大肠癌细胞分泌的β—葡萄糖醛酸苷酶与其侵袭力关系的研究

以Fischman法检测了6种培养的人大肠癌细胞系分泌至培养液的β-葡萄糖醛酸苷酶活力。结果显示高侵袭力细胞系分泌的该酶活力显著高于低侵袭力细胞系,提示培养的人大肠癌细胞分泌的β-葡萄糖醛酸苷酶水平可作为判断其侵袭力高低的有用指标。     

肝细胞与肝癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜比较研究

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,简称β－Ｇ）在正常人体组织匀浆和体液中含量很低,在人体细胞中β－Ｇ超微结构定位尚未见报道。采用低温包埋,胶体金标记、免疫电镜技术,进行了人体肝细胞和肝癌细胞内β－Ｇ的定位。实验结果表明,β－Ｇ定位于内质网,同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目明显多于肝细胞中金颗粒数目。这一结果可能对肝癌的期发现,早期诊断提供一种新方法     

反义核酸对人大肠癌CCL229细胞侵袭力的抑制作用

为观察反义寡核苷酸(asODN)对培养的高侵袭性人大肠癌CCL229细胞侵袭性的抑制作用,针对尿激酶型纤溶酶原激活物受体(re-ceptorofuPAR)mRNA的翻译起始区,合成了一段反义寡核苷酸(asODN),用脂质体将其导入培养的CCL229细胞中,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术、羊膜侵袭试验测定uPARmRNA水平、细胞表面uPAR抗原表达及细胞侵袭力的变化,并在扫描电镜下观察细胞的形态改变.结果为(1)RT-PCR检测asODNs组uPAR/β-actin比值为0.44±0.02,与对照组(0.81±0.01)相比,显著降低(P＜0.05);(2)流式细胞术检测asODNs组癌细胞表面与uPA结合的受体和总受体的平均荧光指数分别为0.20±0.07、0.59±0.09,与对照组(分别为0.72±0.12、2.21±0.36)比较,明显下降(P＜0.01,P＜0.05);(3)体外侵袭试验结果,asODN组在48h和72h后穿过羊膜的细胞数分别为12±2、20±3,与对照组(分别为25±4、44±5)相比,明显减少;(4)扫描电镜观察表明细胞经asODNs作用后,表面伪足和针状突起明显减少.以上各指标在随机序列寡核苷酸(rODN)组和对照组相比,无明显变化.CCL229细胞表面uPAR的表达与癌细胞的侵袭力密切相关,asODNs能有效抑制CCL229细胞uPAR基因的表达,从而抑制相关的蛋白质合成,降低其侵袭性,实验结果在癌症的基因治疗上将具有一定意义.     

HGPRT缺陷性人结肠癌细胞株的建立

本研究首先用化学突变剂乙基甲磺酸(EMS)处理人结肠癌细胞系CCL187,然后用嘌呤类似物8-氮鸟嘌呤(8-AG)筛选次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖酶缺陷细胞(HGPRT~-),历时半年,成功获得抗8-AG毒性突变体,即HG-PRT缺陷细胞株MCL187。该缺陷株细胞HG-PRT酶活性显著低于野生型细胞,在8-AG中能够存活,在HAT选择性培养基中则死亡,与野生型细胞同样表达结肠癌相关抗原LEA。此缺陷株的成功建立,为杂交细胞制备及其应用研究奠定了基础。     

人CD147的克隆表达及其对成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,与肿瘤的生长和浸润有关。为了研究CD147在大肠癌中的作用,利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因,测序发现该基因存在两个碱基突变,其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F。分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统,在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达。Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小,说明原核CD147缺乏糖基化。荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜,表明突变L212F不影响CD147的膜定位。用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响,结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调,而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调,说明糖基化对于CD147活性是必需的,真核系统能够表达具有生物功能的CD147,并且突变L212F不会影响蛋白质的活性。     

血管内皮生长因子在大鼠骨折骨痂中的表达及意义（简报）

骨折愈合是一个独特的多步骤过程,最终可导致正常的骨的解剖和骨的功能的恢复,而不像其他组织修复过程往往最终以瘢痕组织结束。骨折后形成大量修复性骨痂组织,包绕骨折部位。骨痂中存在两种骨形成方式：即膜内化骨和软骨内化骨。系统激素和局部生长因子参与调节骨折愈合过程中的膜内化骨、软骨形成和软骨内化骨。     

核酸探针传感器的构建

依据石英振子的晶体谐振频率是其表面沉积物的函数,建立了简便、特异、敏感性达100pg,并能对受检样品相对定量的核酸杂交检测新方法,即压电晶体式核酸探针传感器,该方法的主要特点是以快速、敏感的频变信息作为核酸杂交的显示系统.     

维甲酸诱导的人大肠癌细胞凋亡

本研究应用光镜、电镜技术、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记(TUNEL法),观察全反式维甲酸ATRA诱导的人大肠癌CCL229细胞凋亡特征。RA诱导CCL229细胞凋亡,光、电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的DNA ladder,DNA直方图上显示亚二倍体峰。10-8mol/L-105mol/L范围内,RA诱导CCL229细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性。     

TSA杀伤培养的人大肠癌细胞DLDl及机理的研究

我们用曲古抑菌素A(TSA)作用于人大肠癌细胞DLDl,研究小眼相关转录因子(MITF)表达及其酰基化与癌细胞凋亡关系.Northem杂交实验结果表明TSA作用组MITF表达明显增加,而对照组无明显MITF表达.电镜观察可见TSA引起DLDl超微结构的损伤及凋亡改变.提示TSA可能成为有效的杀伤癌细胞的药物.细胞因子作用组也可见MITF表达增加和细胞超微结构的改变.说明是否TSA引起MITF表达等可能与细胞因子作用通路相关.     

血管内皮生长因子在大鼠骨折骨痂中的表达及意义(简报)

骨折愈合是一个独特的多步骤过程,最终可导致正常的骨的解剖和骨的功能的恢复,而不像其他组织修复过程往往最终以瘢痕组织结束。骨折后形成大量修复性骨痂组织,包绕骨折部位。骨痂中存在两种骨形成方式:即膜内化骨和软骨内化骨。系统激素和局部生长因子参与调节骨折愈合过程中的膜内化骨、软骨形成和软骨内化骨。在软骨性骨痂的形成与吸收、骨性骨痂的形成与重塑的动态过程中,新生血管的形成起重要作用。在众多的调节