细钙丝菌子实体发育过程中表面亚显微形态特征和化学元素变化研究

利用扫描电子显微镜和能量色散X射线分析技术对细钙丝菌Badhamia gracilis子实体发育过程中原生质团和子实体一些结构的外表面亚显微形态特征与化学元素变化过程进行了研究。结果显示:原生质团表面为膜质、具有乳突的结构;囊被表面经乳突状结构发育为光滑且波浪状的膜质结构,表面分布着带弯型膜质通道的石灰质颗粒分泌口(0.6–0.8μm);柄表面经乳突状结构发育为膜质、具有纵褶的结构,内部包含石灰质颗粒;孢丝表面为粗糙的膜质,内部包含石灰质颗粒;孢子为表面具有不规则疣和脊的膜质结构。各发育阶段原生质团、囊被、柄、孢丝及孢子表面具有特定的化学元素种类,亚显微形态特征相同的结构表面部分化学元素相对含量更为相近。     

原代培养成骨细胞烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基免疫阳性物质表达的初步研究

采用原位杂交和免疫细胞化学的方法检测原代培养的SD大鼠成骨细胞烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcholinereceptor,nAChR)α1亚基的表达,结果显示nAChRα1亚基mRNA和蛋白质在原代培养的SD大鼠成骨细胞上呈阳性表达,提示骨内可能存在胆碱能神经和突触样结构,调控骨组织的各种生理活动。     

抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立

制备抗登革病毒NS1蛋白单克隆抗体,建立检测NS1的ELISA方法。表达1~4型登革病毒NS1蛋白,将1型NS1蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。经ELISA、Western blotting、间接免疫荧光筛选和鉴定单克隆抗体,进行纯化和HRP标记。通过鉴定每两株单抗之间是否存在竞争作用,选择非竞争单抗组合并建立NS1捕获法ELISA。结果获得7株高滴度抗NS1单抗,捕获法ELISA可以检出10ng/mL NS1。原核表达登革病毒NS1蛋白制备的单抗可以和天然病毒抗原反应,NS1捕获法ELISA可以用于登革病毒感染检测。     

Cu胁迫对拟南芥幼苗错配修复基因表达的影响

采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以18S rRNA为内参基因,研究了Cu胁迫对拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗错配修复相关基因(MLH1、MSH2、MSH3、MSH6、MSH7)表达的影响,并结合幼苗的形态和生理指标,选取Cu胁迫敏感的生物标记物.结果表明,Cu处理10 d后,对拟南芥种子发芽率、地上部鲜重及叶绿素含量的影响不大;根的长度明显受到抑制;拟南芥幼苗地上部可溶性蛋白质含量随着Cu浓度增加明显降低;5个错配修复相关基因的表达均受到不同程度的抑制,Cu浓度与拟南芥幼苗上述指标之间存在明显的剂量-效应关系.以上结果表明,地上部可溶性蛋白含量变化与上述错配修复相关基因表达量的改变趋势一致,且均对Cu胁迫较敏感,可以作为检测Cu污染对植物遗传毒性效应的生物标记物.     

敲降组蛋白去乙酰化酶HDAC8对斑马鱼ZF4细胞存活率的影响

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少.本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用EcoR Ⅰ和AgeⅠ酶切构建了pLKO.1-hdac8-shRNA重组质粒,同时构建了一个阴性对照重组质粒(nc),接着将pCMV-VSVG、pCMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装.收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降.随后使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况.研究发现:与对照组(nc)细胞相比,敲降hdac8的细胞存活率显著下降(P＜0.05),bax及caspase-3的表达量在敲降hdac8的细胞内显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的.本研究为后期对斑马鱼在生长发育过程中及环境压力下的凋亡机制的研究提供基础.     

慢性充血性心力衰竭血浆血管活性水平及临床意义

目的：探讨慢性心力衰竭患者血浆B型利钠肽（BNP）、心钠素（ANF）、胱抑素C（CysC）的水平及临床意义。方法：选择70例CHF患者,按NYHA分级;20例健康者作为对照。采用放射免疫法检查BNP和ANF水平;采用免疫比浊法检查CysC。比较不同心衰等级以及不同BNP水平的上述指标的变化。结果：CHF患者血浆BNP、ANF、CysC水平与对照比较显著升高（P〈0．05）,并随NYHA等级增高而升高（P〈0．05）。与BNP〈400pg／ml组比较,400pg／ml≤BNP〈800pg／ml组和BNP≥800pg／ml组心力衰竭患者Cr、BUN水平显著增高（P〈0．05）;相反地,HDL水平显著降低。结论：血浆B型利钠肽（BNP）、心钠素（ANF）及胱抑素c参与．了CHF的发生发展过程．联合测定箕合号的变化．对CHF患者的诊断、评估及詹．险分层具有一定的临床意义．     

血乳酸水平动态监测在危重症患者的应用的临床价值分析

目的:探讨动态监测动脉乳酸水平对危重患者的应用的临床价值分析。方法:对2010年2月~2011年6月间收治的危重病患者的血乳酸水平进行动态监测,通过比较死亡组患者和存活组患者乳酸水平及其它临床指标,比较不同乳酸水平组患者的临床资料来分析乳酸在危重症患者的应用价值。结果:死亡组和存活组患者在性别、年龄差异无明显的统计学意义(P>0.05);病死组乳酸水平、APACHEⅡ评分、住ICU时间(天)、机械通气时间明显高于生存组,差异有显著的统计学意义(P<0.01);严重乳酸酸中毒组患者在APACHEⅡ评分、休克发生率、MODS发生率、死亡发生率均明显高于乳酸酸中毒组和高乳酸血症组,差异有明显的统计学意义(P<0.05),乳酸酸中毒组休克发生率、MODS发生率、死亡发生率均明显高于高乳酸血症组,差异有明显的统计学意义(P<0.05)。结论:动态监测动脉乳酸水平是判断危重患者预后的一个良好指标,动脉乳酸越高,预后差。     

猕猴B病毒gC蛋白特异性抗原表位的合成和表达

目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达。结论利用原核表达系统,可以产生B病毒gC蛋白的可溶性抗原,可以作为B病毒的检测抗原。     

狂犬病病毒 SYBR-Green玉实时荧光定量 PCR 检测方法的建立

狂犬病病毒为不分节段单链负股的 RNA 病毒,属弹状病毒科狂犬病病毒属.世界上几乎所有国家都有狂犬病发生,狂犬病病毒能够使所有温血动物发病致死,死亡率高达100%.本研究根据 GenBank 中的狂犬病病毒 M 基因序列,选择保守区域设计引物,通过对 SYBR-Green玉实时荧光 PCR 反应条件进行优化,建立了用于检测狂犬病病毒的 SYBR-Green玉实时荧光 PCR 方法.结果显示,建立的狂犬病病毒实时荧光定量 PCR 方法,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点,是开展狂犬病的临床检测的有力工具.