活疫苗及其生产基质中Sendai病毒RT-PCR检测方法的研究

目的建立检测Sendai病毒的RT-PCR方法并应用于活疫苗及其生产基质中Sendai病毒的检测.方法将Sendai病毒E17株接种9日龄鸡胚尿囊腔,72h后收集尿囊液,用于提取病毒RNA,并逆转录成cDNA,用两对针对Sendai病毒NP基因设计的外引物和内引物分别进行扩增.扩增产物克隆于T-载体,并测序.尿囊液按10倍倍比稀释,进行敏感性实验.将该方法用于检测乙脑减毒活疫苗和用于生产疫苗用的普通级乳地鼠肾中的Sendai病毒.结果外引物和内引物的PCR分别扩增出684bp和248bp的片段,外引物PCR产物的测序结果与Genbank报告的序列完全一致.敏感性实验结果表明,第一次PCR可检测到10-4病毒滴度,巢式PCR可检测到10-7病毒滴度.乙脑减毒活疫苗和乳地鼠肾的检测结果为阴性.结论建立检测Sendai病毒的RT-PCR方法具有很高的特异性和敏感性.     

厚果鸡血藤的化学成分研究

继厚果鸡血藤化学成分的研究（Ⅰ）、（Ⅱ）之后,又从厚果鸡血藤Millettia pachycar pa Benth。根部分离得到多个化合物,经理化分析和波谱分析,确定了其中七个黄酮类化合物的结构为3,3′,4′5′－四甲氧基呋喃[4^∥,5^∥：8,7]黄酮（Ⅰ）,3,3′－二甲氧基呋喃[4^∥,5^∥：8,7]黄酮（Ⅱ）,2,3－二甲氧基呋喃[4′,5′：11,10]－7－氧代[2]苯吡喃[4,3－b][1]－苯吡喃（Ⅲ）,呋喃[4^∥,5^∥：8,7]黄酮（Ⅳ,Lanceolatin B),3-甲氧基－2^∥,2^∥-二甲基吡喃[5^∥,6^∥：8,7]黄酮（Ⅴ）,5－甲氧基呋喃[4^∥,5^∥：7,6]黄酮（Ⅵ,pinnatin）,2^∥,2^∥-二甲基吡喃[5^∥,6^∥：8,7]黄烷酮（Ⅷ,（-）-isolonchocarpin）。这七个化合物皆为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ为新的化合物,分别命名为厚果鸡血藤丙素（pachycarin C)、厚果鸡血藤丁素（pachycarin D)和厚果鸡血藤戊素（pachycarin E）。     

突触前膜蛋白激酶C的活化参与介导海马神经元强直后增强

囊泡胞吐作用 (vesicleexocytosis)是由突触囊泡和突触膜蛋白之间复杂的相互作用最终导致的。参与此过程的很多膜蛋白是蛋白激酶的作用底物。外源性蛋白激酶激活剂能增加突触囊泡释放概率 (releaseprob ability)。但是 ,蛋白激酶如何激活并影响胞吐作用 ,却尚未知晓。一般认为 ,强直后增强 (post tetanicpotentiation ,PTP)是谷氨酸瞬间释放的结果 ,由短时高频刺激引发突触前膜内Ca2 +水平升高所致。但美国马里兰大学医学院的科研人员最近发现 ,蛋白激酶C也参与介导PTP。他们发现 ,大鼠海马苔藓纤维末端 (hippocampusmossyfiberterminal…     

烟粉虱(Bemisia tabaci)的寄主选择性

通过田间系统调查、实验室嗅觉测定、笼内和培养皿内自由扩散观察,对烟粉虱的寄主选择性进行了研究.结果表明,在田间,烟粉虱对不同的寄主植物存在明显的寄主选择性,其中对茄子、花椰菜、黄瓜等植物具有较强的嗜性,而对蕹菜、芹菜、苋菜等植物的嗜性较差;烟粉虱对同一植物的不同品种也有明显的选择性.烟粉虱对寄主植物颜色有明显的选择性,选择结果与烟粉虱对这些寄主的嗜性趋势基本一致.烟粉虱对单株寄主植物的嗅觉反应不敏感,但对植物叶片的乙醇抽提物有明显的嗅觉反应,并表现出较强的寄主选择性.在养虫笼内,烟粉虱从虫源皿向寄主植物自由扩散的过程中,在不同寄主植物和同一植物的不同品种上着落的成虫数量不同,并且在一定的时间范围内,着落在寄主叶片上的虫量还会不断的发生变化.     

悬钩子属植物的开发利用概述

综合了国内外学者对悬钩子属植物的调查、研究 ,阐述了该属植物的生物学特征 ,地理分布 ,栽培状况 ,生理生化特征 ,药用有效成分分析 ,药理作用和开发利用方面的研究进展 ,并针对当前国内对悬钩子属植物的利用 ,提出了保护野生资源 ,发展人工种植 ,合理利用资源 ,制定中草药生产技术标准操作规程 (SOP)和中草药生产质量管理规范 (GAP) ,鉴定药用有效成分 ,开发相关有机食品和保健产品等一系列合理化建议     

灰色链霉菌中存在质粒及其和链霉素生物合成的关系

灰色链霉菌 No 45-706 (Val-)经36℃处理后,100％的菌落都不能形成气生菌丝,在28℃经多次传代培养,气生菌丝生长受抑制的突变株的出现最终频率为9．0％,而同时氨基酸缺陷型(Val-)回复突变率是6．63×10-6。高温突变株No 45-3 (bald)经自发和NTG诱发突变,均未得到气生菌丝回复生长的菌落,但当用NTG处理菌株No 45—706(Val-)时,却得到了1.26×10-6的缬氨酸营养缺陷回复突变率。     

过表达ER恢复雌激素对子宫内膜癌KLE细胞中Notch信号通路的调控

目的：通过观察雌激素对子宫内膜癌KLE细胞中Notch信号通路的影响,探讨过表达雌激素核受体（estrogenreceptor,ER）是否可以恢复雌激素对Notch信号通路的调控作用,继而调节细胞增殖活性。方法：MTT检测雌激素及Notch信号通路对细胞增殖活性的影响;RT．PCR及Westem．blotting检测雌激素及Notch通路抑制剂DAPT对Notch表达的影响;质粒的抽提及转染使KLE细胞中的雌激素核受体ER过表达。结果：雌激素呈剂量依赖效应促进KLE细胞的增殖活性,其中以雌激素浓度为1．0×10-9M时最明显（相对于对照组为1．25±0．026,P〈0．05）;抑制Notch信号通路的表达可以明显下调KLE细胞的增殖活性（0．76±0．02,P〈0．05）;在KLE细胞中,雌激素对Notch的表达没有明显的调控作用,但是将其雌激素核受体过表达后,雌激素可明显上调Notch的表达,并显著促进细胞的增殖活性（1．24±0．02,P〈0．05）。结论：在ER阴性的子宫内膜癌细胞中过表达ER,可以恢复雌激素对Notch信号通路的调控,从而进一步的调控细胞增殖活性。     

三裂叶豚草的化感作用研究

 本文研究了在我国东北地区广泛蔓延的菊科杂草—三裂叶豚草(Ambrosia trifida)对大豆、玉米、小麦、水稻的化感作用(Allelopathy)。通过对三裂叶豚草的不同部位(挥发物、茎叶、根、根区土壤)的化感活性的研究,发现三裂叶豚草的挥发物和根区土壤对作物无明显的作用;茎叶部分的水浸液对实验作物的种子萌发和幼苗的幼根伸长有明显的抑制作用,同时使根系形态发生较大的变化;根的水浸液对作物的幼芽伸长有一定的促进作用。在上述的研究基础上,对不同的活性组分进行了GC、GC/MS分析．结果表明主要的化感成分可能为α-蒎烯、β-蒎烯、2-冰片烯、里那醇、冰片、4-萜品醇、樟脑、α-萜品醇、马鞭烯酮、橙花叔醇、法尼烯、勺叶桉醇等。由此我们分析三裂叶豚草主要是通过雨水淋溶的方式向周围环境释放化感物质,从而对其它植物产生影响,加强自身在自然界的竞争力。     

斜纹夜蛾泛素基因的克隆及表达

泛素介导的蛋白质降解途径对脑内蛋白的选择性降解起着重要作用。设计一对简并引物,从斜纹夜娥(Spodoptera litura)细胞中克隆了泛素基因的编码区,CenBank登录号AF436066。序列分析表明,该编码区的长度为228bp,编码由76个氨基酸组成的、分子质量为8．56kD的蛋白,其等电点为6．56。同源性比较发现,斜纹夜峨泛素基因不仅与其它真核生物的泛素基因在氨基酸水平上具有96％以上的相似性,而且与斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltMNPV)泛素基因的同源性为84％。RT—PCR分析发现,泛素基因在所检测的斜纹夜蛾幼虫多种组织,尤其是脂肪体中均有表达。采用构建的原核表达载体pQEUB,在大肠杆菌M15中诱导并高效表达出了带有His—tag的重组融合蛋白,薄层扫描分析得知靶蛋白约占总蛋白的37％。利用Ni—NTA亲和层析胶纯化得到重组融合蛋白,经SDS—PAGE鉴定为单一区带,为进一步研究S．litura泛素在SpltMNPV感染中的作用打下了基础。