Study on gene sensor based on primer extension

Based on the fact that the resonant frequency of a piezoelectric crystal is the function of its surface deposit, and that the primer extends after it hybridizes with the template, the primer extension gene sensor technique was developed. The prominent feature of the technique is that fast and sensitive frequency signals are used as the monitoring system of gene hybridization and primer strand extension. Results show that this technique may be used in homologous analysis of nucleic acid, trace DNA detection, and determining the integration of DNA. It may also be used for isolation of target gene, gene mutation analysis, and predicting the location of a gene in its genome.     

几种不同进化程度动物细胞内质网超微结构的比较研究

应用稼射电镜技术,高锰酸钾固定扫描电镜技术及生化分离技术,比较研究了家兔、家鸽、蟾蜍,鲤鱼、脉红螺肝细胞和眼虫的内质网超微结构及含量。透射电镜观察结果显示：在高等哺乳动物肝细胞内质网丰富,以扁囊结构为主,在整个细胞质内均有分布,主要存在于核周围,并伴有伴随线粒体分布的特征;蟾蜍肝细胞内质网稀少,以长管状平行排列,分布在细胞质的局部,鲤鱼肝细胞内质网呈小泡状均匀分布在细胞质中,脉红螺肝细胞及眼虫细胞     

非折叠蛋白质应答对人胚肾细胞293A迁移特性的影响

为了研究非折叠蛋白质应答对器官发生的影响,应用衣霉素诱导非折叠蛋白质应答并观察其对人胚肾细胞系293A迁移特性的影响。在实验中,应用划痕法对细胞迁移进行观察,并应用细胞黏附实验、荧光染色技术、扫描电镜技术及免疫印迹实验分别对细胞黏附特性、微管及微丝、细胞表面边缘的突起及小分子GTPase的表达水平进行研究。结果表明,非折叠蛋白质应答可以抑制细胞迁移,进一步的研究发现,非折叠蛋白质应答可以降低细胞的黏附能力、引起细胞骨架的重排、抑制伪足的形成并降低RhoA的表达水平。这提示,非折叠蛋白质应答可能通过抑制应激细胞的迁移为应激细胞的功能修复赢得了时间,在器官发生过程中发挥作用。     

人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与细胞内定位

应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase／reductase,NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材料,分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实,人肝脏NRDR具有视黄醛还原酶活性,在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的Km值和Vmax值分别(2.8±0.24)μM和(0.468±0.036)μmol／(min·mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa细胞后,应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR定位到过氧化物酶体是必需的,删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此,人肝脏NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。     

维甲酸诱导的人大肠癌细胞凋亡

本研究应用光镜、电镜技术、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记(TUNEL法),观察全反式维甲酸ATRA诱导的人大肠癌CCL229细胞凋亡特征。RA诱导CCL229细胞凋亡,光、电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的DNA ladder,DNA直方图上显示亚二倍体峰。10-8mol/L-105mol/L范围内,RA诱导CCL229细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性。     

CCL229细胞经诱导后蛋白激酶C及抑制剂活性的变化

检测以维甲酸(RA), 1, 25－二羟基维生素D₃(1,25(OH)₂VD₃)诱导2d、佛波酯（PMA）诱导6h的人大肠癌细胞CCL₂₂₉的蛋白激酶C（PKC）及其抑制剂活性．结果显示：诱导后PKC总活性升高(P<0.05); RA, 1, 25(OH)₂VD诱导引起细胞质PKC活性增加,PMA诱导后细胞膜PKC比率（细胞膜活性／总活性）显著升高(P<0.01);诱导后PKC抑制剂活性均降低,其中1, 25 (OH)₂VD₃组与对照组有显著差异(P<0.05);提示PMA引起PKC从细胞质向细胞膜转移,不同药物诱导后PKC及其抑制剂活性出现不同的相对均衡关系．     

人癌细胞内质网分子伴侣Grp94基因近3′端的初步分析

采用PCR及RT－PCR方法结合核酸分子杂交技术,首次确定了与Grp94cDNA2231～2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子．含有内含子的扩增片段长约708bP．对三种癌细胞系进行了PCR和RT－PCR反应,电泳结果显示存在差异．研究结果为进一步探讨Grp94基因3'端精细结构及其在正常细胞和肿瘤细胞中表达的改变打下了基础．     

WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控

WEB2基因编码产物为一种DNA解链酶。WEB2突变株经hydroxyurea阻断DNA合成后,经流式细胞仪检测DNA含量、纺锤体微管间接免疫 荧光染色及存活率测定,结果显示WEB2突变株表现S期检查点缺失。推测WEB2除了具有解链酶作用外,还参与酿酒酵母S期检查点调控机制,位于已建立的S期检查点信号传导通路模型上。本研究有助于加深对真核细胞检查点调控的了解,为研究肿瘤的发生机制提供线索。     

巨噬细胞炎症蛋白1α促进6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)表达明显增高。为进一步在体外研究促使T淋巴细胞穿过HBMEC单层的机制,选取重组人MIP-1α(rhMIP-1α)作用于HBMEC,同时选用高表达MIP-1α的人急性白血病T淋巴细胞(6T-CEM)作为模式细胞,与HBMEC共同温育。发现rhMIP-1α可促进6T-CEM细胞穿过HBMEC单层,并使HBMEC单层紧密连接结构发生改变。在6T-CEM细胞或rhMIP-1α与HBMEC单层单独温育过程中,均引起HBMEC单层CCR5表达变化。提示MIP-1α可能通过与HBMEC单层上CCR5相互作用介导T淋巴细胞穿过HBMEC单层。