光电阅读机在大人群现场调查中数据处理及质量控制 的应用

目的:探讨光电阅读机在大样本现场调查项目质量控制和数据录入中的作用.方法:使用光电阅读机读入《子宫颈癌危险因素调查表》信息并进行表格质量评估,核查调查表中调查对象编码缺失、重复及进行读入信息一致性比对.结果:在录入的70160份数据中,调查对象编码缺失率为0.87％,调查对象编码重复率为0.79％,信息一致率为99.47％.3个项目点连续三个月质量控制,表格不合格率略有下降.结论:在大人群现场调查项目中通过光电阅读机进行质量控制及数据录入,能快速准确的将纸质信息转化为电子信息,并对电子信息进行核查,能迅速将调查表评估结果和建议反馈给调查表填写人员,及时指导调查员改进调查项目的编写方法和调查表内容的填写方法,从而提高了调查表信息采集质量,促进项目科研数据真实可信.     

甲基丙二酰辅酶A 变位酶表达载体的构建及初步表达

目的:克隆表达甲基丙二酰辅酶A变位酶(MCM)蛋白,为进一步研究相关基因突变对功能的影响机制奠定基础。方法:自人外周血淋巴细胞中提取总RNA、逆转录,并与pET32a构建融合蛋白原核表达载体;优化蛋白表达诱导条件;经SDS-PAGE、WesternBlot检测目的蛋白的表达。结果:经酶切鉴定并经测序证实获得全长2210bp的甲基丙二酰辅酶A变位酶基因(MUT),并成功构建融合蛋白原核表达载体,SDS-PAGE在102 kDa处获得目的条带,Western Blot检测确定为MCM表达蛋白。结论:成功克隆表达出MCM表达蛋白。     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

锌对铅染毒新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨铅锌联合染毒对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响。方法:分离并培养原代成骨细胞,加入不同浓度铅、锌培养48h,检测其对成骨细胞增殖的作用;用碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活力。结果:在染铅48h后,当铅浓度≥10μmol/L时,细胞增殖功能下降(P<0.05);加锌干预48h后,铅+锌组细胞增殖功能均高于各自单独染铅组,其中铅(1μmol/L、10μmol/L)+锌(50μmol/L)组、铅(10)+锌(100)组与对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。铅干预48h后,100μmol/L铅组的ALP活力显著下(P<0.05),给予锌干预的铅锌联合染毒组,各组ALP活力均有增加,其中铅(1μmol/L、10μmol/L)+锌(50μmol/L)组ALP活力均高于对照组,而铅(100μmol/L)+锌(50μmol/L)组ALP活力低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:铅对成骨细胞有毒性作用,影响其增殖和分化功能;50μmol/L锌在一定程度上可以拮抗铅对成骨细胞增殖和分化功能的损伤,且对ALP活力的作用更显著,为铅中毒骨病的防治提供一定的科学依据。     

HPV-DNA 和TCT 检测在宫颈癌前病变筛查中的诊断价值

目的:探讨乳头瘤病毒定性检测( HPV- DNA)与液基薄层细胞学检查技术(TCT)在宫颈癌前病变中的诊断价值.方法:分别采用HPV- DNA及TCT法检测1536例患者,对TCT阳性、HPV- DNA阳性病例者进行阴道镜下活检.结果:随着病理诊断级别的升高,高危型HPV感染率上升,而低危型HPV感染多见于轻度不典型增生(CINⅠ)及其以下病变,HPV混合感染在各组间未见明显趋势.HPV-DNA检测与宫颈活检的符合率为66.78％.随着病理级别的升高,不典型鳞状细胞(ASCUS)组的感染率呈降低趋势,鳞状上皮内低度病变(LSIL)组感染率亦呈下降趋势,而鳞状上皮内高度病变(HSIL)组和鳞癌(SCC)组感染率均呈上升趋势,TCT检测与组织学诊断的符合率为66.67％,与HPV-DNA检查比较,差异无统计学意义(x=0.001,P＞0.05).结论:HPV-DNA、TCT及宫颈活检三者检测相结合,能明显提高诊断的正确性.     

菊苣基生叶中总黄酮提取工艺的研究

采用分光光度法,以亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠为试剂,芦丁为对照品,乙醇回流提取菊苣基生叶中总黄酮.在提取过程中,通过单因素实验分析了乙醇浓度、回流温度、回流时间及料液比等4个主要因素对提取率的影响.在单因素的基础上,通过正交实验,得到最佳提取工艺为:乙醇浓度为70%,料液比1:40,回流温度80℃,回流时间为2h.实验结果可靠,方法简便,最佳条件适合批量生产中该药材的提取.     

应用DNA芯片鉴定HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制

高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用,特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制,针对HPV18-E6基因设计siRNA序列,利用人源U6启动子为模板,经PCR表达框架法体外扩增,转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18 -E6基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后,与Agilent Human 1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理,确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证,结合PANTHER数据分析系统,将这些基因按照生物学功能进行归类,查阅GenBank数据库及相关文献,对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中,共筛出差异表达基因359个,其中307个基因表达上调,52个基因表达下调,主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21;凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA;泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C;角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18;抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明,HPV18 -E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达,从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时,抑癌基因的激活,角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调,都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.     

红树林区微生物资源

随着工业的迅猛发展,工业废料源源不断地向海洋输出,污染日趋严重。人们在大力开发海洋微生物自净能力的同时,也对海岸线的绿色卫士——红树林给予了密切关注,积极展开红树林区微生物资源的开发利用。本文从红树林区微生物库的资源多样性、微生物在物质循环和能量流动中的作用、生理活性物质、代谢产物和污染治理等几个方面进行综述。     

DNA测序中常见影响因素的研究

对测序中的模板、引物、测序反应条件及测序反应纯化方法和仪器操作等进行研究。结果显示测序模板的纯度影响测序的质量 ,浓度对测序的长度有影响。引物设计时除符合一般设计原则外 ,Tm值最好在5 0℃～ 6 0℃之间 ,且无成串的G、C。改变变性、退火、延伸的时间和温度对特殊DNA模板的序列测定有较好的效果。测序反应产物的纯化有几种方法 ,以 70 %乙醇沉淀法最经济、方便。因此模板的纯度和浓度对测序成功与否起决定作用。最佳反应条件可降低成本 ,提高测序成功率 ,乙醇沉淀法是首选的测序反应产物纯化方法。仪器操作熟练、正确与否也会影响测序结果。     

丁型肝炎病毒抗原的表达纯化和抗原性分析

丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus, HDV)是一种缺陷负链RNA病毒,其表面被乙肝病毒抗原(HBsAg)所包裹,内为丁型肝炎抗原(HDAg)及其基因组RNA。HDV基因组中有多个开放读码框架(ORF),其中只有抗基因组RNA链上的一个ORF编码的蛋白与HDAg相关[1,2]。HDV的抗原、抗体的测定是HDV感染诊断的主要标志,为了改进和提高HDV ELISA诊断试剂的质量,制备高纯度和高效价的HDAg尤为重要。为此,我们构建了HDAg基因表达株,以pQE表达系统为载体,利用该载体本身具备的6个组氨酸序列结构(6×histag)来纯化蛋白,直接提取高度纯化的HDAg,并应…