伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的疗效和安全性分析

目的 评价伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的疗效和安全性.方法 回顾性分析伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的有效性和安全性.治疗方法:静脉注射伊曲康唑0.2g静脉滴注q12h 1天或者2天后改为伊曲康唑0.2g静脉滴注qd,疗程2～4周.结果 共有16例患者符合入选标准和排除标准纳入本研究,男女比例为3∶1.其中4例由白色念珠菌感染所造成,4例为热带念珠菌感染,8例为曲霉感染.临床结果:4例肝衰竭合并白色念珠菌感染患者,其中3例治愈出院,1例死于肝衰竭.4例肝衰竭合并热带假丝酵母感染患者,其中2例治愈出院,1例死于肺部感染,1例死于肝衰竭.8例肝衰竭合并肺曲菌病感染患者中,5例感染控制,其中2例治愈出院,2例接受肝移植,1例死于肝衰竭.3例肺部感染加重,死于呼吸衰竭.结论 伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染安全有效,可以作为治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的选择.     

高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

目的：构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法：通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件（HRE）和最小CMV（mCMV）启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果：HRE／mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论：构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。     

根皮素对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：探讨根皮素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测不同浓度（30、40、50 ug/mL）根皮素对肝癌 HepG2 细胞增殖的抑制作用,流式细胞技术检测根皮素对HepG2细胞凋亡的影响,ELISA 法检测不同浓度根皮素干预后细胞中 Bcl-2 和Bax表达的变化,Western blot法检测30 ug/mL根皮素在8,16,24 小时后检测p-AKT 蛋白表达情况。结果：30、40 和50 ug/mL 的根皮素对肝癌HepG2 细胞的增殖均有抑制作用（P＜0.01）,同时,30、40 和50 ug/mL 的根皮素在24 小时后可诱导 HepG2 细胞发生早期凋亡,凋亡率分别为0.1321± 0.0224, 0.2607± 0.0457, 0.3712± 0.0884（P＜0.01）;另外,30、40 和50 ug/mL的 根皮素作用24 小时后细胞内Bcl-2 表达降低,Bax 表达增高（P＜0.01）;最后,30 ug/mL根皮素可以明显减少p-AKT 表达量,这 种作用呈现时间依赖性。结论：根皮素能够抑制肝癌HepG2 细胞的增殖和促进细胞凋亡。     

免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓源运动神经元的方法探讨

目的探讨应用免疫磁珠法分选脊髓源性运动神经元的实验条件,为研究运动神经元的特性,培养和移植创造有利条件。方法取孕16天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织,制备成单细胞悬液,应用免疫磁珠分选系统,在无血清限定性培养基条件下获得相对纯化的运动神经元。应用运动神经元特异的胆碱乙酰转移酶（ChAT）抗体对培养细胞进行免疫细胞化学鉴定。结果分离纯化的细胞在体外可以存活,经免疫荧光检测,ChAT阳性率可达95%。结论本实验提供了一种有效的纯化脊髓运动神经元的方法,纯化所得的运动神经元可用于进一步的运动神经元的后续实验研究。     

狂犬疫苗糖蛋白ELISA定量分析方法的建立及验证

为狂犬疫苗生产质量控制建立简便、高效、精准的糖蛋白体外效力分析方法,研制适用于狂犬疫苗生产质量控制的狂犬病毒糖蛋白酶联免疫吸附(ELISA)定量分析试剂。采用双抗体夹心法建立狂犬病毒糖蛋白ELISA定量分析体系,优化反应各项参数后考核试剂性能。线性范围为1~180 mIU/mL,灵敏度为0.4497 mIU/mL,分析内变异系数为5.8%~8.2%,分析间变异系数为7.2%~14.4%。用自制试剂与National Institutes of Health(NIH)动物法平行检测10份疫苗相关样品,两种方法测定结果的相对系数r²为0.8943,相关性良好。自制ELISA试剂各项性能指标良好,且与NIH动物法检测结果相关性良好,有望推广用于狂犬疫苗生产质量控制。     

地高辛标记探针在Southern杂交分析中的技术要点

外源基因是否成功导入受体材料的基因组中 ,必须从转化植株中找到分子生物学的检测证据。目前 ,PCR、Southern杂交等作为常用检测手段而被广泛采用。虽然 PCR技术可以快速得到结果 ,但是 ,以农杆菌介导的材料必须慎重这一结论 ,以免由于农杆菌污染造成假阳性。而 Southern分析由于操作程序繁琐 ,对植物基因组DNA的提取、纯化、酶切等技术要求较高 ,有时使杂交结果不甚理想。我们在植物基因转化的研究中 ,对荞麦 ,桑树 ,紫景天 ,洋麻等基因组 DNA的提取、纯化、酶切进行了探讨 ,对流程中的有关步骤进行技术改良 ,使酶切后的 PNA在凝胶…     

用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库*

采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。     

ERIC-PCR分子杂交技术分析大熊猫肠道菌群结构

目的了解大熊猫肠道微生物区系结构的相似性和稳定性,并找出大熊猫肠道微生物群落结构的变化与健康状况的关系。方法对上海动物园及上海野生动物园所饲养的3只大熊猫2次采集的粪便样品进行微生物群落总DNA的抽提,并以此为模板获得反映肠道微生物群落结构特征的ERIC—PCR和Southern杂交指纹图谱,比较各DNA样品指纹图谱的相似性指数。结果除国庆(大熊猫)的第1次采集的样品(当时处于腹泻状态),其他各DNA样品的ERIC-PCR及Southern杂交指纹图谱的相似性都达到85％～100％;佳斯及川川(大熊猫)2个个体2次采集的样品之间ERIC指纹图谱的相似性分别为93％和87％,而国庆腹泻时的样品与健康时的样品之间则为71％。结论大熊猫不同个体之间肠道微生物群落结构比较相似,而且同一个体在不同时期表现出比较高的稳定性,但当个体的健康出现问题时肠道优势菌菌群结构有一定波动。所采用的DNA提取方法、ERIC—PCR和Southern杂交指纹图谱的高度重复性证明了之一分子生态学技术在大熊猫肠道微生物区系动态监测中的可行性。     

重组人载脂蛋白ApoA-Ⅰ表达条件的优化

对大肠杆菌DH5α发酵培养表达人载脂蛋白ApoA-Ⅰ的发酵条件进行了优化研究.结果表明:将重组质粒pBV220-ApoA-Ⅰ转化不同的大肠杆菌宿主菌,筛选得高表达水平的E.coli DH5α/pBV220-ApoA-Ⅰ表达系统,摇瓶发酵表达率为22.2%,BL21(DE3)的表达水平与其相当,而TG1的表达率只有11%.在FMG-5L发酵罐进行发酵条件优化,认为细胞生长培养的最适pH为7.0,重组ApoA-Ⅰ表达时的最适pH为7.4.分批发酵的初始糖浓度为3.0 g·L-1,且碳氮源的最佳比例为2:1,使重组ApoA-Ⅰ表达率达总蛋白的40%,浓度达2.86g·L-1.     

肉苁蓉寄生对梭梭幼苗保护酶活性及渗透调节物质的影响

以寄生和未寄生肉苁蓉的梭梭为对象,分别测定其同化枝的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量,同时测定了2种条件下梭梭的渗透调节物质（可溶性蛋白质、可溶性糖、脯氨酸）含量,并采用隶属函数法对各个指标进行综合评定。结果显示：2种处理的梭梭在6—9月3种保护酶活性的变化趋势均为先升后降,且寄生肉苁蓉梭梭的保护酶活性在前期均高于未寄生的梭梭。梭梭在被肉苁蓉寄生后,MDA含量显著增加,且植株体内的主要渗透调节物质——可溶性蛋白质及脯氨酸含量均有不同程度的升高,但可溶性糖含量却有所降低。各指标的相关分析和综合评定结果表明,肉苁蓉的寄生给寄主梭梭造成了胁迫的环境,对寄主保护酶系统及渗透调节系统产生了明显的伤害,并降低了寄主梭梭的抗旱性。