高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因

用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶II(egⅡ)基因.扩增基因经EcoR I和Not I双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ.通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌...     

大叶紫珠中得到的一个新苯丙素类衍生物（英文）北大核心CSCD

采用硅胶、ODS和葡聚糖凝胶LH-20柱层析方法,从大叶紫珠(马鞭草科)70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位得到一个新的苯丙素类衍生物。采用包括电喷雾离子化高分辨质谱和一维、二维核磁共振等多种光谱学手段鉴定该化合物结构为2-甲氧基对苯二酚-4-O-[(5-O-反式-咖啡酰)-β-D-呋喃芹菜糖]-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。     

利用毕赤酵母系统直接分泌表达具有活性的谷氨酰胺转胺酶

使用异源表达系统直接分泌表达具有活性的微生物谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)是目前最具前景的MTG生产方法之一,但由于产量较低无法实现工业化生产.毕赤酵母是近年来发展出的高效蛋白表达系统.通过采用pro序列与成熟MTG基因共表达的策略,成功地实现了用重组毕赤酵母分泌表达具有活性的茂原链霉菌Streptomyces mobaraense MTG.进一步通过对pro序列和MTG基因拷贝数以及重组酵母培养条件的优化,最终使得MTG在1L发酵罐中高密度发酵的酶活达到7.3 U/mL,为MTG的工业化生产奠定了基础.     

稀碱法提取食用蝇蛆蛋白

对蝇蛆粉充分脱脂后采用稀碱法提取蝇蛆蛋白。结果表明,液料比、浸提温度、碱浓度对提取得率有显著影响(P<0.01),提取时间对提取得率影响差异不显著。蛋白提取的最佳条件为:液料比20mL/g,浸提温度80℃,浸提时间2h,碱浓度1%(w/v)。在此条件下,所得蝇蛆蛋白粉蛋白氮含量为11.14%,蛋白得率为57.53%,提取效率为69.84%。对最优条件下得到的蝇蛆蛋白粉进行理化指标检测,并与速溶豆粉的企业标准以及脱脂乳粉的国家标准进行比较。结果表明,水分、灰分、脂肪、蛋白含量均已达到可食用级别的要求,重金属铅、汞、砷含量均低于限量要求,微生物检测不含致病菌和大肠杆菌,在最优提取条件下所得蝇蛆蛋白粉,综合指标已达可食用标准。     

棉铃虫多核型多角体病毒38k基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构的预测

采用半补齐方法建立棉铃虫多核衣壳型多角体病毒基因组文库,通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得了38k基因.该基因上游具有晚期调控保守序列TTAAG,是一个晚期表达基因,基因阅读框为903 bp,共编码300个氨基酸,氨基酸序列同源性分析结果表明其与α类杆状病毒的同源性较高,有较近的亲缘关系.氨基酸高级结构的分析表明其与与磷酸酶结构相似性达到95%,与病毒核衣壳的组装有关.     

中红侧茧蜂多分DNA病毒基本特征研究

本文首次报道中红侧沟茧蜂(Microplitis mediator)雌蜂卵巢中存在多分DNA病毒(Microplitis mediator Plolydnavirus,MmPDV),初步研究了MmPDV形态和基本生理生化特征。利用蔗糖密度梯度超速离心分离纯化了MmPDv粒子,电镜负染显示PDV粒子分三段,带有－明显的尾部结构,大小约为130×35nm;SDS-PAGE电泳条带较多,至少可以分辨出26个电泳条带,表明病毒粒子衣壳蛋白复杂;琼脂糖凝胶电泳显示MmPDV基因组至少由大小不同、丰度不等的14个DNA分子组成,用6种内切酶(EcoRI,HindⅢ,BssHⅡ,Pst I,BamH I,Bgl I)酶切MmPDV基因组后,估算出MmPDV基因组大小约为l08kb。用雌蜂输卵管萼液注射小地老虎幼虫,注射后的小地老虎体重和龄期发育动态表明,MmPDV具有抑制寄主生长发育的生理功能。     

一种中红侧沟茧蜂畸形细胞分泌的寄生特异蛋白

SDS-PAGE电泳表明,黏虫Pseudaletia separa-ta、棉铃虫 Helicoverpa armigera、小地老虎 Agrotisypsilon的幼虫受中红侧沟茧蜂Microplitis mediator寄生后,血淋巴中都出现一个98.6 kDa的寄生特异蛋白(p98.6)。畸形细胞(teratocytes)的体外培养发现,p98.6是由来自中红侧沟茧蜂胚胎浆膜层的畸形细胞分泌的。这一结果将为研究寄生蜂的寄生生理和畸形细胞在协调寄生蜂和寄主关系中的作用打下基础。     

畸形细胞生物学意义的探讨

中红侧沟茧蜂Microplitis mediator不同个体的畸形细胞在开始形成时,数目和大小比较恒定,为930±78个,直径13.6±1.8μm。到寄生后期,不同个体间的数目和大小变化很大,其变异系数分别为41.77和21.92(半径),但单位质量的寄主所含细胞的体积却相对比较恒定,变异系数为8.95。畸形细胞注射黏虫的实验表明,畸形细胞通过降低寄主的体重来抑制寄主的发育,但寄主可以克服这种抑制作用。这些结果暗示了寄主和畸形细胞两者之间存在一种营养上的关系。     

华支睾吸虫囊蚴存活时限的观察

本文对华支睾吸虫囊蚴在麦重申内和鱼体死亡腐烂分离出在水中存活时限作了初步观察。自鱼体死后４，７，９，１２，１５及１６天时各镜检１００个囊蚴，到１２天时有４２％的囊蚴存活。捕获阳性麦穗鱼在室内饲养，１年后囊蚴几何均数下降７０．８３％；并以各月龄囊蚴民活数为依据，作了简单略生命表分析。