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携带黄矮病抗性基因染色体DNA文库的构建 总被引:3,自引:2,他引:1
单条染色体的分离及其DNA片段的克隆是将细胞学与现代分子生物学相结合的一项新技术。它对染色体结构和基因进化的研究、基因组物理图谱及分子标记连锁图构建等 ,特别是增加染色体某些区域的探针密度具有重要意义。20世纪90年代以来 ,有关植物染色体微分离及体外扩增的报道中 ,只有少数几篇是关于单条染色体的体外扩增及其克隆 ,其采用的为微细玻璃针法。在前人工作的基础上 ,我们探索了一套操作方便、容易掌握的激光微分离、微克隆技术体系。本文以中间偃麦草二体异附加系Z2与普通小麦宛7107杂交(Z2×宛7107)的F1 … 相似文献
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目的 克隆小鼠的Uncv基因并在真核细胞表达.方法 采用RT-PCR方法扩增小鼠皮肤组织中Uncv基因编码区,以真核表达质粒pcDNA 3.1-Flag为载体,构建Uncv真核表达质粒,将重组载体转染Hela细胞并用Western blot法检测基因表达.结果 构建Uncv基因真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Unev,重组质粒在Hela细胞中有效表达约95×103的融合蛋白.结论 成功构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,并且在真核细胞中有效表达,为研究Uncv基因生物学功能奠定基础. 相似文献
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PCR筛选BAC文库和直接BAC末端测序方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC
DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法.用PCR技术进行大麦BAC DNA
文库(含816个平板,每个平板含384个克隆)的筛选分4步进行.在实验中,建立了两个水平的BAC
DNA池(一级池和二级池).一个二级池由一个平板(含有384个克隆)的DNA
组成,一个一级池由连续10个稀释100倍的二级池的DNA混合而成(如1~10,11~20等),共82个一级池.BAC
DNA 文库筛选的第一步是对82个一级池的筛选.得到阳性一级池后(如2号一级池),对其所含的10个二级池(从11~20)进行第二步筛选.得到阳性二级池后,培养相应的阳性平板的所有克隆(384个),从头开始(左上侧),每相邻的4个克隆为一组,在96孔板上(4
X 96=384) 进行第三轮PCR反应;之后对筛选结果为阳性的4个克隆分别进行菌落
PCR(第四轮)得到单一阳性克隆.根据BAC DNA Hind III 酶切指纹图谱,对同一引物筛选的BACs进行重叠群作图(Contig).对代表contig
的两端的BAC DNA直接进行末端测序并对测序结果Blast,以检测其在大麦中是否属于单拷贝序列.根据测序和Blast结果设计引物,用中国春附加系(附加大麦染色体)对来自BAC克隆的引物进行染色体定位并用分离群体进行遗传学作图,以确定是否可以用作下一步的染色体步行. 相似文献
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从芦荟提取多糖后的“废液”——上清液经过浓缩、脱色后冷冻干燥,得到单糖和寡糖的混合物。经质谱检测证明,该混合糖含有二糖,可能有海藻糖成分;利用高效液相色谱证实其中含有海藻糖、葡萄糖和果糖,含量比为1:62:21。该结果为芦荟强保水能力提供理论依据,而且“废液”的再利用,可以提高芦荟叶片的利用率,充分利用资源,为综合开发利用芦荟开辟一条新路。 相似文献
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