Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响

敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V, JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂, 为了深入研究该毒素的结构与功能关系, 应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V, 合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定, 用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明, Arg20被Ala取代后, R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当, 提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大; 而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍, 说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一, 推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。     

Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响

敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhauotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相时分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V时TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lye4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基.     

双酚A和壬基酚对隆线溞和微型裸腹溞的毒性

我们以隆线溞和微型裸腹溞为实验动物,进行了两种酚类内分泌干扰物双酚A（BPA）和壬基酚(NP)的毒性效应研究。急性实验测定出双酚A对隆线溞的24h和48h半数致死浓度（LC50）为：12.02mg/L和11.64mg/L,对微型裸腹溞24h和48h半数致死浓度LC50为：13.70mg/L和9.63mg/L。而壬基酚对隆线溞的24h和48h半数致死浓度（LC50）分别为：0.221mg/L和0.159mg/L,对微型裸腹溞的24h和48h半数致死浓度（LC50）分别为：0.334mg/L和0.126mg/L。实验表明微型裸腹溞对双酚A和壬基酚的敏感度高于隆线溞,能够很好的指示水环境的污染。慢性毒性实验发现双酚A对微型裸腹溞后代的雌雄比例有明显的影响,影响类似于hormesis现象。而壬基酚对隆线溞的慢性毒性研究发现,隆线溞的生活史、后代成活率均受到暴露的壬基酚浓度升高的不利影响。这些研究表明低浓度双酚A长期暴露的潜在毒性与高浓度壬基酚的急性毒性在这两种内分泌干扰物污染环境的研究中有重要意义。     

傅立叶变换红外光谱技术对两株大肠杆菌的鉴别

【目的】应用傅立叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)技术对两株不同来源的大肠杆菌进行鉴别。【方法】用FT-IR技术对两株不同来源的大肠杆菌进行指纹图谱数据采集,用化学计量学分析方法对光谱进行分析。【结果】建立了基于主成分分析(Principal component analysis,PCA)和分级聚类分析(Hierarchical cluster analysis,HCA)两种聚类分析模型,均可将两株大肠杆菌进行成功区分。【结论】傅立叶变换红外光谱分析方法简便、快速、易操作,结果重现性好,可用于区分不同来源的同种细菌。     

瑞舒伐他汀对兔心肌梗死后心室重构及细胞凋亡的影响

目的：观察瑞舒伐他汀对新西兰大白兔心肌梗死后左室重构及心肌细胞凋亡的影响。方法：45只雄性新西兰大白兔随机分成三组,即：假手术组（S,n=15）,心肌梗死对照组（MI,n=15）,心肌梗死瑞舒伐他汀干预组（R,n=15）。MI组和R组大鼠结扎左冠状动脉前降支建立AMI模型。心肌梗死对照组及假手术组术后24h灌等量的生理盐水．．瑞舒伐他汀干预组于术后24h直接灌胃法给药,给药剂量以10mg／kgtd计算。干预2周后,进行心脏超声测定,随即处死新西兰大白兔、取出心脏,观察病理组织形态,并通过Westernblot方法检测Bcl-2,Bax在心肌梗死边缘区的蛋白表达。结果：①心脏超声检测表明干预组左室舒张末内径（LVEDD）、左室收缩末内径（LVESD）较心肌梗死对照组降低而左室射血分数（LVEF）较心肌梗死对照组增高。②干预组心肌梗死边缘区Bax表达与心肌梗死对照组比较未见统计学差异,而Bcl一2表达高于心肌梗死对照组。结论：瑞舒伐他汀上调Bcl一2的表达,改善心室重构。     

黄颡鱼拟态弧菌的鉴定、毒力相关因子及药敏特性

2018年浙江省黄颡鱼主养区暴发了严重的溃疡病, 为查明该病的病原特点, 了解病原的致病因子及药物敏感性, 对溃疡黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)上分离的多株优势菌, 分别采用生理生化特性和管家基因16S rRNA、pyrH的系统进化树进行分类鉴定, 通过人工回归感染试验分析菌株的病原性, 利用平板法测定相关的毒力因子并采用PCR法对毒力相关基因进行检测, 应用微量二倍稀释法测定14种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果表明, 11株优势菌皆为拟态弧菌, 2株代表菌腹腔注射感染黄颡鱼后均可引发溃疡症状; 11株拟态弧菌均具有溶血活性、蛋白酶、明胶酶和DNA酶活性, 不具有卵磷脂酶活性, 可分泌产生铁载体; 所有菌株均携带vmh、ompU、toxR及matCDB-iucABCD-iutA等毒力相关基因, tcpA、ctxA、st、zot、ace、tdh等毒力基因均未检出。各菌株对氨苄青霉素、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶高度耐药, 对环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素、土霉素、甲砜霉素、红霉素、交沙霉素、磺胺二甲氧嘧啶较敏感, 个别菌株对新霉素和甲砜霉素耐药。以上研究结果表明, 拟态弧菌感染可引起黄颡鱼溃疡病, 不同发病养殖场的分离株具有相同的表型特征及毒力基因型, 并具有较一致的生理生化特性和耐药谱型, 说明它们具有相同的遗传背景或传染源。     

增温和施氮对亚热带杉木人工林土壤溶液养分的影响

在增温和氮沉降等气候变化背景下,土壤溶液养分元素供应是否平衡对加速或减弱土壤养分循环起着至关重要的作用。为探究增温和施氮对亚热带杉木人工土壤溶液养分动态的影响,分别于各样地的0—15、15—30cm和30—60cm土层安装土壤溶液采集器。利用真空泵的负压原理采集土壤溶液,对其有机组分及无机组分进行了两年的动态监测。结果显示:增温及增温+施氮显著增加了各土层溶解性总氮(DTN)及硝态氮(NO-3)浓度,而施氮促进了植被对其的大量吸收而未呈现显著的促进作用。整体而言,短期增温和施氮处理显著降低了可溶性有机碳(DOC)浓度,对土壤溶液K~+、Ca~(2+)、Na~+、Mg~(2+)等离子含量影响较小。但相比于施氮,增温对土壤溶液中矿质元素的影响远大于施氮。增温导致的土壤孔径增大,通透性增强可极大地促进Fe~(3+)、Al~(3+)淋溶,同时导致表层Na~+、Mg~(2+)离子含量显著降低。增温+施氮交互作用对土壤溶液各养分的影响存在叠加效应,但并不是增温和施氮单因子的简单累加,要深入了解土壤养分对未来气候变迁的内部机制需进一步长期监测。     

NaCl胁迫对四种禾本科牧草种子萌发的影响

研究了4种多年生根茎型耐旱植物——羊草、高冰草、苇状羊茅和俄罗斯新麦草种子的萌发和根芽生长对不同浓度（0、50、100、150、200、300、400和500 mmol·L^-1 ）NaCl胁迫的响应。结果表明,4种牧草种子的发芽率随着盐浓度的增加呈下降趋势。其中,羊草种子耐盐性最差,300 mmol·L^-1 NaCl处理的种子发芽率仅为1.5%,浓度超过300 mmol·L^-1时,没有种子萌发;高冰草、苇状羊茅和俄罗斯新麦草耐盐性较强,在500 mmol·L^-1 NaCl时发芽率分别为17.3%、20.0%和18.1%。4种牧草的根长和芽长均与NaCl浓度呈极显著的负相关,但表现不同：随着NaCl浓度的增加,俄罗斯新麦草的根长下降速率最快,高冰草最慢;羊草芽长下降速率最快,高冰草最慢;羊草的根/冠比值呈上升趋势,而其他3种牧草则呈下降趋势。说明NaCl胁迫对羊草抑制表现为胚根<胚芽,而后三者则为胚根>胚芽。从种子发芽率和胚生长状况看,在种子萌发期内,羊草种子萌发和苗期的耐盐能力最差,而高冰草、苇状羊茅和俄罗斯新麦草的种子萌发和苗期生长均有较强的耐盐能力。     

亲和层析法分离胆固醇氧化酶

利用胆固醇氧化酶和底物胆固醇之间的亲和力,以胆固醇为吸附剂构成底物亲和层析柱.发酵液经盐析、透析后直接进行亲和层析.研究了洗脱液A和B的流速、洗脱液B中表面活性剂的浓度,确定了适合的层析条件,使比酶活从0.45U/mg提高到15.5U/mg.     

临床分离病原菌构成及对抗生素敏感性分析

目的 回顾性分析汕头大学医学院第一附属医院2004年（1月～10月）临床标本病原菌构成及对抗生素的敏感性,为治疗感染性疾病提供参考依据。方法 细菌鉴定及药敏试验采用VITEK-60全自动微生物鉴定仪。结果 共检出细菌1136株,革兰阴性杆菌占61．3％,革兰阳性球菌占38．7％,常见病原菌为金黄色葡萄球菌（224株）、铜绿假单胞菌（162株）、大肠埃希菌（152株）、肺炎克雷伯菌（128株）、不动杆菌属（76株）、溶血葡萄球菌（57株）、嗜麦芽窄食单胞菌（44株）、表皮葡萄球菌（37株）和阴沟肠杆菌（30株）。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌产ESBL分别是60％、44％和46％。细菌对抗生素均呈不同程度耐药,敏感株所占比例极少,亚胺培南对肠杆菌科细菌的抗菌活性强于非发酵菌,未检出耐万古霉索葡萄球菌和肠球菌。结论 细菌构成与国内其他地区相近,但产酶现象比其他地区较为严重,常见细菌多呈多重耐药性,建议临床根据药敏结果选用抗生素,以期减少耐药菌株产生。