黑曲霉菌株柠檬酸合成酶基因的敲除及功能分析

【背景】柠檬酸合成酶是碳代谢途径的中心酶,其在三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)、氨基酸合成和乙醛酸循环中发挥着重要作用,是柠檬酸合成的关键酶。本论文所选用的是一株高产柠檬酸的黑曲霉菌株CGMCC10142。【目的】克隆柠檬酸合成酶关键基因,构建柠檬酸合成酶的敲除菌株并鉴定其在黑曲霉菌株高产柠檬酸过程中的功能及影响。【方法】采用根癌农杆菌转化方法并利用同源重组原理,采用抗性筛选和致死型反向筛选的双重筛选方法获得正确敲除株。对转化子在不同碳源下的生长情况进行观察并对柠檬酸发酵过程中菌丝球变化和产酸量进行分析,最后通过荧光定量PCR分析柠檬酸合成酶基因对黑曲霉积累柠檬酸的影响,及其对主要代谢途径中重要酶相关基因和其他的表达量的影响。【结果】以柠檬酸高产菌株黑曲霉CGMCC10142为出发菌,构建一株遗传稳定的柠檬酸合成酶敲除的菌株T1-2。结果发现该菌株在以葡萄糖为碳源的培养基上生长缓慢并且产生孢子量减少。通过摇瓶发酵产酸实验,结果表明敲除菌在84 h产酸量为64.3 g/L,相对于出发菌的98.7g/L降低了34.85%。通过荧光定量PCR发现柠檬酸合成酶的表达量是下降的,同时重要酶的表达量都下降。【结论】该菌株的柠檬酸合成酶基因对柠檬酸积累具有重要作用,但存在其他同工酶基因,该基因敲除仅使产酸合成降低34.85%,同时发现该柠檬酸合成酶的顺畅表达有助于主代谢途径中各关键酶的高效表达,本研究可为研究黑曲霉高产柠檬酸机理奠定基础。     

小叶地不容离体培养与植株再生

1 植物名称小叶地不容(Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong). 2 材料类别茎段. 3 培养条件基本培养基含大量元素减半的MS(1/2MS).茎段培养基:(1)1/2MS,(2)1/2MS 6-BA 0.5mg·L-1(单位下同),(3)1/2MS 6-BA 2.0,(4)1/2MS 6-BA 5.0,(5)1/2MS 6-BA 0.5 NAA 0.2,(6)1/2MS 6-BA 2.0 NAA 0.2,(7)1/2MS 6-BA 5.0 NAA 0.2;侧芽增殖培养基:(8)1/2MS 6.BA 2.0 NAA 0.2 0.5g·L-1活性炭;生根培养基:(9)1/2MS IBA 1.0 0.5g·L-1活性炭.     

桃ACO基因反义转化桃幼胚子叶的研究

用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens )和基因枪两种方法,以桃(Prunus persica L. Batsch)幼胚子叶为受体,转化桃ACC氧化酶（ACO）反义基因片段,经筛选培养获得了卡那霉素抗性芽。微芽嫁接培养抗性芽部分可成株。PCR、Southern 杂交和GUS基因表达等分子检测,初步表明外源反义ACO基因已经整合到桃基因组中。     

松毛虫雌性信息素的研究与应用

目前,在我国对松林危害最严重的害虫主要有马尾松毛虫Dendrolimnspunctatus(Walker)、落叶松毛虫D.superaus(Butler)、油松毛虫D.tabulaeformisTsaietLiu、赤松毛虫D.spectabilis(Butler)、思茅松毛虫D.kikuchiiMatsumura、云南松毛虫D.houiLajonqui埁re等。综述6种松毛虫的雌性信息素的成分鉴定、合成、EAG反应,人工合成雌性信息素的田间活性测定,性诱剂在林间的设置技术及种群监测等应用。     

蓖麻提取物对鼠抗生育作用的实验研究

利用蓖麻提取物对昆明种小鼠进行了短期与长期的抗生育实验,研究发现蓖麻提取物（蓖麻油和蓖麻蛋白）对小鼠有明显的抗生育作用。蓖麻蚩白及其与蓖麻油的混合物在抗早孕方面的效果均可达到100％,蓖麻油抗着床的效果也可达到100％。蓖麻油长期抗鼠生育效果明显,在210d（正常小鼠的妊娠期是21～23d）内有效降低小鼠生育代数与产仔数,生育抑制率达80％以上。蓖麻提取物对离体小鼠子宫的影响也非常显著,通过增强小鼠子宫内部收缩有效减少着床机率。在中止妊娠的实验中发现,服用了蓖麻蛋白及其与蓖麻油的混合物的小鼠子宫内没有着床位点。     

肿瘤发生受免疫监视么 ?

机体的免疫系统,尤其是胸腺来源的 T 淋巴细胞是否能够识别并特异地清除体内随机出现的恶变细胞,对肿瘤的发生行使“免疫监视”,长期以来一直是免疫学界一个悬而未决的关键问题 . 近年来,由于生物技术的迅猛发展,基因敲除小鼠的问世,人们发现 T 淋巴细胞及其产物γ - 干扰素等的缺陷可以导致机体对化学致癌物甲基胆蒽 (methylcholanthrene , MCA) 的敏感性增强 . 这使一度受到冷漠的肿瘤免疫监视理论再度“复兴”,并孕育出肿瘤的“免疫编辑”假说 . 然而,亦有一些科学家认为在甲基胆蒽致癌过程中,机体反应的靶子很可能是异物甲基胆蒽而不是肿瘤细胞,要证明肿瘤免疫监视理论,尚缺乏新的证据 .     

山楂属主要植物叶子生药学研究

本文对我国山楂属主要植物的叶子进行了光镜及电镜下组织构造的比较,指出了种间鉴别特征。并对黄桐等成分进行分析,结果表明山楂、山里红、云南山楂、湖北山楂的叶子中含有防治心血管系统疾病的牡荆素、芦丁和金丝桃甙等有效成分,为本属植物的开发利用提供了依据。     

广西64株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及毒力测定

自1966年由美国Carmichael等首次报道从流产的Beagle狗中分离出犬种布鲁氏菌(B.Canis菌)以来,日本、德国、墨西哥、秘鲁和阿根廷等国都相继发现,国外对犬种布氏菌进行了较为广泛     

南方菟丝子质体超微结构、发育与功能的研究

本文研究了南方菟丝子（Cuscuta attstralis R.Br.)各个发育时期质体在茎中的分布,质体种类,超微结构及质体片层的长动态;用荧光分光光度法定性测定了各期的光合能力。结果表明：南方菟丝子体内含有叶绿素,具有叶绿体并能进行光合作用,是一种半寄生植物。叶绿体仅局限于韧皮薄壁细胞中,吸器发育过程中,叶绿体发育达到最完善,叶绿体片层系统的排列不同于一般种子植物而与一种半寄生植物槲寄生相似,菟丝子体内还存在一种“绿色造粉体”,分布于皮层细胞中,菟丝子在苗期光合自养能力和寄生能力均最强,此期是控制菟丝子危害的最适宜时期。     

南方菟丝子质体超微结构、发育与功能的研究

本文研究了南方菟丝子（Cuscuta attstralis R.Br.)各个发育时期质体在茎中的分布,质体种类,超微结构及质体片层的长动态;用荧光分光光度法定性测定了各期的光合能力。结果表明：南方菟丝子体内含有叶绿素,具有叶绿体并能进行光合作用,是一种半寄生植物。叶绿体仅局限于韧皮薄壁细胞中,吸器发育过程中,叶绿体发育达到最完善,叶绿体片层系统的排列不同于一般种子植物而与一种半寄生植物槲寄生相似,菟丝子体内还存在一种“绿色造粉体”,分布于皮层细胞中,菟丝子在苗期光合自养能力和寄生能力均最强,此期是控制菟丝子危害的最适宜时期。