计算机辅助CRISPR向导RNA设计

基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑已被成功应用于多种细胞类型中。计算机辅助的向导RNA(Guide RNA)设计是使用CRISPR系统成功进行基因编辑的关键步骤之一。目前的计算工作主要致力于利用计算模型来提高sgRNA的打靶效率并降低其脱靶。文中对于目前存在的sgRNA设计工具进行综述,并且说明可以通过建立高效的计算模型,对当前的异质基因编辑数据进行整合挖掘,以获得无偏差的sgRNA设计规则,并预测影响sgRNA设计的关键特征。笔者认为,对于sgRNA打靶和脱靶效果的系统总结和评价,将有助于使用CRISPR系统进行更加精准的基因编辑和基因治疗。     

补阳还五汤对脊髓损伤后大鼠大脑皮层运动神经元IL-17表达的影响

目的:通过观察补阳还五汤大鼠急性脊髓损伤后大脑神经元细胞凋亡及IL-17的表达的影响,探讨其神经保护机制。方法:SD大鼠24只,分成正常组、假手术组、SCI组、BYHWD组,通过在T3-T4横突间横断右侧半脊髓制备SCI模型,分别于手术前1d及术后1 d、1 w、4 w、8 w运动BBB评分评定大鼠后肢运动功能;术后8 w用Tunnel法检测神经细胞凋亡、免疫组化法检测大鼠神经细胞IL-17的表达。结果:BBB评分比较:SCI组、BYHWD组BBB评分明显低于正常组与假手术组,差异有统计学意义(P0.01);BYHWD组在术后4 w、8 w两个时间点均高于SCI组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞凋亡率比较:SCI组与BYHWD组细胞凋亡率均高于正常组与假手术组,且差异有统计学意义(P0.01)。BYHWD组凋亡率低于SCI组且差异有统计学意义(P0.01)。IL-17阳性细胞率比较:SCI组、BYHWD组IL-17阳性细胞率均显著高于正常组与假手术组(P0.01)。BYHWD组IL-17阳性细胞率显著低于SCI组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:SCI后大脑皮层神经元的凋亡可能与IL-17的表达增加有关,补阳还五汤可能通过下调IL-17的表达从而减少细胞凋亡。     

鲁西南地区苹果绵蚜(Eriosoma lanigerum)及其天敌种群动态与群落结构特征

通过田间蚜块计数、黄色粘虫板诱集、室内镜检等方法统计苹果绵蚜Eriosoma lanigerum (Hausmann)及其寄生性天敌日光蜂Aphelinus mali Haldeman种群数量,分析比较了它们的消长动态.利用群落结构特征指数研究比较了不同时期苹果绵蚜及其天敌群落多样性.连续2a调查发现,苹果绵蚜种群在鲁西南地区全年发生两个高峰,其中5月中、下旬～7月上旬为第一高峰期,8月下旬～10月中旬为第二高峰期.有翅蚜发生在4月上旬～6月上旬和9月上旬～10月上旬.不同时期,苹果绵蚜在苹果树体不同部位的种群数量存在差异,上半年,苹果绵蚜在根、树干及主枝部位分布密集,发生危害较重;7月中、下旬之后,苹果绵蚜在根及树干部位基本不再发生或发生较轻,而在枝干部位,包括主枝、侧枝和新梢,发生危害较重.7月份之前,日光蜂滞后于苹果绵蚜的发生高峰,其控制作用不很明显,7月份以后日光蜂跟随现象才比较明显,与苹果绵蚜的第二个发生高峰前期基本吻合,可以很好地控制苹果绵蚜的危害.鲁西南地区苹果绵蚜及其天敌群落多样性低,群落稳定性差,发现天敌23种,捕食性天敌亚群落中七星瓢虫Coccinella septempunctata Linnaeus、二星瓢虫Adalia bipunctata (Linnaeus)和叶色草蛉Chrysopa phyllochroma Waesmael等为优势种,特别是4、5月份,七星瓢虫和叶色草蛉可以很好地弥补因日光蜂跟随滞后而对苹果绵蚜控制作用的影响.这为保护利用自然天敌、可持续控制苹果绵蚜危害奠定了理论基础.     

麋鹿血液cDNA文库的构建

为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol 试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA 纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene 公司的cDNA 文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA 文库。初始文库滴度为1.96 ×106 pfu/ ml,总库容为1.96 ×106 个独立克隆;cDNA 插入片段平均长度约为1.0 kb;重组率为95.6 % 。文库各项指标均达标准经典cDNA 文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA 基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC 相关基因的分离。     

小熊猫圈养种群遗传多样性及其影响因子

利用寡核苷酸指纹探针ＬＺＦ－Ｉ检测了成都大熊猫繁育研究基地仿生态圈养场小熊猫种群全部２２只个体的ＤＮＡ指纹,检测结果表明其遗传多样性参数如下：⑴各体间ＤＡＮ指纹图的相似性为０．１７２;个体Ａ的指纹谱带在个体Ｂ中出现的概率为０．１８０６。⑵圈养种群的等位基因频率为０．０９４８,杂合率为９０．５２％,⑶种群中指名亚种亲本个体的引进是影响该种群遗传多样性的主要因子。     

低pH孵放、干热处理冻干静脉注射人免疫球蛋白的实验研究

主要介绍冻干静脉注射人免疫球蛋白 (IVIG)分别通过 60℃ 72h,80℃ 72h ,低pH孵放 2 1d处理后 ,IVIG的各项理化及生物活性的变化 ,以及IVIG经过低pH孵放的灭活病毒情况。实验结果表明 ,处理后的IVIG其IgG各组份相对含量、抗补体活性 (ACA)、前激肽释放酶激活剂 (PKA)、白喉抗体、抗 HBs等结果 ,除ACA ,PKA略有下降 ,其他指标无明显变化 ,各项指标均符合 2 0 0 0版《中国生物制品规程》 ;加热后没有新抗原产生。低pH孵放 2 1d通过加指示病毒的实验 ,病毒灭活效果达到 7.0 0logTCID50 / 0 .1mL以上 ,灭活病毒有效。     

用碱水解的方法测定蛋白质的消光系数

在蛋白质结构与功能的研究中,有时蛋白质溶液的浓度是一个重要的参数.紫外吸收法是测定蛋白质溶液浓度最为常用的方法,而已知蛋白质的消光系数是用紫外吸收法准确测定蛋白质溶液浓度的前提条件.在0.1 mol/L NaOH溶液中,蛋白质发生碱性水解,因而蛋白质溶液可以看作是色氨酸和酪氨酸的二元体系.以此为依据,给出了用碱水解的方法测定蛋白质消光系数的方法.这一方法操作步骤简便易行,蛋白质消光系数的计算公式简单明了.用这一碱水解的方法分别测定了几种氨基酸组成不同的蛋白质的消光系数,与文献数据对照,得到了令人满意的结果,测定误差均小于±5％.     

“全国媒介生物学和控制讲习班”在杭州市举办

根据我国卫生部和世界卫生组织卫生技术合作备忘录1982年实施计划的有关项目规定,世界卫生组织派遣方鎔镐(兼任协调员)、塞尔夫、泰瓦、林武烈等四位专家,于六月十四日至七月三日,在杭州市浙江省人民卫生实验院,与我国卫生部共同举办了为期三周的媒介生物学和控制讲习班。参加讲习班的四十名正式学员来自全国各省、市、自治区的卫生防疫站、寄研所以及有关科研单位。军队和部分海港也派员参加了讲习班。讲习班的课程安排密切结合我国的实际,除讲授蚊、蝇类外,还包括鼠、蚤、蜱螨、恙虫等重要媒介生物的生物学及控制。专家们对目前国际上媒介…     

NF-κB p65在皮肤血管瘤不同时期的表达

目的探讨NF-κB p65在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义.方法采用免疫组织化学方法(S-P法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织及内皮中NF-κB p65的表达水平.利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织NF-κB p65表达的平均光密度和平均阳性面积.结果增生期血管瘤内皮细胞NF-κB p65表达水平高于退化期,差异有显著性(P＜0.01),退化期血管瘤内皮细胞NF-κB p65表达水平与正常皮肤组织相比,差异无显著性(P＞0.05).结论 NF-κB p65可能通过正向调控血管生成因子的表达而促进血管瘤的形成.     

云南省花魔芋葡甘露聚糖提取方法的优化及测定

为探索云南省魔芋栽培现状,为魔芋葡甘露聚糖相关产品的开发提供技术支持,采集不同栽培地的花魔芋球茎,利用醇沉法设计正交实验提取魔芋球茎中葡甘露聚糖,优化提取方法并比较其含量差异。结果发现,四个因素对魔芋葡甘露聚糖的提取结果有不同程度的影响,其中因素A浸提温度对提取率影响最大,在魔芋葡甘露聚糖提取过程中,88℃提取率最高;醇沉时间及浸提时间对提取结果的影响次之;乙醇浓度相对于其他3个因素来说对实验的影响最小,各个因素对于提取结果影响的主次顺序为浸提温度(A)>醇沉时间(C)>浸提时间(B)>乙醇浓度(D)。魔芋葡甘露聚糖最佳的提取方法组合为A₂B₃C₁D₂,即88℃浸提0.5 h,85%乙醇醇沉6 h;此外,通过对比发现,不同产地的魔芋葡甘露聚糖提取率有差异,曲靖富源大河的花魔芋样品提取率最高,为12.87%,云南省昆明市禄劝县撒永山山区生产的魔芋葡甘露聚糖提取率为9.955%;其它地区如云南省曲靖市马龙县纳章方郎山区、云南省曲靖市马龙县大庄宜良山区的魔芋中粗葡甘露聚糖提取率分别为5....