液体活检对食管癌诊疗和预后的价值

食管癌是一种全球性的恶性肿瘤,由于其进展迅速并缺乏早期发现和有效预后的生物标志物,造成了患者较高的死亡率和较差的预后情况。近些年来,在精准肿瘤诊疗的大背景下,液体活检作为一种新兴的非侵入性检测方法,在食管癌疾病进展中可以实现动态监测,逐渐在临床上引起关注。液体活检通过从体液中获取肿瘤相关的生物标志物,如循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞、外泌体内容物等,来评估肿瘤的存在、特征和预后等。对食管癌患者进行及时有效的预后评估有助于改善其临床结局,故该文将对液体活检在食管癌的诊疗和预后中的科学研究及临床应用现状进行详细阐述,并指出目前液体活检中存在的挑战及其未来发展方向,期望能为食管癌的早期和超早期诊断、疗效动态监测、预后评估、个体化精准治疗决策的制定提供依据。     

基于CRISPR/Cas9系统构建TIA1基因突变的人诱导多能干细胞系

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TIA1-P362L突变的人诱导多能干细胞(iPSCs)系,并使其分化为运动神经元,为研究TIA1突变导致肌萎缩侧索硬化症(ALS)的分子机制及药物筛选提供细胞模型。利用CRISPR在线工具设计sgRNA,将其构建到pX330载体中,扩增左右同源臂并将其构建到供体载体中,接着对该供体载体的靶位点进行突变以获得同源重组的Donor质粒。将sgRNA和Donor质粒同时电转到野生型iPSCs系C11中,经G418抗性筛选获得单克隆,利用PCR和Sanger测序鉴定基因型,采用Western blot鉴定TIA1蛋白表达情况,并用核型分析、免疫荧光染色、定量反转录PCR及拟胚体(EBs)三胚层分化对TIA1-P362L突变的iPSCs系进行多能性鉴定,通过抑制SMAD信号通路诱导iPSCs分化为运动神经元并用特异性抗体验证。该研究成功建立具有TIA1-P362L突变的iPSCs系,该细胞系正常表达TIA1蛋白,具有多能性且能成功分化为运动神经元,对阐明TIA1在ALS疾病中的作用具有重要意义。     

岩藻寡糖的制备及其抗氧化与益生活性

岩藻多糖是大型褐藻门植物中的一种天然杂多糖,为进一步开发其生物活性,笔者以其为原料,采用酶法降解的方式制备了不同聚合度的岩藻寡糖(FOS)混合物,并采用电喷雾质谱(ESI-MS)对降解得到的寡糖产物进行结构表征,采用ABTS法、DPPH法及羟基自由基清除法对寡糖混合物的抗氧化活性进行了评价,以植物乳杆菌(Lactoba...     

Trichosporon montevideense WIN合成纳米金的催化特性

【目的】考察菌株Trichosporon montevideense WIN合成纳米金的催化特性及应用。【方法】利用活性WIN菌作用不同浓度HAu Cl_4(1、2和4 mmol/L)合成纳米金的特性,分别利用活性WIN菌和灭活WIN菌合成纳米金,分析合成纳米金的形貌、粒径及其催化特性。【结果】HAu Cl_4浓度为1 mmol/L时,菌株WIN合成了纳米金,HAu Cl_4浓度为2 mmol/L和4 mmol/L时,菌株WIN合成了纳米金及较大尺寸的金颗粒。通过紫外-可见光谱扫描、透射电子显微镜分析,发现活性和灭活WIN菌均能还原Au~(3+)合成纳米金,合成的纳米金均以球形为主,还有少量三角形、四边形及六边形。活性WIN菌合成的纳米金粒径范围为3 nm-252 nm,平均粒径为45.2 nm,而灭活WIN菌合成的纳米金为1 nm-271 nm,平均粒径为38.3 nm。活性和灭活WIN菌合成的纳米金对还原4-硝基苯酚的催化速率分别为2.76×10~(-3)s~(-1)和4.84×10~(-3)s~(-1)。【结论】菌株Trichosporon montevideense WIN的活性及灭活细胞均可以合成纳米金,且合成的纳米金具有良好的催化特性,在催化去除环境中难降解污染物中具有一定的应用前景。     

利用启动子缺陷型打靶载体敲除牛胎儿成纤维细胞中的Prnp

利用启动子捕获对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一.敲除动物的Prnp可使其具有抵抗Prion病感染的能力.采用启动子捕获策略,构建了牛Prnp启动子缺陷型打靶载体BoPrneo,线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞BFF,用250 μg/mLG418进行药物筛选,共得到99个药物抗性细胞克隆.对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting鉴定,结果表明,其中的4个细胞克隆为中靶细胞,说明牛胎儿成纤维细胞中的Prnp一条等位基因被成功敲除.本研究为牛Prnp的敲除提供了一种简单、安全、有效的方法.     

不同途径感染白斑综合征病毒 (WSSV) 对日本沼虾的致病性

日本沼虾肉质鲜美、经济价值高,但其对白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的易感性尚不明确。采用流行病学调查、感染试验和荧光定量PCR(qPCR)等方法,研究了日本沼虾Macrobrachium nipponense对WSSV的易感性、感染发病率以及WSSV在其体内的增殖情况。结果表明:日本沼虾是WSSV的自然宿主,上海市附近省份地区120个样本的自然携带率为8.33%。日本沼虾可以通过注射、摄食、浸泡途径感染WSSV,10 d内累计感染率均为100%,累计死亡率分别为100%、75%和0%。其中注射途径感染日本沼虾,感染后5 d肌肉病毒含量达到感染后1 d的1 000倍,8 d死亡率达100%。用注射WSSV感染日本沼虾死亡率来测量病毒致死日本沼虾的半数致死剂量(LD_(50)),2.71×10~5病毒粒子/μL能使日本沼虾死亡率达到50%以上。在养殖生产中,日本沼虾可以通过摄食感染WSSV的病虾或死虾而感染WSSV,也能通过浸泡在含WSSV的水体中而感染,并因此成为一种传播媒介,从而影响了WSSV的迅速传播与致病。     

Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附

目的 探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用。方法 采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果。结果 p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附。结论 Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附。Objective To further investigate the interaction between recombinant hepatitis E virus (HEV) capsid protein p239 and Grp78/Bip and the role of Grp78/Bip in HEV penetration.Methods We utilized pull-down, immunoprecipitation and antibody blocking assays to examine the interaction between p239 and Grp78/Bip. Confocal microscopy was used to investigate the co-localization of these two proteins. Purified Grp78/Bip was used to block the attachment of p239 to host cells.Results p239 directly bound to Grp78/Bip and this binding was sensitive to ATP. Furthermore, antibody blocking results demonstrate that this interaction was indeed conformation-dependent. A partial co-localization of p239 and Grp/Bip was observed on the plasma membrane of HepG2 by confocal microscopy. Pre-incubation of Grp78/Bip with p239 significantly blocked the attachment of p239 to HepG2 cells.Conclusion Grp78/Bip participates in the attachment and/or entry of the HEV capsid protein to host cells. These results further contribute to the understanding of the entry mechanism of the hepatitis E virus after infection. if(document.getElementById('ChDivSummary').innerHTML!="){CutSpan('ChDivSummary',500);DisplaySpanDiv('ChDivSummary');ClearSummaryOnLoad('SummaryLinkChID','SummaryLinkEnID');}else{CutSpan('EnDivSummary',1000);DisplaySpanDiv('EnDivSummary');ClearSummaryOnLoad('SummaryLinkEnID','SummaryLinkChID');}     

钝顶螺旋藻表达载体p215 t-spp的构建及转化

用合适的限制性内切酶消化载体p215t,胶回收获得含有gfp基因及amp基因大片段.设计引物,采用PCR扩增无菌钝顶螺旋藻A9藻株的强启动子片段;在T4连接酶的作用下进行体外连接重组,构建了带有螺旋藻启动子和gfp报告基因的新型表达载体p215t-spp.将该载体转入钝顶螺旋藻,利用报告基因的表达,在荧光显微镜下观察并记录转化藻细胞,p215t-spp质粒显著提高转化率.研究了不同PEG浓度、转化时间及冰浴处理对转化率的影响.采用1%PEG能有效促进细胞吸收DNA,获得10.5‰的转化率.实验初步证明,带有螺旋藻启动子的报告基因gfp能够在钝顶螺旋藻中顺利表达.     

朊蛋白相关蛋白Shadoo与朊病毒病

朊病毒病,即传染性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies, TSEs）,是一类传染性、致死性神经退行性疾病。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrP。转化为异常构象的PrP是至关重要的,但是PrP‘的正常生理功能仍不清楚。国外学者利用比较基因组学发现了-个新的朊蛋白相关蛋白-shadoo（Sho）。Sho与PrP。在氨基酸序列和细胞定位的相似性及主要在脑组织表达,使它成为-个非常值得研究的PrP相关蛋白。对Sho可能存在的与PrP。重叠的功能甚至直接相互作用的研究工作,将对今后揭示PrPc正常生理功能以及揭示Pfion病发病机制具有重要现实意义。     

luxAB基因标记的K2116L菌株在棉花根际中的定殖

采用三亲本杂交法将发光酶luxAB基因转移进棉花根际促生菌芽胞杆菌K2116菌株中,获得标记菌株K2116L.标记菌株连续传代15次均未发生质粒丢失现象,表明标记菌株具有较好的遗传稳定性;K2116L菌株的生长及其释钾能力未受到标记质粒的影响.K2116L菌株在灭菌和非灭菌的黄褐土、黄潮土和红壤3种土壤中均能长期存活;在灭菌土壤中的数量稍高于非灭菌土壤;在3种土壤中的数量依次为:黄褐土＞黄潮土＞红壤;在不同土壤中,K2116L菌株具有与土著菌株进行空间和营养竞争的能力.采用根盒试验追踪标记菌株在棉花根部的定殖动态,棉花播种12d时标记菌株在0～2、2～4 cm深度根际土壤定殖密度达到最大;18 d时在4 cm以下的深度达到最高水平.棉花播种18 d时标记菌株在所有深度的根表均达到最高定殖水平,0～2 cm根段定殖密度为1.76×106cfu·g-1,8cm以下根段达到1.6×105cfu·g-1.补充营养后,根际和根表标记的菌株数量均有明显上升.试验数据显示,随着根的生长标记菌株不断向根尖方向扩散.