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中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达与性质分析 总被引:1,自引:0,他引:1
溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子, 参与机体多种免疫反应, 在溶菌过程中形成一个水解体系, 破坏和消除侵入体内的病原, 从而实现机体的免疫防御。从中国明对虾中克隆得到了溶菌酶基因(称为FcLyz基因), 该基因全长709 bp, 其完整的阅读框为477 bp, 编码158个氨基酸, 前18个氨基酸(-1~-18)为信号肽, 成熟肽由140个氨基酸组成(1-140aa), 其分子量为16.2 kD。经SMART分析,该基因具有1个溶菌酶1(LYZ1)结构域(19-130aa)。半定量RT-PCR分析结果表明溶菌酶虽在多种组织中有较低水平的组成性表达, 但在细菌诱导的血细胞、心脏、肝胰腺和鳃等多种组织中表达上调。将中国明对虾溶菌酶基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-30a (+)中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 再进行诱导表达和亲和纯化, 得到了纯化的重组溶菌酶, 并进行了抑菌活性检测。结果表明, 重组对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌的抑菌能力较强, 最小抑菌浓度达到3.43 mmol/L, 但对革兰氏阴性菌抑制作用较小。上述结果表明, 该溶菌酶作为一种重要的免疫效应分子, 参与了对虾的免疫防御反应。 相似文献
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无脊椎动物先天免疫模式识别受体研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
免疫系统的基本功能是“自己”与“非己”识别.对入侵物的识别是免疫防御的起始,最终引发效应物反应系统,包括吞噬作用、包被作用、激活蛋白酶级联反应和黑化作用以及诱导抗菌肽的合成等,从而清除或消灭入侵物.研究证明,这种“非己”识别是因为存在某些特异性的、可溶的或与细胞膜结合的模式识别受体,可以识别或结合微生物表面保守的、而在宿主中又不存在的病原相关分子模式.模式识别受体通过对病原相关分子的识别启动先天免疫防御.近年来这方面的研究进展很快,已经在无脊椎动物中确定了多种模式识别受体,包括肽聚糖识别蛋白、含硫酯键蛋白、革兰氏阴性菌结合蛋白、清除受体、C型凝集素、硫依赖型凝集素、Toll样受体和血素等,并对其性质和功能进行了研究. 相似文献
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对爬行类心脏结构中的心室分隔问题,国内教科书阐述的都比较简单,对左、右体动脉及肺动脉弓的发出部位,提法也不尽相同。作者根据一些新的文献及实验观察,对爬行类心脏的结构和血液循环途径进行了综述。 相似文献
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中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达与性质分析 总被引:2,自引:0,他引:2
溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子, 参与机体多种免疫反应, 在溶菌过程中形成一个水解体系, 破坏和消除侵入体内的病原, 从而实现机体的免疫防御。从中国明对虾中克隆得到了溶菌酶基因(称为FcLyz基因), 该基因全长709 bp, 其完整的阅读框为477 bp, 编码158个氨基酸, 前18个氨基酸(-1~-18)为信号肽, 成熟肽由140个氨基酸组成(1-140aa), 其分子量为16.2 kD。经SMART分析,该基因具有1个溶菌酶1(LYZ1)结构域(19-130aa)。半定量RT-PCR分析结果表明溶菌酶虽在多种组织中有较低水平的组成性表达, 但在细菌诱导的血细胞、心脏、肝胰腺和鳃等多种组织中表达上调。将中国明对虾溶菌酶基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-30a (+)中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 再进行诱导表达和亲和纯化, 得到了纯化的重组溶菌酶, 并进行了抑菌活性检测。结果表明, 重组对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌的抑菌能力较强, 最小抑菌浓度达到3.43 mmol/L, 但对革兰氏阴性菌抑制作用较小。上述结果表明, 该溶菌酶作为一种重要的免疫效应分子, 参与了对虾的免疫防御反应。 相似文献
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本文研究了蓖麻蚕卵内组织蛋白酶B和组织蛋白酶D在酸性条件下的活化机理和在卵黄蛋白水解中的作用。活性检测结果表明,酸处理用以使蛋白酶活化,但SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明酸化没有使蛋白酶分子量降低。推测酸化可能通过改变蛋白酶构象从而使蛋白酶活化。两种蛋白酶之间未表现出相互修饰导致分子量变化,也未表现出明显的相互促进活性的作用。蛋白酶水解产物分子量的不同,说明两种蛋白酶作用位点不同。组织蛋白酶B的水解产物分子量较小而组织蛋白酶D的水解产物分子量大,说明两种蛋白酶在体内可能作用于蛋白质水解的不同阶段或作用于不同的蛋白质。免疫扩散结果显示,抗蓖麻蚕卵蛋白酶血清可以识别柞蚕和棉铃虫卵内的成分,表明其它一些鳞翅目昆虫卵内可能存在相似的蛋白酶。 相似文献
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中华鳖人工孵化的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
试验采用四种孵化方式:自然孵化、人工孵化箱孵化、恒温水溶箱孵化、调温调湿箱孵化。从孵化方式、温度、鳖卵的大小及放置方位等不同因素对其孵化的影响进行了研究。结果表明:温度在孵化过程中,对孵化期的长短起着重要的作用鳖卵孵化最适宜温度为30-31℃左右;卵正放的孵化率>和的孵化率>倒放的孵化率;卵子的卵径和卵重直接影响着孵出稚鳖的大小。 相似文献
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昆虫卵内蛋白酶在胚胎发育中水解卵黄蛋白,为胚胎发育提供氨基酸,昆虫中已报道过几类卵蛋白酶,如家蚕中半胱氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶等。但是,目前尚不清楚这些蛋白酶是否存在于其他鳞翅目昆虫。了解这些蛋白酶的作用机理可以为我们提供害虫防治的新方法。并且,由于蛋白水解在许多生理过程中具有重要作用,如蛋白质的成熟和转运、受精、萌芽、肿瘤转移和其他形态发生等。因此,阐明这些蛋白酶的生物功能具有重要意义。由于(i蚕卵粒大产卵量也很大,因此被选作研究鳞翅目昆虫卵蛋白酶的材料,我们希望通过对数种昆虫卵内蛋白酶的研究、找出卵黄蛋白水解的一般规律。在我们前一篇文章中报道了(i蚕组织蛋白酶B的鉴定,该蛋白酶属于半胱氨酸蛋白酶类的组织蛋或最适pH为3.5,可被E-64抑制。本文报道蛋白酶的纯化和性质。经过5步纯化过程,从(i蚕卵母细胞中纯化出组织蛋白酶B,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得蛋白酶的亚基分子量在47kDa左右。纯化的蛋白酶活性可被E-64和Leupeptin抑制。因此,该蛋白酶属于半胱氨酸蛋白酶。天冬氨酸蛋白酶特异性抑制剂pepstatin不抑制其活性。其活性可被DFP和PMSF部分抑制。这两种抑制剂通常抑制丝氨酸蛋白酶活性 相似文献
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AProteinaseResponsibleforDegradingYolkProteinsinTussah(Antheraeapernyi)ZHAOXiao-fan;(赵小凡)WANGJin-xing(王金星)(DepartmentofBiolog... 相似文献
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