大剂量尿激酶治疗急性下肢深静脉血栓形成18例报告

目的：探讨大剂量尿激酶溶栓治疗急性下肢深静脉血栓形成（DVT）的临床效果。方法：本组18例DVT患者,先将0．9％的生理盐水(N．S）50ml＋尿激酶（UK）50万U,由患肢远端静脉推入,5分钟推完,然后由健肢、患肢分别将0．9％N．S1000ml UK100万U持续24小时静脉滴入,1次／日,共7－10天。结果：12例痊愈,6例显效,总治愈率为100％,未出现肺梗塞、脑溢血和死亡病例。结论：急性下肢深静脉血栓形成时,应用大剂量尿激酶,能显著提高患肢血管通畅率。     

东方鲎C因子的分段克隆及表达

东方鲎C因子 (factorCfromTachypleustridentatus)是鲎血细胞中的一种对内毒素敏感的丝氨酸蛋白酶原 ,它与内毒素特异结合的特性 ,使之具有很大的应用价值。根据报道的C因子序列 ,设计了两对引物 ,以中国福建沿海的东方鲎 (Tachypleustridentatus)为材料抽提其血细胞总RNA ,首次用RT PCR的方法分两段扩增了鲎血中编码C因子蛋白的基因全序列。序列分析表明 ,得到的FC基因与文献报道的来自日本的东方鲎的FC有很高的同源性。将分段克隆得到的两段FC片段经相应酶切后 ,与含T7启动子的质粒 pET 2 8a( )在一个体系中作连接反应 ,构建表达质粒pET2 8a FC ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选表达菌株。表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导表达 2 .5h后 ,收集菌体并超声破菌。经SDS PAGE分析表明 ,在 110kD左右处有明显的表达条带 ,大小与FC的计算分子量相吻合。但表达产物以包涵体形式存在。经洗涤与变复性后 ,重组FC在体外表现出明显的抑菌活性。同时蛋白质印迹实验也提示了在大肠杆菌中FC的单基因表达物可能发生部分自剪切反应 ,而形成了额外的免疫印迹条带     

经济社会新常态下的过度医疗再探讨

过度医疗作为新医改进程中亟待解决的社会热点和难点问题,是导致“看病贵、看病难”、“恶性医疗事件频发”的重要原因。本文重新探讨经济社会新常态下过度医疗的现状、表现形式和新特点,提出防治过度医疗的措施建议,以期从根本上解决“看病贵、看病难”问题,推进健康中国建设。     

小鼠2—细胞胚胎单个卵裂球体外培养及其发育形成囊胚的玻璃化冷冻保存技术的研究（简报）

The present experiments were designed to study the effects of glucose, EDTA, glutamine on the in vitro development of single blastomeres from 2-cell embryos in mouse, and the efficiency of cryopreservation of blastocysts from single blastomers with different vitrification. Single blastomeres derived from female ICR x male BDF1 2-cell embryos were cultured in mKRB with or without glucose, EDTA and glutamine, respectively. The expanded blastocyst rates were significantly different between in mKRB with glucose and without glucose (34% vs 65%); The blastomeres were cultured in mKRB with EDTA and glutamine but glucose, the expanded blastocyst rate (90%) was significantly higher than other groups. The blastocysts derived from single blastomeres were vitrified in liquid nitrogen after equilibration in GFS40 for 0.5-2 min, the survival rate 24%-51%. The blastocysts were pretreated in mPBS with 10% glycerol for 5 min, followed by exposure to GFS40 at 25 degrees C for 0.5 min, then vitrified in liquid nitrogen(two-step method), the survival rate was 61%. However, the survival rates increased to 64% and 70% when the blastocysts were vitrified(one-step method) ater equilibration in EFS40 at 25 degrees C for 0.5-1 min.     

Visualization of Golgia apparatus as an intracellular calcium store by laser scanning confocal microscope

Using laser scanning confocal microscopy,we have found that the in cells loaded with fluo-3/AM,highest intracellular Ca^2 in the perinuclear region is associated with the Golgi apparatus.The spatiotemporal subcellular distribution of Ca^2 in living human fibroblasts exposing to calcium-free medium in response to agonists has been investigated.PDGF,which releases Ca^2 from intracellular stores by inositol(1,4,5)-trisphosphate pathway ,produced a biphasic transient rise in intracellular calcium.The initial rise was resulted from a direct release of calcium from the golgi apparatus.Calcium could be also released from and reaccumulated into the Golgi apparatus by the stimulation of thapsigargin,an inhibitor of the Ca^2 transport ATPase of intracellular calcium store,Permeablizing the plasma membrane by 10μM digitonin resulted in the calcium release from the Golgi apparatus and depletion of the internal calcium store.These results suggest that the Golgi apparatus plays a role in Ca^2 regulation in signal transduction.     

磷限制下大型海灌与微灌间资源竞争理论的实验验证

用一次性培养结合Monod方程测得海洋微藻－亚心型扁藻（Tetraselmis subcordiformis(Wile)Hazen)与大型海藻－孔石莼（Ulva pertusa Kjellm.)磷限制下的生长动力参数。孔石莼具有较低的半饱和生长常数及最大生长率,其分别为0．016μmol/L和0．16d^-1,而亚心型扁藻的半饱和生长常数和最大生长率分别是0．021μmol/L和0.83d^-1。两种藻类间的营养竞争实验采用半连续培养法在磷限制制条件下进行,实验过程中,分别对两者施予相同或不同的去除率,使两者享有相同或不同的资源需求值R^*。由Monod方程所作的竞争预测与实验观察结果的比较显示：仅在两种藻类间的资源需求值R^*差异显著（t检验,P＜0．01）时,Monod方程才能对竞争结果作出较为准确的预测;在两种藻类享的相同的资源需求值R^*时,亚心型扁藻在竞争中取代孔石莼。Monod模型仅能部分预测大型海藻与海洋微藻间的竞争结果。     

一种简单有效的克隆未知旁侧DNA片段的方法

操作含长插入片段的DNA克隆时 ,经常需要进行亚克隆和测序实验。通常的方法首先是得到插入片段的限制性内切酶谱 ,然后选择合适的内切酶消化DNA ,分离靶片段 ,将其连接入质粒载体中进行下一步操作。但这种方法工作量大 ,步骤繁琐。在此 ,介绍一种不需要做限制性内切酶谱分析 ,而根据靶片段的旁侧序列直接进行亚克隆实验的方法。首先 ,选择合适的限制性内切酶消化含长插入片段的DNA克隆 ,其中一种酶切在已知的旁侧序列上 ,另一为随机选择 ;然后酶切混合物与线性化的质粒载体连接 ,转化细菌得到一“亚克隆库” ;将其中的克隆挑选入 96孔板培养后 ,按行或列混合菌液得到相应的“pool” ;最后 ,用PCR方法筛选获得含靶DNA片段的阳性克隆 ,其中所用的引物一个与已知的旁侧DNA序列配对 ,另一个与质粒载体上序列配对 ,PCR扩增已知的旁侧DNA片段以鉴定阳性克隆。多次独立实验表明该方法简单有效 ,可广泛用于亚克隆和DNA步移实验     

龙须菜及其色素突变体藻胆蛋白的光谱及分子特征的比较

对龙须菜（Gracilaria lemaneiformis Greville）及其色素突变体藻胆蛋白吸收光谱进行了比较研究,结果显示不同藻株藻红蛋白的吸收光谱有显的变化,而藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的基本相同。我们克隆了龙须菜及其色素突变体的藻红蛋白亚基的部分基因序列,用该基因序列推导出的氨基酸序列进行分析以揭示这一变化的分子机理,结果显示除几个氨基酸残基的替换外,几株藻间的藻红蛋白的氨基酸序列十分相似,一些氨基酸的替换发生在决定藻红蛋白二级结构及亚基间相互作用的区域,可能会影响藻胆蛋白的构型及相互作用,导致光谱性质的变化。     

鲍曼不动杆菌临床分布、耐药性分析和肺部感染病例的预后研究

目的了解浙江大学医学院附属第一医院临床分离鲍曼不动杆菌的分布情况、耐药状况以及肺部感染病例的临床预后,为临床鲍曼不动杆菌感染的治疗提供参考。方法分析该院2013年1月至2013年6月培养到的非重复鲍曼不动杆菌420株的临床分布和耐药性,回顾性分析鲍曼不动杆菌肺炎并接受头孢哌酮/舒巴坦治疗患者的临床资料。结果 420株鲍曼不动杆菌来源以重症监护室（ICU）为主,占45.96%。其次为外科（神经外科、肝胆外科）,占36.19%。标本构成中以呼吸道标本最高（66.90%）,其次为血培养（8.81%）。共有79例（18.8%）患者≥2个部位分离到鲍曼不动杆菌,其中62例（78.5%）呼吸道是首发的分离部位、之后出现第二个部位培养阳性。体外药敏显示,鲍曼不动杆菌对阿米卡星、替加环素、左氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为5.2%、15.9%、35.6%、64.2%、71.1%、79.1%和88.9%。选取其中诊断为肺炎患者72例。72例患者粗死亡14例（19.4%）。患者病情好转组治疗初C反应蛋白平均水平为69.5 mg/L、死亡组为137.6 mg/L,经比较差异有统计学意义（P〈0.05）;患者病情好转组治疗初APACHE II为16.4、死亡组为19.7,经比较两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论入住重症监护室、外科手术后患者是鲍曼不动杆菌分离的主要人群,18.8%的患者在多个部位培养到鲍曼不动杆菌,鲍曼不动杆菌耐药率高,抗菌药物选择困难。治疗初期C反应蛋白和APACHE II水平对预后有参考价值。     

不同生态环境对蒲公英超氧物歧化酶（SOD）的影响

选择干生,湿生,阳生,阴生四种生境中生长的蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz分根,叶,花分别测定了SOD活性和比活性,并比较了同工酶谱的变化情况,结果表明不同生境未能改变SOD的同工酶条带数,但对其活性大小有影响,这种影响尤其表现在根上,湿生和阴生根的SOD活性明显高于干生和阳生根的SOD活性,显示出蒲公英的不同器官适应不同的环境效应。