p53与细胞畸变的抑制

有关p53蛋白的研究,近年来开展得极为广泛。p53蛋白作为一种极其重要的肿瘤抑制子不但在细胞凋亡和细胞生长抑制中起着重要的作用,而且还参与了细胞衰老的调控,并与细胞分化关系密切。本文对当前在有关p53分子研究方面取得的成果进行了综述,希望它有助于这方面研究工作的进一步开展。     

细胞骨架与疱疹病毒的释放

用光镜和整装细胞电镜术对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染的牛肾组培细胞进行了观察,发现了一种未曾报道过的病毒释放方式:成熟的病毒通过一种结构连结于宿主的细胞质微丝束上(这些微丝束在整个病毒繁殖过程中没有明显变化),随着细胞病变,细胞质向中心圆缩,而微丝束并不收缩,被留在胞外,附着于其上的病毒即通过这种方式大量释放出来。     

应用大肠杆菌染色体DNA在非洲爪蟾卵提取物实现诱导非细胞体系核装配

近年来我们实验室已成功地利用细胞核体外组装的实验模式,将多种生物的DNA在非洲爪蟾卵提取物中实现了非细胞体系核装配。但亲缘关系最远的原核生物的染色体DNA是否也能在此真核体系中进行核装配一直没有报道。我们以大肠杆菌染色体DNA为材料,研究了它诱导的非细胞体系核装配。在光镜与电镜水平观察了核装配的过程。显微分光光度计扫描显示DNA片段在核装配过程中经历了凝集-去凝集的变化。证明大肠杆菌染色体DNA也能诱导爪蟾卵提取物装配成具有典型结构的核。α-~(32)P-dCTP的掺入实验表明重建核具有较高的DNA复制活性。     

用DNA酶切小分子片段在非洲爪蟾卵提取物中实现非细胞体系核装配

用质粒ｐＢＲ３２２的ＤＮＡ酶切片段,长度分别为７５０、３７５和１８６ｂｐ作为外源ＤＮＡ在非洲爪蟾 卵提取物中实现了非细胞体系的核装配（核重建）。将分离纯化得到的 ＰＢＲ３２２ ＤＮＡ酶切后经低熔 点琼脂糖回收ＤＮＡ片段,长度为７５０、３７５和１８６ｂｐ,分别加入到爪蟾卵提取物再生系统中温育, 经ＤＡＰＩ染色、孚尔根染色及电子显微镜观察发现能装配大量的重建核。显微分光光度法研究表 明,ＤＮＡ片段在诱导形成重建核的过程中发生了明显的凝集－会凝集变化。α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ掺入重建核 的液闪计数结果表明,ＤＮＡ酶切小分子片段诱导形成的重建核具有较高的ＤＮＡ复制活性,而且复 制活性在一定范围内与加入的ＤＮＡ片段长度呈正相关。实验结果表明,非细胞体系中诱导的核重 建不仅与外源ＤＮＡ的种类无关,与外源ＤＮＡ的长度也没有关系。     

猪瘟病毒在PK细胞和MPK细胞中繁殖过程的研究

以猪瘟病毒疫苗Ｔｈｉｖｅｒｖａｌ株（Ｔ株）为实验材料,研究该病毒株在ＰＫ１５细胞中增殖的基本特性与规律。在ＰＫ１５细胞中,猪瘟病毒Ｔ株在感染后１２ｈ即可检测到子代病毒粒子。接毒后４８ｈ,几乎所有的细胞都被病毒感染;到６０ｈ,释放到培养液中有活性的病毒粒子达到最高峰,为１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。培养液中的病毒粒子在３７℃半寿期只有３个小时。同时,建立了ＭＰＫ细胞ＣＳＦＶＴ株的感染模式,其ＣＳＦＶ的滴度可达１０８ＴＣＩＤ５０／ｍＬ。在此基础上,用抗ＣＳＦＶ包膜蛋白Ｅ２和非结构蛋白ｐ１２０的单克隆抗体显示了病毒在细胞中增殖的部位,进而应用电镜技术观察到成熟的病毒粒子及可能处在不同发育阶段的子代病毒粒子     

IB-RS-2细胞的微细胞的形成过程及其超微结构的研究

IB-RS-2细胞经秋水仙素(2微克/毫升)处理24—48小时,约75％的细胞形成微核,同时在细胞表面形成许多大小不一的原生质突起。微核化的细胞进一步用松胞素B(10微克/毫升)处理,在Ficoll不连续梯度(12.5％、16％、25％)中进行离心去核、形成许多微细胞。扫描电镜观察表明,微细胞是微核化细胞的原生质突起脱落而形成的。微细胞是一个不均一的群体,无论在大小与表面形态,还是在微细胞内部的成分与结构上都存在很大差异。     

寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)染色体的提取及其独特的超微结构

甲藻(dinoflagellate)作为最原始的一类真核生物,在进化研究中有着重要的地位。它的种种原始特点都表明,这类生物很可能是介于原核生物和真核生物之间的中间过渡类型。例如:它有独立的细胞核,但双层核膜不连续,核膜在整个细胞周期中永远存在;染色体附着在核膜周围,但在细胞间期和分裂期无明显的结构变化,并且永远处于高度凝集状态,其染色     

Nuclear Lamina（核纤层）—一种重要的细胞核结构

Nuclear lamina(核纤层)是细胞核内膜下由1至3种纤维蛋白(lamin)所构成的纤维网络或片层结构。Lamina与中间纤维及核内骨架相互联结,形成贯穿于细胞核和细胞质的骨架体系。Lamin与中间纤维蛋白具有同源性;Lamin的表达与细胞分化有关;Lamina在细胞分裂期中发生解聚和重装配。Lamina对核膜和染色质起支架作用,并与细胞核构建有关。     

寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)细胞核骨架与中间纤维的研究

甲藻(涡鞭毛虫,dinoflagellate)的细胞核是现存真核生物中最原始的。我们采用整装细胞制样和非树脂包埋去包埋剂超薄切片电镜技术,结合选择性生化抽提方法显示在寇氏隐甲藻(Cryptheccdinium cohnii)细胞中存在一个以水不溶性纤维蛋白成份为主的,贯穿于细胞核和细胞质的纤维网架系统,即核骨架-中间纤维结构体系,而Lamina结构不明显。免疫印迹法显示,甲藻细胞中存在类角蛋白组分,分子量为63kD和67kD,哺乳动物Lamin抗体与甲藻细胞全蛋白反应阴性。实验结果表明,在原始真核细胞中已经出现了类似于哺乳动物细胞的核骨架和中间纤维,并提示核骨架-中间纤维细胞骨架体系可能起源于真核细胞起源早期。本文对Lamina与中间纤维在进化上的关系及Lamina在真核细胞进化中的功能意义作了讨论。     

BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina-核骨架体系

以系列选择性抽提技术与显示细胞骨架的整装电镜技术为基础,应用免疫胶体金标记与蛋白质成份的双向电泳分析技术,研究了BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina与核骨架(核基质)结构体系及其主要的蛋白成份。BHK_(21)细胞的中间纤维-lamina与核骨架是在结构上相互联系,贯穿于核与质的网络体系。中间纤维单丝直径为10nm,能很好地被抗波形蛋白抗体-金颗粒所标记,生化分析同样说明BHK_(21)细胞中间纤维的主要成份是波形蛋白(vimentin),其分子量为55KD,等电点为5.6。中间纤维网在胞质内呈极性分布,与lamina密切联结。BHK_(21)细胞的lamina能被抗lamin A与C的单克隆抗体-金颗粒标记。双向电泳分析证明,lamina含有三种蛋白成份,即lamin A,B,C,其分子最分别为68KD,70KD与62KD,lamin A,C等电点均为6.9—7.2,而lamin B偏酸,其等电点为5.8。BHK_(21)细胞核骨架纤维网也可以被清晰的显示,其蛋白成份较为复杂,在双向电泳谱上经常出现多个清晰的斑点,很可能含有肌动蛋白(actin)。298KD核基质蛋白的单克隆抗体-金颗粒能准确的标记核骨架纤维。