S100钙结合蛋白A16通过内质网应激促进HepG2细胞脂肪合成

本研究旨在探讨S100钙结合蛋白A16 (S100 calcium binding protein A16, S100A16)在肝细胞脂质代谢中的作用及可能的生物学机制。用脂肪酸培养HepG2细胞(人肝癌细胞系)以建立脂肪酸培养模型,对照模型不加脂肪酸培养,每一模型分成3组细胞,分别用S100a16过表达质粒、shRNA质粒、Vector质粒转染。用试剂盒检测细胞甘油三酯浓度,用油红O染色观察脂滴聚集情况,用免疫沉淀和质谱分析寻找和S100A16相互作用的兴趣蛋白,并用免疫共沉淀验证,用Western blot和qRTPCR进行相关机制研究。结果显示,和对照模型相比,脂肪酸培养模型细胞内脂肪和甘油三酯浓度显著增加。S100a16过表达组细胞内脂肪积累显著高于Vector质粒转染组。热休克蛋白A5 (heat shock protein A5, HSPA5)与S100A16之间存在相互作用。S100a16过表达可上调内质网应激的HSPA5/肌醇依赖酶1α-X结合蛋白1 (inositol-requiring enzyme 1α-X binding protein 1,IRE1α-XBP1)通路相关蛋白(HSPA5、IRE1α和pIREα1)表达水平,并上调脂肪合成相关基因Srebp1c、Acc和Fas mRNA表达水平,而转染S100A16 shRNA质粒可使上述蛋白和mRNA水平低于Vector质粒转染组。以上结果提示,S100A16可能通过内质网应激HSPA5/IRE1α-XBP1通路促进HepG2细胞脂质合成。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的克隆和序列分析

幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌。其有效抗原成份尿素酶B亚单位(UreB)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出UreB基因片段,将其克隆至质粒pUC19中,对其全序列进行了测定。克隆的UreB基因序列与报道的序列完全一致。这一研究获得了序列正确的UreB基因,为将来以UreB分子为抗原的疫苗研制工作打下了良好的基础。     

幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位的克隆和序列分析

幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌。其有效抗原成份热休克蛋白B亚单位（HspB)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出HspB基因片段,将其克隆至质粒PUC19中,对其全序列进行了测定。克隆的HSpB基因序列与报道的序列完全一致。这一研究获得了序列正确的HspB基因,为将来以HspB分子为抗原的疫苗研制工作打下了良好的基础。     

血清中乙肝病毒—前S2蛋白检测的临床价值

采用双抗体夹心法对108例血清标本进行了乙肝病毒—前S     

半干旱黄土丘陵区多元化草地建设技术研究

针对黄土丘陵区草地退化,水土流失严重,草地畜牧业生产力低等问题,于1995～2002年在半干旱黄土丘陵区的安塞县进行了多元化草地建设试验研究。引种、驯化生态经济型优良草种20余种(包括品种、类型),建设高产、优质单播及混播人工草地和利用耐牧草种改良天然草地,为在半干旱黄土丘陵区充分利用水土资源,改良大面积天然草地,提高其生产力和生态、经济效益,及在退耕坡地建设人工草地,为促进农牧业可持续发展提供物质基础及科学依据。     

普通Taq DNA聚合酶扩增幽门螺杆菌尿素酶基因长片段

ＰＣＲ反应扩增较长的ＤＮＡ片段比较困难。本实验对幽门螺杆菌染色体ＤＮＡ上的２７Ｋｂ尿素酶基因用普通ＴａｑＤＮＡ聚合酶进行扩增,扩增结果以琼脂糖凝胶电泳证实,得到所需的２７Ｋｂ的片段。该实验为今后幽门螺杆菌工作的进一步研究提供了经济,有效,简捷的条件。     

痢疾结合疫苗LPS制备条件的优化研究

通过对痢疾杆菌LPS提取过程中主要制备环节的优化和改进,确立最佳提取条件和纯化过程,并应用优化后的工艺路线分别制备八批次福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌LPS;福氏2 a痢疾杆菌LPS批平均产量为1.633g,宋内氏痢疾杆菌LPS批产量平均为1.251g,批产量相对稳定,平均产量比优化改进前提高20%以上。LPS经过酸水解、柱层析纯化获得目标O-SP,福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌O-SP的得率分别为20%和28%。检测结果证明,LPS和O-SP各项指标均符合规程(草案)相关要求。实验为今后痢疾结合疫苗大规模制备工艺的改进和提高打下了基础。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。     

克拉玛依区社区慢性病患者健康管理实践及效果研究

目的:随着人们物质生活水平的不断提高,与生活方式密切相关的慢性非传染性疾病(noninfectious chronic disease,NCD,以下简称慢性病)已成为危害人们健康的头号"公敌"。本课题立足克拉玛依市居民,通过健康管理干预方式,摸索一种更适合本地区特点的社区慢性病健康管理的方式方法,让本地区社区慢性病患者能够系统地、有效地掌握慢性病的相关知识和防控技能,建立有利于健康的生活方式,有效减少慢性病的远期并发症。方法:设立实验组和对照组。对照组采用传统的慢性病管理模式,以医院门诊、社区卫生服务中心的医务人员做一般的健康教育指导为主。实验组120人,首先建立人员的健康管理档案,进行人员的健康评估,针对每个患者的健康危险因素,制定健康管理干预措施以及健康指标的管理目标,并进行动态跟踪。6个月后统计资料,实验组与对照组进行对照分析。结果:本此实验历时6个月,通过对实验组和对照组的健康知识、生活方式、饮食结构等的健康教育干预和比较发现,健康管理干预后,试验组对慢性非传染性疾病的相关知识知晓明显优于对照组,其血压、血糖、血脂的知晓率、不良生活方式改善情况均明显好于对照组。实验组的多数患者还掌握了血压测量、指尖血糖检测、食用盐、食用油的控制,以及合理营养搭配、科学运动等。研究显示,健康管理班可让患者有效掌握健康相关知识与技能,并在实际中应用。特别是对自身疾病的认识、治疗、生活方式、饮结构改善方面,明显好于对照组。但是,对于吸烟与饮酒,两组患者在健康管理前后进行比较,没有显著性差异(p>0.05),提示短期健康管理对某些不良生活习惯影响不明显,可能需要更长时间的管理才有可能见效。结论:本研究以建立"健康管理培训班"的健康管理方式,对社区慢病患者进行系统的、有组织、有计划的健康知识与技能培训,达到了患者提升自我健康意识、管理自己健康生活方式的效果。对于克拉玛依区的社区慢病患者健康管理方式的探索,积累了一定的经验。     

高频度微卫星不稳定性大肠癌“修饰型”微卫星变化与MLH1及KRAS基因突变密切相关

本研究通过方法学的改良和观察方式的创新试图阐明这种现象的原因。微卫星非传统的检测方法仅能实现微卫星定性检测,我所在的研究组开发了自动片段分析双荧光标识技术,提高了微卫星检测的感度和重复性。并实现了微卫星片段变化长度的定量。小于6碱基的微卫星变化被定义为修饰型微卫星不稳定,大于8碱基的变化被定义为跳跃型微卫星不稳定．它们的电泳谱截然不同。前者表现为在非肿瘤来源微卫星位点基础上的增加或减少,后者表现为距离非肿瘤微卫星片段远隔部位的新波形的出现。通过研究我们发现,在DNA错配修复缺陷细胞系及基因敲除大鼠自发肿瘤样本,仅有修饰型微卫星不稳定性检出;在人类DNA错配修复缺陷细胞系连续80次传代也没有检出跳跃型变化。跳跃型变化不能通过简单重复序列不稳定基础上的增加或减少的累加而获得。在76例散发大肠癌,我们检测了微卫星不稳定性,KRAS基因突变,并对高频度微卫星不稳定性病例的两个主要DNA错配修复基因MSH2和MLH1进行了全长测序。我们发现,在大肠癌,按频度的传统分类与按波形变化的分类有高度的一致性,高频度微卫星不稳定性病例均检测到跳跃型表现,低频度微卫星不稳定性都表现为修饰型变化。在12例高频度微卫星不稳定病例,有三例检出了跳跃型和修饰型同时存在微卫星不稳定的特殊表型,这3例均检出KRAS的突变,更有趣的是该3例病例也同时检出了DNA错配修复基因MLH1的变异。而在其他9例高频度微卫星不稳定病例,KRAS突变及MLH1、MSH2突变未检出。通过对突变谱的分析我们还发现,修饰型微卫星不稳定与KRAS基因12号密码子的转换型突变高度相关,而微卫星稳定的病例检出的KRAS基因12号密码子突变多为颠换型突变。修饰型微卫星不稳定表型检出的高频度转换?