大叶苦丁茶抗氧化成分及抗氧化性能研究(Ⅰ)

对冬青科大叶苦丁茶进行了初步的成分分析 ,同时采用可见分光光度计法测定其活性部位的 POV值 ,并进行抗氧化性能分析 ,其中所含多酚和黄酮部位的抗氧化性能较强 ,具有进一步开发及应用的价值。     

重组尿酸氧化酶发酵工艺优化

目的:优化并获得重组尿酸氧化酶(rUOX)基因工程大肠杆菌BL21(DE3)/pET-32a-uox高密度发酵的工艺参数。方法:在三角摇瓶中进行培养条件的优化实验,分别考察了pH值、接种量、无机盐、碳源、诱导强度等对工程菌生长和重组蛋白表达的影响,得到了优化的发酵条件;在此基础上放大至NBS BIOFLO 110 14 L发酵罐,通过对诱导时机的优化,利用分批补料发酵的方式,使rUOX在高密度培养的条件下得到高表达。结果:在优化的发酵条件下,菌体密度(D600nm)最终达到50以上,相当于20 g/L干重;可溶性rUOX占菌体总蛋白量的45%,其含量达到3.45 g/L。结论:为规模化制备重组黄曲霉尿酸氧化酶奠定了基础。     

木霉纤维素酶的诱导形成及其调节——Ⅵ.拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii Rafai)N_2-78被槐糖诱导形成的纤维素酶组分的分离、纯化及性质

拟康氏木霉洗涤菌丝体被槐糖诱导形成的纤维素酶,经DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤和聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法,初步分离得到C_1酶、C_x酶和β-葡萄糖苷酶三个组分,其分子量经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,分别为67,000、62,000和42,000。C_1酶用聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、免疫电泳和超离心鉴定,已证明是匀一的组分,为糖蛋白,富含甘氨酸、天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和谷氨酸。纤维素酶的三个组分对天然纤维素、微晶纤维素和或磷酸膨胀纤维素的作用存在协同效应。研究了纤维素酶组分的热稳定性及pH稳定性。     

遗传修饰技术在绵羊分子设计育种中的应用

利用遗传修饰技术可以使动物在遗传水平发生改变,实现在个体内表达外源基因或对其内源基因的功能造成影响.在动物育种中,可以利用遗传修饰技术在分子水平进行设计并实现品种的快速改良.从传统的遗传修饰技术、病毒载体、精子载体等介导的遗传修饰技术到新型人工核酸酶介导的基因编辑技术,尤其是CRISPR/Cas9为代表的人工核酸酶的运...     

通过共表达转铁蛋白和细胞周期蛋白D1改造CHO细胞株

目的:对现有的CHO-DG44细胞株进行改造,得到在无血清培养基中更具生长优势的CHO宿主细胞株。方法:分别克隆转铁蛋白和细胞周期蛋白D1基因,构建共表达2种基因的pIRES质粒,转染CHO-DG44细胞株,筛选G418抗性克隆。结果与结论:得到3株G418阳性克隆株,其中转铁蛋白和细胞周期蛋白D1表达水平最高的S6与CHO-DG44相比,在无血清培养基中生长更快、密度更高。     

稳定表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的RAW264.7细胞系的建立

为研究结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis分泌蛋白ESAT-6 (Early secreted antigenic target of 6 kDa) 对巨噬细胞相关功能的影响,将正确构建的重组质粒pEGFP-C1-ESAT-6和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-ESAT6融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blotting方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。结果证实EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,为后续的ESAT-6调控巨噬细胞机理研究提供了平台。     

针对炭疽保护性抗原不同结构域的中和性单克隆抗体的筛选和鉴定

炭疽保护性抗原（PA）是炭疽毒素的重要组分,同时也是现有炭疽疫苗的主要有效成分,在炭疽杆菌的致病与免疫中发挥关键作用。以重组PA为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,结合炭疽毒素敏感细胞的毒性中和试验,大量筛选抗PA单克隆抗体,获得了9株炭疽毒素中和性单抗。进一步分析表明这些单抗以IgG1亚类为主,分别识别PA 3个结构域的4个不同中和表位区。针对结构域2的4株单抗识别同一表位区,其中3株单抗的中和活性强于抗PA多抗;针对结构域4的4株单抗识别两个不同表位区;另有1株单抗识别位于结构域3的表位。实验结果提示PA具有多个中和表位,分别位于其不同结构域,其中结构域2、4包含主要中和表位。实验中获得的针对不同表位的中和性单抗为深入研究PA的免疫保护机理提供了工具,也为研制针对炭疽毒素的被动免疫制剂和治疗药物打下基础。     

重组BPI-(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达

杀菌 通透性增加蛋白 (Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＰＩ)是人和许多哺乳类动物白细胞中存在的一种碱性蛋白 ,它能与革兰氏阴性菌脂多糖 (ＬＰＳ)结合 ,具有中和内毒素和杀灭细菌作用[1 ] 。人ＢＰＩ基因位于第 2 0号染色体上 ,完整蛋白由 45 6个氨基酸组成 ,其活性部位主要在蛋白氨基端约 2 0 0个氨基酸 (ＢＰＩ2 3) [2 ,3 ] 。实验室研究和临床试验表明重组ＢＰＩ(ｒＢＰＩ)及其衍生物在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景[4] 。目前ＢＰＩ在应用上存在的主要问…     

特定方位的光栅识别学习不改变猫外膝体背核神经元的方位敏感性

视觉信号识别训练可改变视觉通路神经元的可塑性, 其神经机制尚不清楚。已有少数研究显示, 动物(猴) 长时间进行特定方位的光栅识别学习后, 视皮层部分神经元对视觉刺激的反应表现出与学习任务相关的敏感性变化。这种敏感性变化是否亦存在于皮层下结构尚无报道。本实验训练两只成年猫分别进行水平和垂直方位的条形静止正弦光栅的识别以获得食物奖赏, 两只猫的行为识别能力逐渐提高, 4 个多月后识别的正确率达85%以上, 用与训练方位垂直的正弦光栅检测发现, 识别正确率明显下降。细胞外记录外膝体背核(Dorsal lat eral geniculate nucleus, dLGN) 神经元对不同方位正弦光栅刺激的反应显示, 与正常猫相比, 训练猫外膝体细胞的最优方位并未向着训练方位发生明显改变, 对于感受野位于中央区15度视角以内的细胞来说, 其方位选择性强度以及在训练方位的发放强度与正常猫无明显差异。以上结果表明, 猫对特定方位的光栅识别学习不改变外膝体神经元的方位敏感性, 其行为上方位识别特异性的提高可能与视皮层细胞的方位编码可塑性有关。     

人抗体组合文库的构建和抗HBsAg噬菌体抗体的筛选

应用噬菌体表面递呈表达系统构筑建了人抗体组合文库,并同了结合乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的人噬菌体抗体（Ｆａｂ片段）。以免疫球蛋白信号肽序列为引物进行半套式ＰＣＲ所得到的产物在质和量上优越于以可变区５末端保守库列为引物进行ＰＣＲ所得到的产物,经过３次亲和选择后,抗体阳性率为６９％,抑制实验表明,所筛选出来的噬菌体本具有抗ＨＢｓＡｇ的特异性,序更分析表明ＶＨ分别属于ＶＨＩ亚群和Ⅲ亚群,其轻链ＶＬ分别属