基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建敲除TSPAN4基因的非小细胞肺癌细胞系

利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除TSPAN4基因,构建TSPAN4基因稳定敲除的非小细胞肺癌A549细胞株,并检测其对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,为后期探讨迁移体在非小细胞肺癌转移过程中的作用提供实验基础。以质粒pSpCas9(BB)-2A-Puro(px459)为载体,与设计好的引物连接后得到敲除载体px459-sgRNA-TSPAN4。以jetPRIME?为转染试剂,将构建好的质粒转染至A549细胞系,嘌呤霉素筛选单克隆细胞株并使用Western blot实验鉴定A549细胞系中TSPAN4基因的敲除效果,细胞划痕实验和Transwell实验检测敲除TSPAN4基因对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。该研究成功构建了TSPAN4基因编辑质粒px459-sgRNA-TSPAN4。Western blot结果显示敲除TSPAN4基因能够显著降低A549细胞株中TSPAN4蛋白表达量;敲除TSPAN4基因对A549细胞迁移、侵袭能力的影响在统计学上无显著性差异,降低了N-cadherin的表达,对E-cadherin表达的影响不大。以上研究表明,使用CRISPR/Cas9...     

基于线粒体基因序列的中国橙黄豆粉蝶遗传分化和谱系生物地理研究（英文）

【目的】分析中国橙黄豆粉蝶Colias fieldii种群遗传多样性和遗传分化情况及其系统发生关系,推测其起源及分化时间,并探讨其历史生物地理分布格局的成因。【方法】对2006-2018年采集的中国23个橙黄豆粉蝶地理种群的115头个体样品的4个线粒体基因(COI,Cytb,NDI和ND5)序列进行PCR扩增和测序;采用MEGA v.7.0, DnaSP v.5.0和Arlequin v.3.5.1等软件分析其遗传多样性和遗传分化情况;以其他近缘豆粉蝶种类作为外类群,采用IQ-TREE, MrBayes v.3.1.2, Network v.4.6和BEAST v.1.8.3等软件重建橙黄豆粉蝶的系统发生树和单倍型网络图,并使用宽松分子钟以及前人的时间标定推测橙黄豆粉蝶的起源和分化时间;结合现今橙黄豆粉蝶的生物地理分布特点和第四纪以来的地球环境背景,探讨其历史生物地理分布格局及成因。【结果】橙黄豆粉蝶种群4个线粒体基因(COI,Cytb,NDI和ND5)片段长度分别为648, 699, 393和777 bp,这4个基因的串联序列总长为2 517 bp,具有明显的AT偏倚特征。基于4个线...     

蘑菇圈的初步研究

秋季,永丰滩草原黄绿色的草地上,镶嵌着牧草生长茂盛的圆圈或条带,草丛下长着大大小小的蘑菇,人们称它为“蘑菇圈”或“蘑菇带”。圈上牧草为啥长得茂盛?蘑菇与牧草的关系如何?我们对此进行了分析研究,现将结果报告如下。(一) 自然概况     

女性生殖道支原体感染与不孕症的关系及药敏分析

目的探讨女性生殖道支原体感染与不孕症之间的关系及对11种抗生素的敏感率,指导临床明确诊断,合理用药。方法随机选择2007年至2009年来长治市妇幼保健院就诊的女性不孕症患者360例,进行宫颈分泌物支原体培养和药敏试验。结果 360例宫颈分泌物标本中检出解脲支原体(Uu)阳性者161例、人型支原体(Mh)阳性者3例、解脲支原体(Uu)+人型支原体(Mh)混合阳性者29例;对阳性标本都做了11种抗生素的药敏试验,其中交沙霉素敏感率为93.47%、美满霉素敏感率为92.00%、强力霉素敏感率为90.21%、克拉霉素敏感率为83.69%、甲砜霉素敏感率为73.91%、环脂红霉素敏感率为61.95%和阿奇霉素敏感率为53.26%等。结论女性不孕症伴随高发的生殖道支原体感染,支原体感染与不孕症可能有关;长治地区生殖道支原体对交沙霉素、美满霉素、强力霉素、克拉霉素、甲砜霉素敏感性较高,环脂红霉素、阿奇霉素次之,对红霉素、罗红霉素敏感性较低,对环丙沙星、左氧氟沙星敏感性很低。     

不同温度下多异瓢虫实验种群生命表

完成多异瓢虫Hippodamia variegata(Goeze)在13,17,21,25,29和33℃6个温度处理下的繁殖特征生命表。结果表明:各虫态的发育速率随温度的升高而加快,在13℃下世代的发育历期最长为62.23d,而33℃时仅为10.92d;成虫寿命随温度升高而逐渐缩短,13℃时最长,为71.39d,33℃时最短,为11.95d;各温度下净生殖率25℃时最大为31.42,13℃时最小为1.40;内禀增长力33℃时最高为0.21,13℃时最小为3.87×10-3;各温度下的稳定年龄组配29℃下最稳定,具体分布为:卵,36.54%;1龄,22.95%;2龄,7.56%;3龄,11.05%;4龄,10.11%;蛹,5.65%;成虫,6.13%。     

南极乔治王岛燕鸥湖晚第四纪硅藻（Ⅲ）：Diatomales，Achnanthales和Surirellales

本文对南极乔治王岛燕鸥湖晚第四纪硅藻中的等片藻目（Ｄｉａｔｏｍａｌｅｓ）、曲壳藻目（Ａｃｈｎａｎｔｈａｌｅｓ）和双菱藻目（Ｓｕｒｉｒｅｌｌａｌｅｓ）进行了系统分类描述,计有２４个种和８个变种,其中包括１个新种,５个新变种。它们可归属于：１）世界普生种,淡水或半咸水生境,中性－偏碱性;２）南极近岸浅海海域中常见种。     

妊娠期糖尿病患者糖化血红蛋白水平与甲状腺激素水平及不良妊娠结局的关系分析

目的:分析妊娠期糖尿病(GDM)患者糖化血红蛋白(HbAlc)水平与甲状腺激素水平及不良妊娠结局的关系。方法:选取2017年2月～2018年5月期间延安大学附属医院接收的GDM患者118例作为观察组,其中血清HbAlc水平≤6.5%55例,6.5%63例。另外选取同期来我院接受孕检的110例非GDM孕妇作为对照组,比较对照组、观察组血清HbAlc、甲状腺激素水平以及不良妊娠结局,比较观察组中不同HbAlc水平患者不良妊娠结局情况,采用Pearson相关性分析HbAlc水平与甲状腺激素水平的关系。结果:观察组初次测量、二次测量时的血清HbAlc水平均高于对照组(P0.05)。观察组血清三碘甲状腺原氨酸(T_3)、游离甲状腺原氨酸(FT_3)、总甲状腺素(T_4)、游离甲状腺素(FT_4)水平均低于对照组(P0.05)。观察组羊水过多、胎儿窘迫、新生儿低血糖、早产、巨大儿的发生率均高于对照组(P0.05)。HbAlc水平6.5%的患者羊水过多、胎儿窘迫、新生儿低血糖、早产、巨大儿的发生率均高于HbAlc水平≤6.5%的患者(P0.05)。Pearson相关性分析结果可知,HbAlc与T_3、T_4、FT_4、促甲状腺素(TSH)无相关性(P0.05),而与FT_3呈负相关(P0.05)。结论:血清HbAlc水平可较好地预测GDM患者不良妊娠结局,GDM患者多处于甲状腺激素水平较低状态,且HbAlc与甲状腺功能指标FT_3密切相关。     

大规模的酵母双杂交系统在蛋白质相互作用组图谱中的应用

蛋白质-蛋白质之间的相互作用是蛋白质发挥其功能的重要途径之一。通过研究蛋白质组中所有蛋白质之间的相互作用做出蛋白质相互作用对图谱是功能基因组时代许多科学家关注的问题,而大规模的酵母双杂交系统是蛋白质相互作用对图谱的研究中应用较为广泛的策略。近两年来该策略最具代表的实例是用它进行酵母中所有蛋白之间相互作用的检查。但是巨大的蛋白质网络比我们想象要大得多,单一的双杂交系统不能解决所有问题,需要同其它的方法有效地结合。     

人脐静脉间充质干细胞的分离培养及生物学特性鉴定

为了对人脐静脉间充质干细胞(MSC)进行分离培养及其生物学特性鉴定。采用胶原酶分步消化法获得人脐静脉间充质干细胞(hUVMSC2)并对其进行体外培养、形态学观察及绘制生长曲线;利用条件培养基诱导法分析该细胞分别向成骨细胞和脂肪细胞分化能力;流式细胞术检测细胞表面标志物CD54、CD105、CD29、CD166、CD44、CD31、CD34、CD49、CD106等表达情况。结果该细胞形态为梭形或成纤维样,不表达内皮来源的vWF因子。在不同诱导条件下,该细胞可分别向成骨细胞和脂肪细胞分化。hUVMSC2细胞表面表达CD54、CD105、CD29、CD166、CD44等间质细胞黏附分子,不表达CD31、CD34、CD49、CD106等内皮或造血细胞相关标志物。该细胞指数生长期倍增时间约为26h,在添加bFGF条件下可迅速增殖,指数生长期倍增时间缩短为16h。研究证实人脐静脉内皮层下存在间充质干细胞,采用分步酶消化法可同时分别获得单根脐静脉的内皮细胞和间充质干细胞。hUVMSC2间充质干细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞分化潜能并表达多种黏附分子。     

P53蛋白与SV40大T抗原之间相互作用的研究

为确定一种定量研究酵母体内蛋白质-蛋白质之间相互作用的简便、快捷的方法,为抗癌小分子化合物药物筛选提供一条可行性途径。本文选择P53蛋白与SV40大T抗原为靶蛋白对,首先用酵母双杂交系统（LiAc法质粒共转化酵母细胞）方法定性证明了两者之间存在相互作用,然后通过α-半乳糖苷酶活力定量测定了相互作用力的大小,并确定了最佳酶活测定时间,并与β-半乳糖苷酶活力测定进行了比较,认为α-关乳糖苷酶活力定量测定是研究蛋白质-蛋白质间相互作用的一种更加简便快捷的方法。