用改进的细胞核移植方法构建重构胚

为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建。用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62·6%和86·0%。用核染料Hoechst33342对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73·3%。实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用。     

心草中总黄酮含量的测定及其提取工艺研究

目的:测定心草中的总黄酮含量并确定其提取条件。方法:采用分光光度法测定、乙醇浸提法提取心草中的总黄酮。结果:浸提的最佳条件是:A3B1C3D2,即用20倍50%乙醇在70℃下进行6h,总黄酮含量为15.675%。平均加样回收率为97.67%。结论:心草中的总黄酮含量较高,此方法简便、快速、重现性好,可作为检测心草中黄酮含量的一种手段。     

中华蟾蜍足垫部位对植物血凝素的反应及其组织学和血液学变化

为探究中华蟾蜍(Bufogargarizans)对植物血凝素(PHA-P)反应的最适浓度及足垫部位皮肤组织学和血液学的变化,比较了在足垫部位注射1.0、2.5和5.0g/L植物血凝素条件下的PHA-P反应,以及最适注射浓度条件下PHA-P反应高峰值时足垫部位皮肤组织和循环血中各型白细胞的百分比,血液中血清杀菌能力的变化。结果表明,中华蟾蜍对PHA-P的反应无性别差异(P 0.05),最适注射浓度为2.5 g/L,注射后12 h达反应峰值;注射PHA-P或生理盐水的左足与注射生理盐水或不注射任何物质的右足皮肤组织相比,各型白细胞的百分比均无显著差异(P0.05),但循环血中淋巴细胞的百分比升高(P 0.05),嗜酸性粒细胞的百分比下降(P 0.05),血清杀菌能力无明显变化(P 0.05)。2.5 g/L的注射浓度适用于中华蟾蜍,反应高峰值与足垫部位皮肤组织中各型白细胞的动态无关,但循环血中淋巴细胞被激活、嗜酸性粒细胞功能弱化,这可能是导致中华蟾蜍PHA-P反应的主要原因。     

高光谱成像技术对人体面部和手掌的成像及光谱分析

目的：应用高光谱成像技术对正常人体不同部位图像进行采集,分析这些部位的光谱特征,得到正常值数据,并为该技术用于疾病诊断和中医面诊和手诊奠定基础。方法：使用高光谱成像仪,采集10例（男5女5）健康人的面部和双手掌图像,应用高光谱处理分析软件,对面和手掌划分15个分析区域,统计各分区从450-900 nm每间隔10 nm一个光谱段的各个分析区光强度值和光谱特征,并分析个体特点。结果：在面和手掌的高光谱图像上可以清晰地显示面部器官和手掌的不同部位,以580-830 nm段图像更为清晰,530 nm以下图像杂波较多。面部颧、颧下、鼻尖、眉间、额等部位和四指指丘、大小鱼际部位的反光较强,而眼、眉、嘴角和五指末端等则较弱。面部光谱双侧基本对称,而左右手的对称性在不同的个体上不尽相同。在光谱曲线上可以见到某一或者某些波长处光谱出现突变的细节。结论：高光谱成像技术可以清晰地显示人体面和手的图像,显示各部位（器官）的光谱特征;本文得到的面、手高光谱正常数据和特征将为该技术用于疾病诊断和中医辨证提供参考依据。     

去甲斑蝥素对恶性肿瘤细胞凋亡机制的研究

去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是从传统中药斑蝥中提取出的新型抗肿瘤药物,目前主要用于消化道肿瘤,肝癌,白细胞减少症等疾病的治疗。肿瘤的发生机制十分复杂,目前认为肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,所以诱导肿瘤细胞发生凋亡已成为目前肿瘤治疗的新的途径。NCTD对肿瘤细胞抑制作用的机制尚未完全阐明,但现有的很多研究表明,NCTD对许多肿瘤细胞起抑制作用主要体现在诱导肿瘤细胞凋亡方面,从而使恶性肿瘤达到临床缓解及治愈。本文就NCTD诱导恶性肿瘤细胞凋亡机制的研究做一简要综述。     

不同能量激光照射后中华大蟾蜍早期胚胎发育及其蛋白质谱变化的研究

应用YAG倍频激光器选择不同能量密度激光微束对中华大蟾蜍4细胞期胚胎进行照射,观察胚胎的生长、发育状况,统计出膜率、畸胎率和死亡率。实验结果表明：低能量激光照射明显地提高了胚胎的孵化速度,且使畸变率降低;而高能量激光对胚胎发育有明显抑制作用,而且使畸变率增高。不同能量密度激光微束照射中华大蟾蜍早囊胚,0．5h后制备样品进行双向电泳,凝胶成像后用PDQuest软件进行分析。结果显示激光照射对蛋白质点数及其分布有影响,影响程度与照射激光密度有关。结论：激光照射可以影响胚胎发育和蛋白质的合成。     

兔多杀性巴氏杆菌C51-3株黏附蛋白的表达、纯化及其抗原性检测

应用PCR从兔多杀性巴氏杆菌C51-3株基因组DNA中扩增出编码36 kD黏附蛋白的cp36基因, 将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序。以重组质粒pMD18-cp36为模板, 用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36, 并克隆到原核表达质粒pQE30中, 得到重组质粒pQE30-cpm36, 转化大肠杆菌M15, 在IPTG诱导下表达融合蛋白CPM36, 经Ni2+-NTA亲和层析纯化。DNA测序结果表明cp36基因片段大小为1032 bp, 与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较, 同源性在76.9%~100%之间。SDS-PAGE结果显示, 表达分子量约为37 kD的带有6×His标签的CPM36蛋白, 与预期分子量相符。Western blotting结果表明, 抗重组蛋白抗体分别能与CPM36蛋白和多杀性巴氏杆菌36 kD蛋白发生特异性反应, 证明原核表达蛋白具有抗原性, 为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础。     

苦楝不同部位挥发油成分的气相色谱-质谱分析

采用水蒸气蒸馏法对苦楝的叶、树皮和果皮的挥发油进行提取,用气相色谱--质谱联用技术对挥发性成分进行分析,共鉴定了70个化合物.组成成分分析结果表明,苦楝叶以倍半萜类化合物Elixene(22.53%)、石竹烯(10.75%)和醇类化合物叶绿醇(10.27%)、斯巴醇(5.73%)等为主;苦楝树皮中以饱和烷烃3,8-二甲基十一烷(9.25%)、4,6-二甲基十二烷(9.13%)、十七烷(6.88%)和3-乙基-3-甲基庚烷(5.94%)等为主;果皮中以棕榈酸(27.65%)、己酸(6.94%)、油酸甲酯(5.47%)、肉豆蔻酸(5.00%)和醇类化合物3,7,11,15-四甲基-2-十六烷醇(11.28%)、叶绿醇(4.78%)等为主.这一结果说明苦楝不同部位的挥发性成分相差较大,在综合开发利用苦楝时应分部位加以提取利用.     

唐古特白刺果实花色苷体外清除自由基的活性

为探讨唐古特白刺(Nitraria tangutorun Bobr.)果实花色苷体外清除自由基活性,研究了其对超氧阴离子(O-2·)体系、羟基自由基(·OH)体系和二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)体系的清除效果,并与抗坏血酸(vc)进行了比较.结果表明,该花色苷对O-2·、·OH、DPPH·均具有清除作用,且与浓度呈量效关系.对·OH和DPPH·清除效果相对较好,优于Vc.