重组人粒细胞集落刺激因子的N端氨基定点PEG化修饰

尽管重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)具有重大的治疗价值,然而在实际应用却受到体内半衰期过短因而需要频繁重复注射的限制．为了解决这一问题,我们利用两种不同分子量（5 kD和 20 kD）的单甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-PAL）对rhG-CSF的N端氨基进行了定点PEG化修饰．通过正交实验的统计学方法得到了最适修饰条件．研究发现,PEG化后的rhG-CSF具有了更高的体外稳定性,其体内活性也得到了很大提高,体内作用时间得到很大延长．因此,对于rhG-CSF的N端氨基定点PEG化修饰,可以显著提高rhG-CSF的临床应用价值．     

苹果多酚氧化酶的纯化与表征

运用丙酮浸漬干燥、磷酸盐缓冲液提取、低温离心、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex(A-50)、Sephadex(G-75) 和DEAE-celluse(DE-52)层析等方法从苹果中分离获得一种新的含铜酶蛋白,该酶被命名为多酚氧化酶Ⅱ(polyphenol oxidase Ⅱ, PPOⅡ),纯化倍数是215,纯化收率是23%.PAGE、SDS-PAGE和MALDI-TOF 等技术用于测定所获的酶的纯度和分子量.在PAGE和SDS-PAGE 均显示一条带,表明PPOⅡ只由一个亚基组成,且已达到单一组分(MALDI-TOF的结果更证实了这一点).SDS-PAGE 和 MALDI-TOF 的结果都表明PPO的分子量为 38204 Da.pH值对酶活性和稳定性研究的结果显示,从pH值4.0～7.0随着pH值的增加,酶活性也不断增加;从pH值 7.0～11.0, 酶活性不断降低.PPOⅡ的最适pH值为6.6最适温度为30℃.     

重组大肠杆菌右旋糖酐蔗糖酶的表达条件优化

通过设计正交实验,考察了培养基中各组分及其浓度对右旋糖酐蔗糖酶工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET28-dexYG诱导产酶结果的影响。在获得最佳培养条件的基础上,考察温度、蔗糖浓度和pH值对右旋糖酐产量的影响。结果表明:菌浓OD600达到2.0时,加入异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(IPTG)至0.25mmol/L,25°C诱导培养4h,产酶活力最高,达到110.16U/mL,蔗糖浓度对产量的影响比较显著。研究结果得到高效表达的培养条件,为实现该酶的工业化应用打下了基础。     

川西亚高山人工林碳氮分配格局及其随凋落叶分解的释放规律

对四川西部亚高山地区连香树、糙皮桦、云南松和云杉4种主要人工林生态系统的生物量、土壤及林木器官C、N含量进行了测定.结果表明：林木体内C的分布与器官年龄的关系不明显,而N和C/N的分布与年龄的关系较为密切.幼嫩器官中的N含量大于老化器官,老化器官中的C/N比值大于幼嫩器官,且针叶林地枯落叶中的C/N比值大于阔叶林地.C、N在土壤表层具有明显的富集作用,在整个人工林生态系统(包括林木、枯落物和土壤0～40 cm)中的积累量分别达 176.75～228.05 t·hm^-2和 11.06～16.54 t·hm^-2,在土壤-枯落物分室和林木分室中的分配比例为C （1.9～3.3）∶1,N （15.6～41.5）∶1,且针叶林的“C汇”功能大于阔叶林.阔叶林地的凋落叶分解速率一般大于针叶林地,周转期分别为2.2～3.7 a和3.9～4.2a;在凋落叶分解过程中,C在所有林地均呈超速释出态势,周转期为1.9～3.4 a;N在连香树和糙皮桦林地呈超速释出态势,周转期为1.9～3.2 a,在云南松和云杉林地呈慢速释出态势,周转期为6.7～8.5 a.     

卟啉化合物四-[3-甲氧基-4-(N-咔唑)]正丁氧苯基和四-[3-甲氧基-4-(N-咔唑)]正己氧苯基与小牛胸腺DNA相互作用的研究

〔四-[3-甲氧基-4-(N-咔唑)正丁氧苯基],4C4-TPP〕和〔四-[3-甲氧基-4-(N-咔唑)正己氧苯基],4C6-TPP〕是两个结构相似但侧链不同的卟啉化合物,4C6-TPP的侧链长于4C4-TPP。应用紫外吸收光谱、荧光光谱和园二色谱,研究了4C4-TPP和4C6-TPP与小牛胸腺DNA（Calf thymus, ctDNA）之间的相互作用。结果表明：4C4-TPP和4C6-TPP均以侧链插入DNA与之作用,计算二者与DNA之间的结合常数,4C6-TPP与DNA的结合常数远大于4C4-TPP与DNA的结合常数。基于4C4-TPP与4C6-TPP二者之间结构差异仅在于侧链基团,证明了侧链基团对于卟啉与DNA作用的影响不是主要决定于其空间尺寸大小,取代基化学结构是影响卟啉与DNA的相互作用的重要因素。     

大鼠白介素10真核表达质粒在大鼠体内外肝细胞中的表达及影响

目的探讨体外重组的大鼠白介素10（rIL-10）真核表达质粒能否在大鼠体内外肝细胞中表达及表达产物对肝细胞的影响。方法通过受体介导的脂介体转染法及尾静脉大容量注射法将rIL-10真核表达质粒分别转入大鼠BRL细胞及体内大鼠肝细胞中,采用RT—PCR法、ELISA法和免疫组织化学法检测体内外肝细胞rIL-10的表达情况,MTT法及流式细胞术检测rIL-10真核表达质粒转染对BRL细胞增殖与凋亡的影响。结果转染rIL-10真核表达质粒的BRL细胞及大鼠肝组织高表达rlL-10基因,BRL细胞培养上清与大鼠血清中rIL-10浓度分别为（12．78±O．94）ng／ml,（61．68±3．60）．g／ml。MTT法及流式细胞术显示rIL-10的表达对肝细胞有-定的保护作用。结论rIL-10真核表达质粒可在大鼠体内外肝细胞中表达并对肝细胞有-定的保护作用。     

初中生物课改实践的尝试

随着新课程改革的不断深入,教师的教学理念、教学行为以及学生的学习方式等发生了重大变化。一般认为,这种转变的取向主要体现在两个维度：一是学生学习主体由他主转向自主,他主学习是指一种被动的、依赖性的学习;自主学习是指一种主动的、独立性的学习。二是学习过程由被动变为主动,凸现学习过程中发现、探究、研究等认识活动,     

门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina NK-01合成褐藻寡糖及其结构鉴定

研究发现门多萨假单胞菌NK-01在菌体内积累中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的同时也能够合成褐藻寡糖分泌到发酵液中,其产量与培养基的碳氮比有关,高碳氮比有利于褐藻寡糖的合成。本研究利用紫外-可见分光光度法、傅立叶红外光谱分析、1H和13C核磁共振对褐藻寡糖的结构进行了分析鉴定,发现褐藻寡糖的结构是由β-D-甘露糖醛酸、α-L-古洛糖醛酸通过β-(1→4)/α-(1→4)键连接而成的无支化线性多糖,并且在单体的2位或3位羟基上部分乙酰化。凝胶渗透色谱(GPC)对分子量的测定结果为2054。     

金融稳定性与生态稳定性

亚洲金融危机以后,世界各国评估和诊断金融体系稳健程度的实务性研究取得了很大进展,但金融稳定性问题的理论研究仍相对滞后.本文讨论了用生态稳定性思想方法研究金融稳定性问题.文章先比较了金融稳定性的概念和生态学中有关稳定性的概念的异同,把生态稳定性概念移植、引申到金融系统中,建立了金融群落数学模型,给出了金融群落金融稳定的定义,论证了金融种群确定模型和随机模型的稳定性,介绍了金融群落随机模型的稳定性,最后分析了金融群落等级结构的稳定性.     

猪水肿病毒素Stx2e的致Vero细胞凋亡作用

摘要：【目的】研究猪水肿病的致病因子志贺毒素2e（Shiga toxin 2e, Stx2e）的致病机理。【方法】以AO/EB荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法和Western blot等方法研究Stx2e对Vero细胞的致凋亡作用及其信号途径。【结果】从细胞形态学和染色质水平证明,Stx2e 能诱导Vero细胞凋亡,并表现出时间和浓度依赖性;同时引起caspase-3表达量明显上调,Bax、caspase-9的表达量没有明显变化。【结论】Stx2e对Vero细胞的致凋亡作用主要通过膜受体通路引起,线粒体信号通路所起的作用较小。