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【背景】已发现A型流感病毒(influenza A virus,IAV)可激活多种程序性细胞死亡途径,这些途径在宿主细胞防御系统中起着重要作用。铁死亡是一种新型的非凋亡细胞死亡,主要由铁依赖性脂质过氧化介导。【目的】探讨HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV感染诱导的细胞铁死亡中的作用机制。【方法】使用IAV感染小鼠肺上皮细胞(MLE-12)构建细胞损伤模型后检测细胞病毒滴度和炎性因子分泌;使用荧光探针法和比色法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总铁离子和亚铁离子;透射电镜观察细胞超微结构;检测细胞铁死亡标志物mRNA和蛋白表达;生物信息学预测流感病毒诱导铁死亡潜在作用机制;激光共聚焦观察IAV对细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达影响,并检测其信号通路相关元件mRNA和蛋白表达;构建HIF-1α敲低模型,探讨HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV诱导细胞铁死亡中的作用。【结果】铁死亡抑制剂能降低IAV感染细胞的病毒载量和炎性因子的分泌,并能抑制细胞ROS、总铁离子和亚铁离子含量,促进细胞SOD活性,修复细胞线粒体损伤,逆转铁死亡标志物mRNA和蛋白表达;生物信息学预测发现HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV诱导的铁死亡中具有重要的相关性;试验验证IAV感染能促进细胞HIF-1α的激活和易位入核,并激活HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA和蛋白表达。【结论】IAV感染可以诱导细胞发生铁死亡,其作用机制可能是通过激活HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路发挥作用。 相似文献
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新红细胞生成刺激蛋白(NESP),是重组人红细胞生长素(rh EPO)的一种高糖基化类似物,它含有5个N端糖链和比rhEPO高2倍的唾液酸残基,具有较好的代谢稳定性和3倍于rhEPO的半衰期。在新红细胞生成刺激蛋白(NESP)的基础上,通过NESP的cDNA与人IgG2的铰链区与CH2和CH3的cDNA连接,形成了融合蛋白NESP-Fc,来达到提高NESP半衰期的目的。表达载体的构建、融合蛋白的表达纯化和初步的功能性试验等一系列研究证实,所表达的融合蛋白主要以二聚体形式存在;NESP-Fc能明显促进UT-7细胞的生长和小鼠体内网织红细胞的增殖;在大鼠体内的研究发现其半衰期高达56h;小试规模重组蛋白的表达量在1.4g/L左右。这些研究为该融合蛋白最终实现临床应用和产业化打下了良好的基础。 相似文献
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为探究不同移虫日龄的西方蜜蜂蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b的表达及其调控机理,以β-actin为内参基因,运用q RT-PCR技术检测不同移虫日龄蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b m RNA的表达水平,用Western blot方法检测hexamerin110、hexamerin70b蛋白的表达。结果显示,hexamerin110、hexamerin70无论是在m RNA水平还是蛋白水平,随着移虫日龄的增加,其表达量均呈降低的趋势。1日龄移虫培育的蜂王卵巢hexamerin110基因表达量显著高于其他组(P0.05),1日龄移虫培育的蜂王卵巢的hexamerin70b基因的表达量极显著高于其他组(P0.01)。Hexamerin110、hexamerin70b在1日龄移虫发育的蜂王卵巢中的表达水平最高,推测其可能与蜂王生殖发育以及级型分化有关。 相似文献
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本研究利用16对荧光标记微卫星引物分析国家蜜蜂基因库(吉林)保种群体东北黑蜂的小群保种效果,为进一步保护和利用东北黑蜂遗传资源提供理论依据。分别选取国家蜜蜂基因库(吉林)保种群体和国家级东北黑蜂保护区(原产地)群体东北黑蜂各30头,利用测定优势等位基因频率(Pi)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)和群体内近交系数(F_(is))比较基因库保种群体与原产地群体的遗传差异。两群体间东北黑蜂的Pi、He、PIC和F_(is)均没有显著差异(P0.05)。国家蜜蜂基因库(吉林)对东北黑蜂群体保种效果良好,异地小群保种的方法对东北黑蜂具有潜在可行性。 相似文献
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酸解羽毛粉代替蛋白胨研制新型细菌培养基 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】从工厂下脚料——酸解羽毛粉氨基酸含量高且种类丰富出发,开发出低成本新型细菌培养基,以期资源化该类废弃物。【方法】将酸解羽毛粉代替常用细菌培养基(LB培养基)中的蛋白胨,进行细菌液体发酵试验,比浊法在波长600 nm处比色测定菌液的吸光值,可培养计数法监测细菌数量。【结果】以LB培养基为对照,酸解羽毛粉完全代替蛋白胨液体发酵供试菌株时,菌株的生物量与对照无显著性差异或显著高于对照。培养模式菌株大肠杆菌和枯草芽孢杆菌24 h后,与对照相比,生物量分别增加了21.59%和27.83%。菌株生长曲线表明,生长初期,菌株在新型培养基中生长稍延迟,但含酸解羽毛粉培养基能延长枯草芽孢杆菌的对数生长期,并且两菌株到达稳定期时的生物量均高于对照。可培养计数法结果同样表明,含酸解羽毛粉培养基所培养活菌数量与对照(LB培养基)相比,差异不显著。【结论】用酸解羽毛粉代替LB培养基中蛋白胨进行细菌培养是可行的,可以大大降低生产成本。 相似文献
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肝硬化门脉高压症大鼠模型制作方法的探讨 总被引:4,自引:3,他引:1
目的:建立稳定可靠的肝硬化门脉高压大鼠动物模型。材料与方法:50只雄性sD大鼠,随机分为3组。正常对照组10只,行假手术,给予正常饮食。肝硬化A组20只,先行左肾上腺静脉结扎,然后给予初始浓度为0.03%的硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)溶液作为饮用水并根据大鼠体重变化调节给药浓度。肝硬化B组20只,行假手术,给予固定浓度为0.03%TAA溶液。给药时间为14周。结果:肝硬化A组大鼠死亡率为0,肝硬化形成率达到100%。肝硬化B组大鼠死亡率15%,肝硬化形成率75%。肝硬化A组大鼠的门静脉压力明显高于肝硬化B组和对照组。结论:采用左肾上腺静脉结扎并根据体重变化调节TAA给药浓度可建立稳定可靠的肝硬化门脉高压大鼠动物模型。 相似文献
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