重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定

通过双功能螯合剂S-20-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(p-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2+)分别与载体蛋白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联.通过二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测抗原蛋白浓度,对抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行定性鉴定,利用石墨炉原子吸收分光光度法检测抗原中Zn2+含量等,成功获得了免疫抗原Zn-DTPA-KLH和检测抗原Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA.用Zn-DTPA-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,极限稀释法亚克隆,间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)筛选,获得了1株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5).Z1A5染色体数目在100以上,所分泌的抗体为IgM亚类,轻链为kappa型,腹水型抗体效价高达1∶51 200.本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义.     

荷包猪SLA -2原核表达系的建立及表达研究

目的:建立荷包猪SLA -2原核表达系并研究SLA -2在pET - 32中的表达.方法:设计SLA -2胞外区的表达引物,亚克隆荷包猪SLA -2的胞外区,并转化入原核表达系统pET - 32进行表达,SDS - PAGE分析其表达产物的特性.结果:PCR结果显示,SLA -2胞外区亚克隆大小为840bp,酶切鉴定证实成功插入pET - 32表达载体,构建重组质粒pET - 32a(+)/SLA -2.SDS - PAGE显示,SLA -2基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小为51.4ku,与预期结果相符,蛋白相对表达含量达到了45%.结论:结果表明荷包猪SLA -2在pET - 32系统中成功表达,蛋白表达量符合要求,可用于下一步的结构和功能检测.     

S100A4与肿瘤细胞增殖及凋亡的研究进展

转移相关蛋白S100A4属于S100钙离子结合蛋白超家族,有着共同的EF手型功能区来介导其活性。S100A4在众多肿瘤生物学行为中起着调节作用。而且,S100A4在不同类型的肿瘤患者扮演着判断预后的角色。目前研究认为其与肿瘤细胞运动、增殖、刺激血管生成及基质重建有关系。本文就S100A4生物学特性及其对肿瘤细胞增殖、凋亡中的作用和可能机制作一综述。     

中国跃蛃属(石蛃目,石蛃科)一新种记述

记述采自江苏南京跃蛃属1新种,老山跃蛃Pedetontinus laoshanensis sp.nov.,通过扩增其线粒体CO Ⅰ基因,与中国已知跃蛹属其它物种进行遗传距离比较,并构建系统发生树,发现其与天目跃蛹P.tianmuensis和武当跃蛹较为接近,这也更加支持了基于形态证据的系统发生关系.并提供了跃蛃属已知19种的检索表.老山跃蛹,新种Pedetontinus laoshanensis sp.nov.(图1～17)体长7.0～9.0mm,复眼长/宽为0.99 ～1.00,中连线/长为0.50 ～0.55,复眼近中连线具浅色白斑,阳基侧突为1+6型,阳茎基节/端节为2.4,阳茎和阳基侧突位于第Ⅸ肢基片的1/2,产卵管初级型,其长略超第Ⅸ腹节的刺突端刺.前产卵管,分49 ～ 50节,后产卵管,分47 ～ 50节.该物种CO Ⅰ基因信息见GenBank No.EU699175～ EU 699177.新种与泰山跃蛹P.songi、天目跃蛃P.tianmuensis和武当跃蛃P.wudangensis相似,但复眼中连线/长、阳茎基节/端节、阳茎和阳基侧突位置、产卵管分节具明显区别.基于CO Ⅰ基因序列构建BI、MP和NJ系统发生树均有效证明老山跃蛃P.laoshanensis为单系群.基于K2p模型,新种与中国跃蛹属其它物种的遗传距离比较,与天目跃蛃P.tianmuensis遗传距离最小9.7％,与栾川跃蛃P.luanchuanensis 遗传距离最大12.1％.结合形态和分子数据证明该物种的有效性.正模♂,江苏南京老山(32°07′N,118°36′E;海拔145m),2004-08-01,李鹏、张加勇采,编号ZJNUSB050.词源:新种种名源自采集地地名.     

南方红豆杉响应不同传粉式样的结实表现

采用开花前雌株短枝套袋隔离传粉、花期人工授粉、风媒传粉 对照 及其传粉障碍等几种传粉式样 ,比较不同传粉 授粉 方式对南方红豆杉 Taxus chinensis var.mairei 结实的影响 ;在风媒传粉条件下 ,研究了南方红豆杉不同种植行向、树冠不同方位、上下内外不同层面的结实表现 .结果表明 :南方红豆杉存在孤雌生殖现象 ,平均单枝结实率为 2 8.7% ,与风媒传粉相比较 ,存在极显著差异 P<0 .0 1 ;人工授粉能显著提高结实率 P<0 .0 5 2 0 .7% ;2～ 3月份开花期 ,江汉平原盛行东北风 ,在风媒传粉条件下 ,东西向种植的南方红豆杉有更多的授粉机会 ,其结实情况极显著优于南北向种植的 P<0 .0 1 ;东西向种植的南方红豆杉树冠果实的空间分布 ,受传粉条件包括风向、冠层方位及距传粉源的距离、冠层内外上下层次等因素的影响 ,方位间的结实量按东南西北方位依次为 :2 30 .375粒、185 .6 2 5粒、12 8.813粒、10 5 .4 38粒 ,呈递减趋势 ,冠外层结实量普通高于冠内层 ,树冠东向下外层结实量最高 4 16 .75粒 ,北向下内层最低 2 2 .0 0粒 .     

人核受体Nurr1基因的克隆和表达及产物纯化(英文)

核受体相关因子 1(nuclearreceptor relatedfactor 1,Nurr1)是主要表达于中脑黑质及腹侧被盖区多巴胺能神经元的一种转录因子 ,属于核受体超家族成员 ,其功能性配体尚未被确认 .研究表明 ,Nurr1对中脑多巴胺神经元的发育、存活以及成熟后功能的维持具有特殊重要意义 .如能找到它的特异性配体 ,将为最终筛选出治疗帕金森病等中枢多巴胺失调性疾病的药物或化学合成先导物打下基础 .为了获取Nurr1蛋白以标定其配体以及研究蛋白质间的相互作用 ,采用RT PCR技术 ,从人胚中脑组织特异性扩增及克隆了人Nurr1cDNA ,并获得一个在氨基端缺失 35 0bp碱基的Nurr1突变体 .将正常的Nurr1基因片段亚克隆至表达载体pET2 8a ,分别在TNTRT7偶联网织红细胞溶胞系统和大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得表达 ,均以可溶性形式存在 ,且产自于体外转录 翻译系统的真核表达Nurr1蛋白已标记上同位素3 5S .Western印迹分析表明 ,所表达的重组目的蛋白具有特异的免疫反应性 .经Ni NTA亲和层析 ,得到了初步纯化的rhNurr1蛋白 .     

黑河流域浮游植物及其地理分布特征研究

1997年5至8月对黑河（中）流域河道、湖泊、沼泽的10站位的调查中,共鉴定浮游植物8门109种（未鉴定到种的按1种计）,其中蓝藻（Cyanophyta）16tkhh,bqvnaiks(Cryptophyta)2种,甲藻（Pyrrophyta)3种,金藻（Chrysophyta)4种,黄藻（Xanthophyta)4种,裸藻（Euglenophyta)8种,绿藻（Chlorophyta)38种,硅藻（Bacillariophyta)34种。南部祁连山山区的浮游植物种类很贫乏。中下游诸点有黑河流域浮游植物全部属、种,故可以认为黑河流域浮游植物地理分布具有与河流水文分带相对应的垂直地理性分异。     

犬頸動脈竇內加壓對於頜下腺分泌与膀胱及腸運動的影響

(一)在硫贲妥钠浅麻醉下犬的颌下腺多半有自动性分泌。颈动脉窦内加压一般都可以反射地刺激颌下腺的这种分泌。这一反射的传出途径除由腺门进入腺体的鼓索神经和交感神经外,可能尚有新的通路,文中曾予讨论。 (二)在浅麻醉或清醒状态下,颈动脉窦内压力增加可以反射地刺激膀胱运动,或是发动膀胱收缩,或是增加膀胱的收缩强度、收缩频率与收缩持续的时间。这一反射的传出途径通过盆神经。在个别情况下,也看到有抑制膀胱节律性活动的作用。 (三)颈动脉窦内压力增加也可以反射地刺激各段小肠以及结肠的运动,能够提高其紧张性,节律性与收缩强度。如果肠的运动性较高,有时则能发生抑制效应。 (四)我们认为颈动脉窦压力感受性反射在植物神经系统中能广泛扩散,尤其在浅麻醉或清醒状态下最容易表现出来,并且一般是副交感性的。     

大鼠基因组微卫星分布特征分析

大鼠(Rattus norvegicus)是重要的生物模型动物,已被广泛应用于医学和药学研究。利用生物信息学方法对大鼠基因组外显子、基因间隔区以及内含子微卫星进行了搜索与分析,并对外显子微卫星所在的基因进行了定位,以及通过Blast2Go和KAAS程序进行功能分类注释。分析表明:(1)不同区域微卫星数量上,基因间隔区(1 104 149)内含子(806 024)外显子(4 665),外显子不同区域微卫星数量表现为CDS3'UTR5'UTR;(2)外显子中出现最多的重复拷贝类别是A,其次是AAG、AGC,三碱基和四碱基微卫星在外显子微卫星中最多,占56.7%;基因间隔区微卫星和内含子均以二碱基数量最多,两者出现最多重复拷贝类别均是AC,其次均是A、AG;(3)外显子区、基因间隔区和内含子区不同重复类型重复次数均以最小重复次数,微卫星数量最多;(4)外显子微卫星序列2 330条,位于1 203个基因上,GO注释表明涉及细胞成分(cellular component)占46.9%、生物过程(biological process)占39.3%和分子功能(molecular function)占13.8%;(5)KEGG通路分析表明,与人类疾病相关的基因最多(431),其次是参与机体系统相关的基因(387),和细胞过程相关基因最少(158)。本研究将为进一步分析大鼠微卫星功能及微卫星分子标记提供理论依据。     

短期和长期运动预适应对力竭大鼠心肌损伤的保护作用

目的：研究短期和长期运动预适应对心肌细胞凋亡保护中发挥的作用及机制。方法：48只雄性SD大鼠随机分为对照组（C）、力竭组（E）、短期运动预适应组（S-EP）、长期运动预适应组（L-EP）。短期和长期运动预适应分别进行3 d和3周的反复间歇游泳训练方案。光镜下观察心肌细胞的结构改变;ELISA方法检测血清中缺血修饰白蛋白（IMA）、磷酸肌酸同工酶（CK-MB）含量;实时荧光定量PCR和Western blot方法检测心肌组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3基因和蛋白表达;采用DNA原位末端标记（TUNEL）法观察心肌细胞的凋亡情况。结果：与C组相比,E组心肌细胞损伤严重,血清IMA、CK-MB含量及心肌组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）;与E组相比,S-EP组血清CK-MB及心肌TNF-α、Caspase-8mRNA明显降低（P<0.05）,而蛋白表达无统计学差异,血清IMA及Caspase-3 mRNA和蛋白均下降不明显,无统计学意义（P>0.05）,L-EP组血清IMA、CK-MB含量及心肌TNF-α、Caspase-8、Caspase-3 mRNA及蛋白明显降低,有统计学意义（P<0.05）;与S-EP组相比,L-EP组血清IMA、CK-MB含量及TNF-α、Caspase-8、Caspase-3 mRNA和蛋白明显下降,有统计学意义（P<0.05）。E组心肌细胞凋亡明显,S-EP组和L-EP组均能抑制凋亡,且L-EP组与S-EP组相比心肌凋亡明显减少。结论：短期和长期运动预适应均可减轻力竭后的心肌损伤,但短期运动预适应并未改变Caspase蛋白酶的表达,长期运动预适应明显抑制Caspase-8、3 mRNA表达,减少蛋白合成,从而发挥心肌保护效应,故长期运动预适应在抑制心肌细胞凋亡方面较短期运动预适应更强。