枯草芽孢杆菌寡聚—1，6—葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)HB002的基因组文库,经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对－硝基苯－α-D－葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆,经鉴定均含克隆了寡聚－1,6－葡萄糖苷酶基因的重组质粒（命名为pHBM001-pHBM006)。选择pHBM003,对其插入片段测序分析,此片段内有一编码561个氨基酸的开放阅读框,该 蛋白质的计算分子量为65.985kD。HB002的寡聚－1,6－葡萄糖苷酶的氨基酸序列与Bacillus sp.和凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans)的寡聚－1,6－葡萄糖苷酶的氨基酸序列一致性分别为81％、67％,相似性分别为89％、79％。从pHBM003中扩增出寡聚－1,6－葡萄糖苷酶基因,克隆到pBV220上,转化大肠杆菌（Escherichia coli)DH5α,得到三个能水解对－硝基苯－α－D－葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆HBM003－1～HBM003－3,将此三个菌株热诱导表达,SDS－PAGE电泳可检测到特异表达的蛋白质,其中HBM003－1、HBM003－2表达的蛋白约66kD,为完整的寡聚－1,6－葡萄糖苷酶,而HBM003－3表达的蛋白质偏小;表达的蛋白质均有寡聚－1,6－葡萄糖苷酶活性。     

绵羊CAST基因2型和4型转录本的克隆及特性分析

钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin, CAST)是一种内源性的需要Ca²⁺激活的钙蛋白酶抑制剂, 在肌肉组织的蛋白质降解过程中起重要的调节作用。文章利用牛^CAST基因的mRNA序列, 通过逆转录RT-PCR首次克隆获得绵羊CAST基因2型转录本和4型转录本的部分cDNA序列, 并对序列进行生物信息学分析。CAST基因2型转录本的扩增片段为4 385 bp, 完整的开放阅读框为2 361 bp, 编码786个氨基酸; CAST基因4型转录本的扩增片段为1 467 bp, 完整的开放阅读框为1 317 bp, 编码438个氨基酸。CASTⅡ型蛋白序列存在4个保守结构域, CASTⅣ型蛋白序列存在3个保守结构域; 两者的二级结构均以螺旋为主, 富含疏水区域, 其氨基酸序列存在多个磷酸化位点以及蛋白激酶C(Protein kinase C, PKC)的磷酸化位点。通过RT-PCR分析CAST基因2型转录本和4型转录本的组织表达谱, 结果表明CAST基因2型转录本在所检测的10个组织中均表达, CAST基因4型转录本仅在睾丸组织中表达。     

山西庞泉沟自然保护区褐马鸡种群数量特征的研究

本文作者于1982—1988年在山西庞泉沟国家级自然保护区对褐马鸡(Crossoptilon mantchuri-cum)的种群数量进行了调查。结果种群密度为0.077(只/公顷),A、B、C垂直带间的数量分别为0.091、0.093、0.048,各占种群数量的39.22％、40.09％和20.69％,D带经调查,尚未见有分布。在繁殖前的5月为种群数量最低基数(0.030只);繁殖后的7月数量最高(0.099只)。     

浙江凤阳山自然保护区种子植物区系的统计分析

在野外调查和分类处理的基础上,报道了浙江凤阳山种子植物区系的统计分析结果。现知凤阳山有种子植物１６４科、６５９属、１４８８种（含种下分类群）。科、属、种的分布区类型分析表明：科的分布区类型以泛热带分布最多（４０．９％）,其次是世界分布（２０．７％）和北温带分布（１９．５％）,温带分布少于热带分布（４７：８１）;属的分布区类型以泛热带分布最多（２０．５％）,其次是北温带分布（１８．０％）和东亚分布     

短期模拟增温对黄河三角洲滨海湿地芦苇光响应特征的影响

黄河三角洲滨海湿地地下水位浅,淡咸水交互作用明显,其土壤水盐状况成为影响该地区生态系统关键过程的主要因子。另外,随着气候变暖,黄河三角洲在过去50年(1961—2010年)进入显著升温阶段,温度升高直接或间接影响着植物的光合作用和光响应特征,从而影响黄河三角洲滨海湿地的演变。采用红外辐射加热器模拟增温,分析了增温对黄河三角洲滨海湿地生长季(2015年5月初—2015年10月底)芦苇光响应特征的影响。根据土壤含水量波动情况生长季可分为3个时期,即干旱期、淹水期和湿润期。结果表明,干旱期,10 cm土壤温度升高3.3℃,土壤水分含量升高了9.4%,土壤盐分含量升高了16.7%;盐分增加使芦苇叶片在强光下发生光抑制,并且显著降低最大光合速率(Pnmax)、暗呼吸速率(Rd)、光补偿点(LCP)和光饱和点(LSP)。淹水期,增温对10 cm土壤温度、湿度和盐分均无显著影响,过饱和的水分状况限制叶片光合速率,使得Pnmax达到最低。湿润期,10 cm土壤温度显著升高3.0℃,土壤含水量升高了2.9%,土壤盐分无显著差异;这一阶段,温度升高促进中强光下芦苇叶片的光合速率;同时叶片Pnmax、Rd和LSP分别增加27.7%、14.9%和23.3%。从整个生长季来看,增温使土壤温度显著升高2.9℃,土壤盐分含量升高7.0%,而对光合参数无显著影响。由此可见,在滨海湿地生态系统中,增温对光合作用的影响受土壤水盐状况的控制。     

体外培养的小猫脊髓神经元对辣根过氧化物酶的内吞现象

本工作的目的是用电子显微镜观察培养的小猫脊髓神经元摄取辣根过氧化物酶(HRP)的途经及其在细胞内的分布。将出生后1—10天小猫脊髓在体外培养8—30天的神经元,移放在去血清的199培养液内再培养1小时,然后在含0.25%或0.6%HRP的199培液内36℃温育5—20分钟。用2.5%戊二醛固定,经3,3′-二氨基联苯胺(DAB-HCl)和过氧化氢混合液对过氧化物酶进行酶反应后,用锇酸再固定,制备超薄切片标本。电镜观察在树突末端的生长锥、丝状足和充满小泡的丘状隆起(VFM)等处有内吞的HRP颗粒较多,这些HRP颗粒位于一层由质膜包裹的小泡、短管和杯形的细胞器内。在核周质内除有较多含HRP的小泡、短管和杯形的细胞器外,还有含HRP的多泡体,并看到这种细胞器与溶酶体联合的现象。高尔基复合体和线粒体内并没有HRP颗粒。     

不同颜色光对野菊花色素溶液稳定性及类胡萝卜素含量的影响

在黑暗（对照）、红光、绿光、蓝光、黄光和白光条件下,对来源于野菊[Dendranthema indicum（Linn．）Des．Moul．]头状花序乙醚提取物的色素溶液中类胡萝卜素含量及色价和色差的变化进行了研究,并对色价和色差与贮藏时间的相关性进行了分析。结果表明：在不同颜色光照条件下,随贮藏时间（0—50d）的延长,溶液中类胡萝卜素含量及412、436和468nm特征波长下溶液的色价均呈逐渐下降的趋势,溶液的色彩参数（L＊、n＊和b＊）则呈现不同的变化规律。贮藏前后类胡萝卜素含量差异极显著（P〈0．01）且与贮藏时间呈显著负相关;在贮藏至50d时,在红光、蓝光、白光、黄光、绿光和黑暗条件下类胡萝卜素含量降幅依次为98．97％、98．33％、95．10％、92．30％、80．38％和17．02％。贮藏10—50d溶液色价均显著小于起始色价（P〈0．05）,其中,在黑暗条件下色价的变化均最小且显著高于其他处理组,而在红光照射下色价降幅最大。在黑暗条件下,溶液亮度增加、色彩变化不明显;而在其他颜色光照条件下,色素溶液均由绿转红、由黄向蓝转变,且与对照相比a＊值显著增大、b＊值显著降低（P〈0．05）,但溶液亮度总体上无显著差异（P〉O．05）。在0—50d的贮藏期内,溶液的色价和色差与储藏时间均呈线形关系,溶液的褪色规律均符合一次降解曲线。研究结果显示：野菊花所含的类胡萝卜素类色素对红光、绿光、蓝光、黄光和白光均较敏感,光照时间越长分解越激烈;在实际应用过程中这类色素应避光保存。     

蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯度分析及与层析法的比较

通过对蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯化工艺进行分析,发现现行工艺中收取的病毒组分中,不同蔗糖浓度中病毒的纯度是不同的,而呈峰型且与病毒效力峰及蛋白浓度峰不重合。实验结果对今后工艺的改进具有指导意义。另外应用Sephacryl-s-1000凝胶层析法对乙脑病毒进行了纯化研究和分析,发现蔗糖梯度离心法和层析法纯化的病毒的纯度及回收率分别为291．46u／mg、96．01％和309．41 u／mg 65．08％,Sephacryl-s-1000凝胶层析法同样可以获得较高的纯度和收率。     

诱变选育高产海藻糖的酵母菌株

以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae HY01为出发菌株,分别对其进行化学诱变和紫外诱变。选用5-溴尿嘧啶和盐酸平阳霉素两种低毒性诱变剂联合使用,通过均匀设计确定了两种诱变剂的最佳配比即5-Bu浓度为300umol/L、平阳霉素浓度为5umol/L时,获得一定数量的正突变株,最高海藻糖含量是15．98％。在紫外诱变过程中经摇瓶初筛、复筛获得了高产海藻糖菌株,其海藻糖含量为19．52％,比出发菌株提高了35％。     

鸡马立克氏病毒和网状内皮增生病毒感染肉鸡时的相互作用

为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮增生病病毒(REV)共感染时的相互作用,分别在REV母源抗体阳性(REV-Ab )和阴性(REV-Abˉ)及经MDV疫苗CVI988株免疫和不免疫的商品代肉鸡,比较了二种病毒在病毒血症水平和特异抗体效价上的相互影响。结果表明,在未经CVI988株免疫鸡,REV病毒血症对MDV强毒接种后的病毒血症水平及抗体效价无明显影响,但REV病毒血症显著抑制了CVI988疫苗免疫为鸡提供的抵抗力和抗体效价,因而提高了强毒MDV感染后的病毒血症的程度。另一方面,MDV感染会显著减弱REV-Ab 鸡对REV感染的抵抗力,提高REV-Ab 鸡在感染REV后的病毒血症水平并抑制对它的抗体效价。分析表明,MDV和REV共感染主要通过抑制鸡体的免疫功能来影响另一种病毒的复制及其致病作用。