猪β-内啡肽基因克隆和重组质粒壳聚糖修饰分子包装体外表达研究

目的克隆猪β-内啡肽基因,研究其体外原核、真核表达,探索高效表达目的基因的新型纳米材料,为进一步研究β-内啡肽对动物免疫应答和应激调节等方面的作用奠定基础。方法利用基因延伸重叠PCR克隆β-内啡肽的基因cDNA,双酶切后插入VR1020、pGEX-4T-1,构建其真核、原核表达载体;以不同浓度的IPTG诱导表达重组融合蛋白,并作SDS-PAGE和RT-PCR分析目的基因原核表达情况;利用壳聚糖及其修饰分子制备纳米颗粒包装重组真核表达质粒,体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析β-内啡肽基因在真核细胞的表达。结果成功克隆了猪β-内啡肽基因,并构建获得其原核和真核表达载体;不同浓度的IPTG诱导后,在29.7kDa的位置出现了新的蛋白条带,而原来的26.2kDa处的GST标签蛋白条带消失。说明目的基因已经和GST融合产生了新的融合蛋白;壳聚糖及其聚乙二醇和聚乙烯亚胺接枝修饰分子(mPEG-PEI-CS)纳米颗粒包裹VREP转染HEK293细胞,48h后收集细胞,RT-PCR和ELISA检测显示VREP能够在HEK293细胞中高效地转录表达β-内啡肽。结论本实验成功克隆了猪的β-内啡肽基因,并成功进行了原核及真核细胞表达分析,壳聚糖修饰分子纳米颗粒包装可高效表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础。     

植物中的多酚物质对超氧物自由基的清除作用

芒果、番石榴、松、龙眼等叶片和绿茶中含有Ｏ２（超氧物自由基）的非酶促清除剂,仅０．５—１ｍｇ鲜重或０．２９ｍｇ茶叶就相当一个ＳＯＤ酶单位作用,热处理不能降低清除Ｏ２的能力．用显示酚类物质的喷洒剂（ＡｇＮＯ３－ＮＨ４ＯＨ）和显示ＳＯＤ同工酶带的ＮＢＴ法对电泳后的凝胶分别染色处理,对比显示结果,表明酚类物质与ＳＯＤ活性物质有相似的电泳行为,叶片中的酚类物质可能为非酶促清除Ｏ２的组份．人工合成的酚类化合物（对硝基酚、间苯二酚、愈创木酚）和从植物中分离的鞣酸等,在体外均能有效地清除Ｏ２．     

强光及活性氧对大豆光合作用的影响

利用叶绿素荧光技术研究了强光及活性氧对大豆（ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．） 光合作用的影响。结果表明,大豆叶片在强光（２０００ μｍｏｌ·ｍ － ２·ｓ－ １） 下照射２ ｈ 后,净光合放氧速率下降。随着处理光强的增加,叶绿素荧光参数Ｆｍ／Ｆｏ、Ｆｖ／ Ｆｍ 、ΦＰＳⅡ、ｑＰ 和ｑＮ 均呈下降趋势。在强光处理大豆叶片时,加入外源活性氧Ｈ２Ｏ２ 、Ｏ－·２ 、·ＯＨ 和１Ｏ２ 后,大豆叶片受到伤害。其中１Ｏ２ 和·ＯＨ 的破坏作用十分明显,表现为Ｆｖ／ Ｆｍ 和ΦＰＳⅡ的明显降低。抗氧化剂ＤＡＢＣＯ、甘露醇、抗坏血酸和组氨酸对强光下的大豆叶片有保护作用,但这种保护作用不强。在暗处理叶片时,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）的抑制剂ＤＤＣ对Ｆｍ／ Ｆｏ 和Ｆｖ／Ｆｍ 的影响不大;抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ） 的抑制剂ＮａＮ３ 使Ｆｖ／Ｆｏ、Ｆｖ／ Ｆｍ和ΦＰＳⅡ下降明显。强光处理大豆叶片时,ＤＤＣ明显降低Ｆｍ／ Ｆｏ、Ｆｖ／ Ｆｍ 和ΦＰＳⅡ,ＮａＮ３ 降低Ｆｍ／ Ｆｏ、Ｆｖ／ Ｆｍ 和ΦＰＳⅡ的作用则更大。据此推测,在强光下大豆发生了光抑制,光抑制的发生与活性氧的存在有一定的关系     

神经肽样物质在两栖类胚胎发育过程中的定位研究(英文)

本工作以东方蝾螈为实验材料,选用时期为：卵裂期,神经胚早、中、晚期,尾芽早、中、晚期,及蝌蚪期等８个时期。各期胚胎经过固定、ＯＣＴ包埋、切片后,分别做抗胰岛素、抗胆囊收缩素、抗生长素和抗β内啡肽等免疫反应,ＡＢＣ法染色处理并观察。结果发现：一、在胚胎发育的一定时期,阳性细胞出现在胚胎的一定部位。最早于尾芽早期出现在内胚层,此时,个别细胞呈阳性反应。尾芽中期阳性细胞明显增多（Ｆｉｇ．１）。到蝌蚪期,在成形的肠道外缘可以看到阳性细胞（Ｆｉｇｓ．２＆３）,躯干部内胚层的外缘也有呈阳性反应的细胞（Ｆｉｇ．４）。可以认为：胚胎发育过程中,神经肽物质出现的时空程序与神经系统发育不相平行。从卵裂期到神经胚期,神经管从出现到闭合的管内外,都找不到阳性物质的存在。直到尾芽早期才发现神经肽样物质,而且分布在内胚层。到尾芽中期,可在表皮中发现。而神经系统则到了尾芽晚期,也就是神经管闭合后８６小时,在眼杯后才出现阳性细胞。到蝌蚪期,神经肽样物质仅存在于周边神经系统。二、在神经系统,阳性细胞最早出现在尾芽晚期,在眼杯后方可以观察到成群的阳性细胞。该位置很可能是脑神经节（Ｆｉｇ．５）。蝌蚪期,神经系统从前端往后都可观察到阳性细胞,它     

大熊猫幼兽腹泻粪便分离出的轮状病毒鉴定

11 只5 ～ 11 月龄的断奶大熊猫幼兽先后患一种急性传染性、顽固性腹泻病,1 只大熊猫幼兽在发病4 d 后死亡,相同饲养条件下由母兽哺育的同龄大熊猫幼兽未见发病。取发病大熊猫幼兽粪便、血液以及呕吐物进行细菌学和寄生虫学检查,未检出病原;用轮状病毒粪便抗原ELISA 快速诊断,受检的8 只大熊猫幼兽腹泻便都多次检出阳性结果。采集发病大熊猫的病料进行病毒病原分离,从腹泻大熊猫幼兽的粪便中分离出病毒颗粒,通过电镜形态、理化特性和中和试验鉴定,确认分离病毒为轮状病毒。      

乙烯厂循环水污染物的微生物种类鉴定及其防治

某乙烯厂循环水一度出现大量性质不明的絮状污染物 ,严重影响了乙烯厂的正常生产。经鉴定 ,该污染物主要由芽孢杆菌 (Bacillussp .)和曲霉属 (Aspergillussp .)、毛霉属 (Mucorsp .)、青霉属 (Penicilliumsp .)、交链孢属(Alternariasp .)、鬼伞属 (Coprinussp .)的真菌菌丝体组成。在工厂循环水中发现有鬼伞属的真菌菌丝 ,这在其它文献中尚未见报道。针对这种絮状污染物的主要组成成分 ,广东省微生物研究所研制了能有效防控这些微生物污染的杀菌剂。     

分泌载体pUS186的构建及地衣杆菌α—淀粉酶基因在枯草杆菌中的表…

利用枯草杆菌的分泌系统构建分泌型表达载体表达和分泌外源基因产物具有重要的商业价值。我们用鸟枪法克枯草杆菌染色体的启动子和信号肽序列。将克隆的序列连接到能在枯草杆菌中复制的质粒ｐＵＢ１８上,获得分泌型表达载体ｐＵＳ１８６。为了测试构建的载体ｐＵＳ１８６的功能,将地衣杆菌α－淀粉酶基因的缺失了启动子和信号肽序列的片段重组进该质粒,经过Ｂａｌ ３１酶切,Ｔ４ ＤＮＡ聚合酶补齐等处理,获得ｐＵＳＡ１８６Ｉ     

常染色体显性遗传小眼球病与12个微卫星多态标志的初步连锁分析

本文报道了一个常染色体显性遗传小眼球的大家系,初步排除了此家系致病基因在目前已知位点(CHXl0、MITF、RX、MCOP、NN01、NN02)的可能,并探讨了与11号染色体上的微卫星DNA标志的连锁关系。采用聚合酶链(PCR)扩增微卫星DNA片段,扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用银染显示结果;用MLINK连锁分析软件计算LOD值。结果显示,本家系小眼球致病基因与6个已知位点及ll号染色体上的微卫星DNA标志之间不存在连锁,提示此家系的致病位点目前尚未被定位。     

IL-23/Th17轴在变应性哮喘中的研究进展

变应性哮喘是一种由辅助性T细胞（T helper cell,Th cell）调节的慢性炎症性疾病。Th1/Th2的失衡一直被认为是变应性哮喘的发病机制,Th2细胞及其分泌的细胞因子白介素4（interleukin 4,IL-4）、IL-5以及IL-13在变应性哮喘特异性症状的发病中发挥重要作用。最近研究发现Th17细胞及其分泌的IL-17参与变应性哮喘的发展过程,IL-23在Th17细胞维持生存和功能成熟中发挥重要作用,并参与抗原诱导的气道炎症反应。该文对目前IL-23/Th17轴在变应性气道炎症反应中的研究进展作一综述。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞骨架的影响

目的探讨双歧双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞细胞骨架的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞后,用荧光标记的鬼笔环肽染液染色,最后采用激光共聚焦显微镜技术检测巨噬细胞的细胞骨架。结果和对照组相比,WPG刺激巨噬细胞后,其胞内肌动蛋白减少且排列更加紊乱,同时胞膜荧光强度减弱,胞外放射状荧光物质减少,甚至消失。结论双歧双歧杆菌的WPG在激活巨噬细胞的过程中可影响其细胞骨架。