卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊

分别以短期培养的5头牛卵丘细胞(1~5 BCC)为细胞核供体, 共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚(78.4%).体外培养后,763枚(82%)发育至2-细胞期,627枚(67.3%)发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚(29.5%).囊胚的平均细胞数为124±24.5 (n = 20).分析不同个体来源的卵丘细胞,同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间(融合到激活的时间长短)等因素对核移植效率的影响发现,5个个体的体细胞核移植囊胚率(14.1%,45.2%,27.3%,34.3% vs 1.5%)有显著差异(P<0.05).同一供体细胞饥饿与否(47.1% vs 44.4%)、饥饿11~12 d (52.5%)和18~19 d (41.6%)均不影响核移植囊胚率(P≥0.05).核/质相容2~3 h的囊胚率(20.3%)显著低于3~6 h组(31.0%,P<0.05). 3~6 h范围内,囊胚率无差异(P≥0.05).其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛,妊娠4例,最后顺利获得2头克隆牛犊.结果表明,牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素,核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响.卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊.     

哺乳动物体细胞核移植研究进展及应用前景

哺乳动物体细胞核移植克隆技术成功于１９９７ 年,曾引起世界范围内的广泛关注,本文综述了体细胞克隆技术在近两年内的最新研究进展及其在生产、医疗和科学研究方面的应用前景。     

不同类型冠心病患者血清Hcy、TBIL、hs-CRP、尿酸的表达及临床意义

目的:探讨不同类型冠心病患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、总胆红素(TBIL)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、尿酸的水平及临床意义。方法:选取首都医科大学附属北京地坛医院2015年9月-2018年7月收治的冠心病患者132例为冠心病组,根据临床诊断分为稳定型心绞痛52例(SAP组)、不稳定型心绞痛42例(UAP组)、急性心肌梗死38例(AMI组),另选取50例同时期于我院体检的健康志愿者为对照组,检测各组Hcy、TBIL、hs-CRP、尿酸的水平,采用Pearson相关分析Hcy、TBIL、hs-CRP、尿酸水平之间的相关性,采用Logistic回归分析冠心病的影响因素。结果:冠心病组患者的血清Hcy、hs-CRP、尿酸水平显著高于对照组,TBIL水平显著低于对照组(P0.05)。AMI、UAP组患者的血清Hcy、hs-CRP、尿酸水平显著高于SAP组,TBIL水平显著低于SAP组(P0.05),且AMI组患者的血清Hcy、hs-CRP、尿酸水平显著高于UAP组,TBIL水平显著低于UAP组(P0.05)。经Pearson相关分析显示,Hcy与hs-CRP、尿酸呈正相关,与TBIL呈负相关,hs-CRP与尿酸呈正相关(P0.05),TBIL与hs-CRP、尿酸无明显相关性(P0.05)。经Logistic回归分析显示,Hcy、hs-CRP、尿酸、高血压、糖尿病均是冠心病的独立危险因素(P0.05),TBIL是冠心病的保护因素(P0.05)。结论:冠心病患者血清Hcy、hs-CRP、尿酸水平升高,TBIL水平降低,Hcy、TBIL、hs-CRP、尿酸与患者的病情相关,也是冠心病的影响因素。     

绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用

绿荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）是源于水母（Ｊｅｌｙｆｉｓｈ）、海笔（ＳｅａＰｅｎ,ＳｅａＰａｎｓｙ）等海洋无脊椎动物的一种蛋白质,这种蛋白质在体外经适当波长的光激发便可发出绿光,所发出的绿光用普通荧光显微镜或荧光激活细胞分拣器（ＦＡＣＳ）均可检测到。ＧＦＰ作为动、植物以及微生物基因工程研究上的一种选择标记具有检测灵敏度高,操作简便,对机体毒副作用小且不需要添加任何底物或辅助因子等优点,更重要的是检测ＧＦＰ无损于细胞或胚胎的完整性及活力。本文概括介绍ＧＦＰ的生化、发光光谱及遗传学特征及其在转基因动物研究上的应用。     

FSHβsubunit gene is associated with major gene controlling litter size in commercial pig breeds

Ｌｉｔｔｅｒｓｉｚｅｉｓａｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｔｏｐｉｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｉｍｐｒｏｖｅｂｙｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｂｒｅｅｄｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｄｕｅｔｏｉｔｓｌｏｗｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ.Ｍａｒｋｅｒａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ(ＭＡＳ)ｉｓｔｈｏｕｇｈｔａｓａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈ,ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｒａｉｔｓｏｆｌｏｗｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌ…     

基因打靶技术及其应用前景

基因打靶是近年来发展起来的对细胞基因组中的某一基因进行定点操作的生物技术。综述了基因打靶的筛选系统,影响基因打靶的几个主要因素及其解决方法,总结了基因打靶在各个学科领域中的应用。     

猪Follistatin cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达

提取猪卵巢总RNA,用RT-PCR方法克隆了猪FollistatincDNA的完整开放阅读框,长1038bp。将FollistatincDNA连接到原核表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导,进行了GST-FS融合蛋白表达。用SDS-PAGE和Western杂交检测,结果显示在63kD处有特异性表达蛋白。     

家兔精子膜蛋白rSP1O在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备

为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中,N端具有His6肽的融合蛋白re-rSP10得到高效表达,表达产物达细菌总蛋白的67%.经DEAE柱层析纯化表达产物,re-rSP10,产量约为50mg/mL培养物.Westem实验结果表明,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re-rsp10,说明大肠杆菌表达的re-rSP10具有免疫原性.用纯化的re-rSP10免疫雌性兔,得到re-rSP10专一性多克隆抗血清.将re-rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性,但获能精子凝集现象并不明显.     

Cloned calves produced by nuclear transfer from cultured cumulus cells

Short-term cultured cumulus cell lines (1-5BCC) derived from 5 individual cows were used in nuclear transfer (NT) and 1188 enucleated bovine oocytes matured in vitro were used as nuclear recipients. A total of 931 (78.4%) cloned embryos were reconstructed, of which 763 (82%) cleaved, 627 (67.3%) developed to 8-cell stage, and 275 (29.5%) reached blastocyst stage. The average cell number of blastocysts was 124±24.5 (n=20). In this study, the effects of donor cell sources, serum starvation of donor cells, time interval from fusion to activation (IFA) were also tested on cloning efficiency. These results showed that blastocyst rates of embryos reconstructed from 5 different individuals cells were significantly different among them (14.1%, 45.2%, 27.3%, 34.3%, vs 1.5%, P<0.05); that serum starvation of donor cells had no effect on blastocyst development rate of NT embryos (47.1% vs 44.4%, P>0.05); and that blastocyst rate (20.3%) of the group with fusion/activation interval of 2-3 h, was significantly lower     

哺乳动物克隆的原理与途径

在近年来哺乳动物克隆技术研究的基础上,阐述了克隆的定义及其原理。叙述了作为核供体与受体细胞周期的协调性问题,列出了使供体细胞处于特定细胞周期的一些处理方法。同时也叙述了针对不同时期的供体核对受体卵母细胞采取的不同处理。简述了不同类型的显微操作、去核、电融合及化学激活等方法,提出了哺乳动物克隆所面临的一些重要问题。