安徽东至中药材粗榧高效液相指纹图谱和化学成分分析

建立安徽东至粗榧药材高效液相指纹图谱,比较不同产地、不同干燥方法、不同药用部位粗榧药材的质量.以Kromasil C18为分析柱,用甲醇-乙腈(1:1)和0.1%醋酸水溶液梯度洗脱进行色谱分离,利用有效部位HPLC图谱辅助对共有峰进行指认,标示出13个共有峰,使用计算机辅助相似度评价软件进行数据处理.通过对不同产地、不同干燥方法、不同药用部位粗榧药材指纹图谱的分析,发现不同来源粗榧药材化学组成相似,其相对比例具有差异.通过HPLC-UV-MS/MS联用分析以及分离纯化鉴定两个主要化学成分的结构,它们分别为芹菜素-5-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷,芹菜素-5-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-6"-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷,干燥过程可能使它们发生转化.指纹图谱用于粗榧药材的质量评价切实可行,方法重现性好.     

用于筛选shRNA的新型双萤光素酶报告基因载体的构建及应用

目的:构建一个新型双萤光素酶报告基因载体用于准确高效地筛选有效抑制靶基因表达的shRNA。方法:采用PCR、定向克隆、基因重组等分子生物学方法,将双萤光素酶报告基因系统中需要的报告基因载体、shRNA真核表达载体和内参载体三个功能,整合于一个新型的双萤光素酶报告基因载体pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA之中。应用该载体对靶向人PD1基因以及Furin基因的shRNA进行干涉效果比较。结果:应用p FLuc-C-TK-RLuc-shRNA载体进行单质粒转染方法与传统的三质粒转染方法均提示shRNA#1对靶基因PD1的抑制效果最优;但是使用新型双萤光素酶报告基因载体检测结果的标准差数值显著低于传统方法。以pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA单质粒转染方法得到的各组样品结果的均一性显著提高,能够准确地反映出shRNA#3较shRNA#2具有更强的Furin基因抑制作用;而传统方法未能有效判断二者的差异。结论:新型双萤光素酶报告基因载体简化了操作步骤,降低了传统三质粒共转染方法所引起的检测结果大幅波动,进一步增强了双萤光素酶报告基因系统的信噪比,提高了筛选抑制靶基因表达shRNA的准确性。     

遗传算法——进化论思想与遗传学原理在工程优化中的应用

优胜劣汰是自然界物种进化的法则,近年来,生物科学中的进化论思想与遗传学原理被成功地应用于工程中优化问题的计算,于是产生了一种不同于传统算法的优化算法———遗传算法（ＧＡ）。本文介绍遗传算法所采用的进化论思想和遗传学原理,遗传算法的基本操作、算法步骤、不同于传统算法的特点以及遗传算法的发展历史与应用情况等,并对遗传算法对生物科学的可能应用作了简单的展望。     

甜橙黄酮通过调节AMPK/mTOR信号通路改善呼吸道合胞病毒感染大鼠的肺组织损伤

摘要 目的：探讨甜橙黄酮通过AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对呼吸道合胞病毒（RSV）感染大鼠肺组织损伤的改善作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组、甜橙黄酮低剂量组（14 mg/kg）、甜橙黄酮中剂量组（28 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量组（56 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量+AICAR组（56 mg/kg+500 mg/kg的AMPK激活剂AICAR）,计算大鼠肺指数。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法测定肺组织RSV病毒载量,酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠肺泡灌洗液炎症因子水平,HE染色测定肺组织病理,蛋白免疫印迹（Western blot）法测定AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠肺组织存在炎性浸润,排列松散,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比,甜橙黄酮低剂量组、甜橙黄酮中剂量组、甜橙黄酮高剂量组大鼠肺组织损伤减轻,大鼠肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达降低（P＜0.05）;与甜橙黄酮高剂量组相比,甜橙黄酮高剂量+AICAR组大鼠肺组织损伤加重,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、MTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：甜橙黄酮可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路发挥对RSV诱导的大鼠抗炎、抗病毒、抗肺部损伤作用。     

东太平洋中部中上层鲨鱼群落营养生态位分化

鲨鱼在大洋生态系统中占据着重要的生态地位,其作为顶级捕食者,通过下行效应直接影响生态系统的稳定.稳定同位素技术是目前研究摄食生态学强有力的手段之一,可利用碳氮稳定同位素在食物网中的特性分别指示鲨鱼的食物来源和营养级.本研究选取8种130尾采集自东太平洋中部的中上层鲨鱼,应用稳定同位素绘制其种群生态位图谱,比较不同种群间的生态地位及资源分配方式上的差异.结果表明:不同鲨鱼种群碳、氮稳定同位素比值存在显著差异;8种鲨鱼在东太平洋生态系统中的营养级为4.3~5.4,大青鲨、尖吻鲭鲨与其他6种鲨鱼存在摄食隔离,表现出独特的营养生态地位.这些结果充分证明大洋性中上层鲨鱼并非生态系统的冗余种,其营养生态位的独特性不会被其他捕食者简单地替代和弥补.     

麻疯树皮的化学成分研究

从麻疯树(Jatrophac curcus L.)的树皮中分离得到12个化合物,经理化常数和波谱鉴定(IR,1H NMR,13C NMR,EI-MS)分别为二十六酸甲酯(1),β-谷甾醇(2),蒲公英萜醇(3),蒲公英甾醇(4),伪蒲公英甾醇(5),curcusones A(6),curcusones B(7),jatropholone A(8),jatropholone B(9),3,3′,4-三甲氧基鞣花酸(10),胡萝卜甙(11),蔗糖(12)。其中化合物1,4,5,10,12为首次从该植物中分离得到。     

木聚糖酶高产菌株选育

以黑曲霉为出发菌,经紫外线和亚硝基胍（NTG）交替诱变处理,获得一株木聚糖酶高产菌,并初步研究了其固体发酵条件,在该条件下最高酶活力可达3181IU／min.gdw。     

细菌人工染色体基因组文库构建关键技术研究

基因组文库是进行分子克隆和基因结构与功能研究的基础,完整覆盖的基因组文库的构建,使基因组任何DNA片段的筛选和获得成为可能.细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)与其它载体系统相比具有转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收,高覆盖率、稳定性强,并且具有易分离和操作等特性等优点而被广泛应用.作为物种保护策略的重要部分,构建我国濒危动植物品种基因组BAC文库,对于其遗传资源的保护和研究具有非常重要的作用.在查阅大量国内外相关资料的基础上,就BAC基因组文库构建过程中栽体的制备、高分子量DNA的制备、大片段DNA的回收、连接与电击转化、基因组BAC文库质量鉴定等几个重点、难点问题进行了详细的论述和分析,对于构建高分子量插入片段、高覆盖率和稳定性的基因组文库提供理论基础与技术支撑.     

结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药机制的研究进展

耐多药结核病的出现和流行对结核病的防控造成了严重威胁。乙胺丁醇(Ethambutol, EMB)是一线抗结核药物,常与异烟肼、利福平等联合应用,还可用于耐药结核病的治疗。但近年来EMB耐药形势严峻,我国复治结核病患者中EMB耐药率已达17.2%,并呈上升趋势;耐多药结核病患者中,EMB耐药率约为51.3%~66.7%,情况不容乐观。明确EMB耐药的产生机制对于有效防控EMB耐药率的上升、充分发挥EMB的作用十分重要,因此本文对结核分枝杆菌EMB的耐药现状、EMB的作用机制及其耐药产生机制方面的研究进展进行了综述。     

虎源犬瘟热病毒P基因的遗传进化分析

根据GenBank中犬瘟热病毒基因组(Canine distemper virus,CDV)P基因序列,设计合成一对特异性引物,以虎源犬瘟热病毒的总RNA为模板,RT-PCR扩增P基因,并进行克隆与序列分析.结果显示,CDV虎源犬瘟热病毒P基因序列与GenBank中的10种不同毒株AY466011、AY964113、AF181446、AY386315、AF259549、AJ582385、AB212727、AB212962、AY130857和U53712的同源性分别为93%、95%、93%、91%、91%、95%、94%、96%、98%和93%,经过基因序列分析,发现聚合酶P基因包含了与10个病毒毒株共有序列的6个不同改变(change),其中位点2 243 C和位点2 465 A在虎犬瘟热毒株、AF466011毒株、AY130857毒株中保留,种系进化分析显示,三者的亲缘关系最近.表明位点2 243与2 465的点突变在犬瘟热病毒宿主闻的传播极其重要,P基因结构的稍微变化是导致病毒在不同寄主中增殖的活力改变的重要因素.