金黄色葡萄球菌arl双组分信号转导系统受体蛋白ArlS_(CA)的表达、纯化及活性研究

金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌,其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组分信号转导系统(two component signal transduction system,TCSTS)共同调控,其中ArlRS双组分信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域,以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlS_(CA)为目标蛋白进行相关的活性研究。首先,构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒,对目的蛋白进行诱导表达。其次,利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化,纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%,产量约为25mg/L;纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%,产量约为15mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构,体外磷酸化结果显示,ArlS蛋白具有激酶活性,自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后,利用定点突变的方法,构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlS_(CAG418A)和pProEX-HTa-ArlS_(CAG420A)。ArlS_(CAG418A)和ArlS_(CAG420A)蛋白不具有激酶活性,说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。     

27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响

目的:前期工作表明,27-nt miRNA对eNOS的转录和表达有负反馈调节作用。本实验进一步探讨27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS的基因表达、活性调节及其代谢产物的影响。方法:构建27-nt miRNA高表达质粒,并将其转染至HUVECs。MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Western Blot检测27-nt miRNA及细胞eNOS蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量。结果:27-nt miRNA对HUVECs的增殖有强烈的抑制作用(0.674±0.093 vs 0.315±0.013,0.743±0.076 vs 0.315±0.013,P0.05);27-nt miRNA对HUVECs的迁移有显著的抑制作用(0.483±0.009vs 0.806±0.017,0.465±0.047 vs 0.806±0.017,P0.05);27-nt miRNA显著降低eNOS蛋白的表达(0.410±0.004 vs 0.645±0.007,0.483±0.009 vs 0.645±0.007,P0.05)及明显抑制eNOS的活性(1.093±0.357 vs 5.034±0.509,1.707±0.652 vs 5.034±0.509,P0.05);27-nt miRNA明显抑制NO的合成与释放(70.687±4.432 vs 136.803±6.913,75.264±4.481 vs 136.803±6.913,P0.05)。结论:27-nt miRNA高表达明显抑制eNOS基因的表达及活性;27-nt miRNA明显抑制NO的合成和释放,可能成为血管性疾病治疗的分子靶点。     

大熊猫种公兽培育研究进展

大熊猫在国内外已有60多年的饲养历史,但有繁殖能力的种公兽很少,卧龙中国保护大熊猫研究中心通过良好的培育和饲养管理,成功培育出4只有自然交配能力的公兽,其中2只是在约1岁龄时从野外抢救回来进行人工饲养,另外2只是在卧龙大熊猫研究中心出生,1991－2000年,通过自然交配方式已使11只雌性大熊猫受孕产仔28胎44仔,科学的饲养管理,营养供给培驯方法是大熊猫种公兽培育成功的关键。     

通达汤治疗药源性闭经泌乳综合征40例临床观察

闭经泌乳综合征系非产褥期妇女或产妇停止哺乳 1年后 ,出现持续性泌乳 ,且伴闭经的疾病。部分女性精神病患者在服用抗精神病药物过程中 ,亦可见此病。大多数病人停药后 ,泌乳停止 ,月经恢复 ,但此类患者一般需长期服药 ,故形成药源性疾病。笔者在使用自拟通达汤的基础上 ,运用中医辨证施治的原则和方法治疗该病 40例 ,取得较好疗效 ,现报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料　 40例女性 ,年龄 2 0～ 38岁 ,平均30岁。城市患者 1 6例 ,农村患者 2 4例。患妄想性抑郁症 1 5例 ,精神分裂症 2 5例 ,接受抗精神病药物治疗前月经均正常。其中舒必利…     

云南色球藻科新分类群

在对云南石林国家级风景区碳酸盐岩表面的气生蓝藻类进行研究时,发现色球藻科中的1个新 种和3个新变种。其中石林肾胞藻是中国特有属——肾胞藻属中至今发现的第2个种;3个变种均属于星球藻属。     

重视幽门螺杆菌的侵害

幽门螺杆菌（Helicobacterpylory,简称HP）存在于广大的人群中,和一些疾病的发生有密切关系,给人们带来很大危害。大多数人对它还不了解,很需要人们认识它,重视它,征服它。1幽门螺杆菌的发现通常认为人胃中是无菌的,由于胃酸的存在使pH值为2,菌体难以生存。在对冒疾病患者进行胃粘膜活组织检查时,竟惊奇地发现胃组织标本中有大量的微曲状杆菌,定名为幽门螺杆菌。起初进行分离培养都未成功,后发现它对生活条件要求苛刻,生长缓慢。经改善培养条件,延长培养期,培养sd后出现灰白色菌落,才得以对它进行深入研究。ZHP的生物学特…     

青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响

用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶.将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶).经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0%、36.2%、38.9%、33.6%和32.8%.Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达.加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物.     

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成的调控研究X.purR琥珀突变体(am)的分离和氨基酸取代的初步研究

以超阻遏突变体３—１８为出发株,采用以乳糖为唯一碳源的ＮＣＥ平板的方法分离到４３９ 株调节突变体。通过转导引入ｔＲＮＡ抑制基因从中检测到 １１株 ｐｕｒＲ（ａｍ）候选株。共转导分 析证明,这些突变株的琥珀浪突变均发生在ｐｕｒＲ上。用 ｓｕｐＤ． ｓｕｐＥ和 ｓｕｐＦ分别对上述各ａｍｂｅｒ 突变体作了氨基酸取代实验,初步结果表明：同一氨基酸对ｐｕｒＲ不同位点（ａｍ）的氨基酸取 代,对ＰｕｒＲ调节功能有不同程度的影响。不同氨基酸（３种）对ｐｕｒＲ同一位点（ａｍ）的氨基酸取 代,对其调节功能的影响也存在差异。     

不同小麦品种对UV-B辐射增强响应的生理特性差异

研究了大田条件下模拟增强UV-B辐射（500 KJ·m^-2,相当于昆明地区臭氧层减少20%）对10个小麦品种生理指标的影响以及小麦对UV B辐射响应的种内差异.结果表明,10个供试小麦品种中有6个品种的叶绿素含量显著下降,叶绿素a降低的程度大于叶绿素b,从而导致叶绿素a/b的比率下降.UV-B对小麦叶片内MDA和类黄酮的影响也具有种内差异,有5个品种的MDA含量显著上升, 2个品种的MDA含量显著下降;4个品种的类黄酮含量显著增加,2个品种的类黄酮含量显著减少.叶绿素和类黄酮含量变化与MDA含量均呈显著负相关关系,类黄酮与小麦UV-B抗性之间存在密切联系.