抗TNF-α单链抗体的表达及其纯化

克隆抗人肿瘤坏死因子(TNF-α)鼠源单抗的可变区基因以构建其单链抗体(ScFv)表达载体,实现在大肠杆菌的表达,并进行ScFv的可溶性纯化与鉴定。采用RT-PCR技术,以前导肽序列的引物从1个分泌抗人TNF-α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因(VL,VH),构建ScFv基因,将ScFv基因片段与pGEX-4T-1表达载体连接,在大肠杆菌中表达并采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)进行可溶性纯化,最后鉴定其生物活性。结果显示,得到了功能性重排的轻、重链可变区基因,分别构建了VH和VL不同连接顺序的HLL(VH-Linker-VL)和LLH(VL-Linker-VH)两种ScFv,LLH的表达量较HLL的高,但亲和力不及HLL。采用Sarkosyl溶解包涵体,对目的蛋白进行可溶性纯化,蛋白纯度达到90%,纯化后的蛋白经ELISA和WB证明ScFv维持了亲本抗体与TNF-α特异性结合的能力,且具有细胞毒中和活性。实验中研究探索了一种新颖的,操作简单,省时的裂解、纯化方案,实现了单链抗体经原核系统的表达后得以可溶性纯化。     

烟草HrBP的研究与应用

旨在进一步发掘HrBP在新农药创制和抗病品种选育等方面的价值,采用BLAST和Clustal X2软件对HrBP进行序列同源性分析,发现其序列较保守;采用PSIPRED Protein Structure Prediction在线服务器进行烟草HrBP二级结构预测,采用UCLDepartment of Computer Science进行HrBP跨膜结构预测,发现两种可能存在的跨膜方式;采用SWISS-MODEL、Phyre和CPH进行HrBP空间结构预测,发现以膜蛋白为模板进行模建的蛋白具有相似的空间结构;建立基于Real-time PCR的HrBP mRNA定量分析方法,其相关系数为0.999 6;通过ProtScale方法分析HrBP抗原指数,并获得序列特异性较高的多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法制备多肽,并由此制备多克隆抗体,采用Indirect-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,表明多克隆抗体可特异识别烟草HrBP。采用DIBA和Western blotting试验研究多克隆抗体对常见植物的抗原识别特性,发现多克隆抗体对这些植物的HrBP均有一定识别能力。此外,采用Real-time PCR和Indirect-ELISA等方法进行烟草各组织部位HrBP的表达量的研究,发现HrBP在各组织部位存在差异表达。     

益生乳杆菌的筛选及特性研究

根据对优良益生菌的要求,从健康乳猪肠道中分离筛选到13株乳杆菌,其中嗜酸乳杆菌3株、干酪乳杆菌1株、链状乳杆菌1株、发酵乳杆菌8株。所选菌株能耐受1.0％的牛胆盐,对 pH3.0的酸度有较强的抵抗力,并能抑制常见致病菌,对小白鼠安全无毒,是制备益生素的优良菌种。     

鸟苷酸结合蛋白家族在感染性疾病中调控炎症小体活化的研究进展

鸟苷酸结合蛋白(guanylate-binding proteins,GBP)是一类干扰素诱导蛋白，在应对细菌、病毒、衣原体以及寄生虫等病原体感染时，其发挥的作用存在差异，并且影响感染性疾病的发展和结局。目前，研究者发现在细菌等病原体感染引发的细胞自主免疫中，GBP蛋白通过影响炎症小体的经典和非经典活化途径调控细胞焦亡。本文对GBP家族成员结构、进化特征以及炎症小体的经典和非经典活化途径进行了介绍，综述了GBP蛋白调控炎症小体活化的相关研究进展，归纳总结了GBP蛋白影响不同病原体感染的作用机制，以期为感染性疾病的发病机制和诊疗提供新的基础研究线索。     

纳米药物递送系统在基于化疗的联合治疗中的研究进展

肿瘤是一种病理过程复杂的疾病。大多数肿瘤患者接受化疗和放疗，但这些治疗通常只对部分有效，并产生各种严重的副作用。因此，有必要开发新的治疗策略。联合治疗是目前肿瘤治疗的热点，联合用药引起的多种协同作用是提高抗肿瘤活性的关键。纳米药物递送系统的出现对临床治疗产生了深远的影响。药物的体内递送常不能达到令人满意的治疗效果，而纳米药物递送系统可以实现肿瘤靶向给药，在提高抗肿瘤效果的同时降低药物的毒副作用。本文介绍了多种基于化疗的联合治疗方法，重点阐述了纳米药物递送系统在基于化疗的联合治疗中的运用，并对该领域面临的挑战和未来发展方向进行了展望。     

山东荚蒾 属一新变种

发表了山东荚属一新变种.