的排列顺序与原核生物大肠杆菌和蓝绿藻的 rRNA 基因排列顺序相似:16S rDNA—间隔顺序—23S rDNA—间隔顺序—5 S rDNA。在高等植物叶绿体中,在23S rDNA 的3′下游端和5SrDNA的5′上游端之间的间隔顺序内,还存在着4.5 S     

快速提取、纯化叶绿体4.5SrRNA的方法

我们采用植物叶与热缓冲液、苯酚直接混合(约65℃)匀浆,离心抽提和乙醇沉淀后,得到植物叶总RNA。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化,即可得到叶绿体4.5S rRNA,此法不仅操作简单,而且得率高。 同时,经过对同一植物的不同组织或不同细胞组分,如根、细胞质、叶绿体和叶绿体核糖体小分子RNA的提取与鉴定,以简便的方法证明了4.5S rRNA是叶绿体核糖体成份,也证明了我们所采用的提取、纯化4.5SrRNA方法的可靠性。     

不同葡萄品种CBF1基因的克隆及序列分析

根据欧洲葡萄CBF1基因序列设计1对特异引物,采用PCR方法从山葡萄、贝达、SO4、Ln33和黑比诺的基因组中各扩增出1个DNA片段并克隆到pMD18-T栽体中.经序列测定和分析,各片段均长756 bp,与欧洲葡萄CBF1基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列分别具有98％和99％的同源性,而且推导的氨基酸序列中包含有同源性更高的AP2/EREBP DNA结合域,以及CBFs蛋白的两段特征序列(PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAWR).结果表明从5种葡萄中均可以克隆出CBF1基因.     

植物4.5SrRNA的分离纯化和序列分析研究

<正> 植物4.5S rRNA是近年来发现的高等植物叶绿体核糖体上独立的小分子RNA成份,大约由80—106个核苷酸组成,不含稀有碱基。在蛋白质的生物合成中具有重要功能。 研究表明,不同来源的4.5 SrRNA序列有相当大的保守性,而且保守性的大小与植物种类的亲缘远近有直接关系。因此研究不同植物4.5SrRNA序列,对在分子水平上研究植物的演化与分类有指导意义。 我们以多种植物叶为材料,对其4.5SrRNA进行了分离纯化和序列分析研究。 4.5SrRNA在植物细胞内含量低,且较不稳定,因此,纯化有一定的困难。以前人们一