T-DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用

T-DNA介导的基因诱捕技术是近年来发展起来的鉴定和分离基因的方法。在拟南芥和水稻基因组测序已经完成的今天, 该技术将在两者基因功能的研究中扮演举足轻重的角色。本文就T-DNA介导的基因诱捕系统、 基因克隆和突变体库构建的研究进展及其在植物功能基因组学上的应用等内容进行了综述, 并讨论了该技术应用中的一些问题。     

胞松素B对黑麦花粉母细胞减数分裂后期染色体运动的影响

De la Pena and Puertas(1978)发现早、中和晚偶线期接种的黑麦花药,在含有抗微管试剂秋水仙素(1mg/ml)的培养基上培养16—24小时以后,部分花粉母细胞显示出秋水仙素效应的有丝分裂(C-mitosis)特征,他们称之为秋水仙素效应减数分裂(C-meiosis)。我们在研究抗微丝试剂胞松素B(cytochatasin B)对黑麦花粉母细胞发育的影响时,也观察     

华西委陵菜的组织培养与快速繁殖

1植物名称华西委陵菜(Potentilla potaniniiWolf)。2材料类别子叶和下胚轴。3培养条件以MS为基本培养基。(1)愈伤组织诱导培养基:MS+2,4-D0.5mg·L-1(单位下同);(2)芽分化培养基:MS+6-BA5.0+NAA1.0;(3)芽继代培养基:MS+6-BA5.0+NAA1.0+GA35.0;(4)生根培养基:1/2MS+IAA0.5+NAA1.0。上述培养基均添加3%蔗糖和0.7%琼脂,pH为5.8。培养温度为16和25℃,光强30μmol·m-2·s-1左右,光照时间12h·d-1。4生长与分化情况4.1愈伤组织的诱导将种子用70%乙醇浸泡30s,用0.1%升汞溶液灭菌10min,无菌蒸馏水清洗5次,接种于MS培养基上。取生长7d…     

拟南芥茎顶端分生组织相关突变体的表型与结构分析

以拟南芥野生型(C24)和T-DNA插入诱发的突变体(155系)为材料,通过表型分析、组织切片、GUS基因表达的组织化学定位等研究方法对155系的形态结构和生长发育进行了较为细致的观察分析,结果发现:(1)T-DNA插入诱发的155系突变体植株矮化,叶片等器官体积减小,营养生长阶段延长,发育较C24缓慢;(2)同一时期155系的茎顶端分生组织面积较C24减小,顶端平坦,细胞层数减少,两侧叶原基基部之间的距离缩短,呈现出发育迟缓、从茎顶端分生组织向花分生组织转变延迟等特征;(3)GUS基因特异性地在155系茎顶端分生组织和维管组织中表达.结果表明,T-DNA诱捕基因可能在茎顶端分生组织中发挥作用,由于T-DNA的插入使该基因的功能受到了影响,进而影响了155系中茎顶端分生组织的发育模式,产生了155系的一系列表型改变.     

杨树细胞色素P450类固醇单加氧酶(CYP90)基因的克隆与分析

拟南芥的CPD基因编码一种与植物油菜素内酯(brassinosteroids,BRs)生物合成有关的细胞色素P450类固醇单加氧酶(CYP90 )。为探讨油菜素内酯这类新型植物激素在多年生木本植物中生物合成及作用的分子机理,以拟南芥CPD基因的一个cDNA片段为探针,从一种杂交杨 (Populustremula×tremudelois)的cDNA文库中分离出一个长 1 442bp的cDNA片段,然后再以这个cDNA的 5′区为探针,从这种杂交杨的基因组文库中分离出一个长 1 900bp的基因组DNA(gDNA)片段。测序结果表明,这段cDNA的 5′区与这段gDNA的 3′区重合; 由这段cDNA和gDNA组成的读框编码一个由 476个氨基酸组成的分子量为 63kD的蛋白质。该蛋白与拟南芥CYP90的同源性为 78 32%,比后者仅长 4个氨基酸,在所有已知的功能结构域,其中包括与BR生物合成密切相关的类固醇结合位点,也具有较高的同源性,表明CPD基因在一年生的草本和多年生的木本植物之间具有很高的保守性。系统树分析还表明,CYP90蛋白与番茄和玉米的矮化基因产物、鱼的all trans retinoicacid4 hydroxy lase及微澡青菌(Synechocystissp. )的细胞色素P450在进化上有较密切的联系。     

米荠的组织培养与快速繁殖

1植物名称碎米荠（Cardamine hirsuta L.）。2材料类别叶柄。3培养条件（1）愈伤组织诱导及分化培养基：MS＋6-BA2.0mg·L^-1（单位下同）＋NAA0.1;（2）生根培养基：1/2MS＋NAA0.3。上述培养基均添加30g·L^-1蔗糖和7g·L^-1琼脂,pH5.8,     

Pttkn1基因异位表达对烟草叶片形态的影响

以红花烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片为材料,利用农杆菌介导的叶盘转化法将Pttkn1基因整合到烟草基因组中,获得了转基因植株,研究了该基因对植物形态发生和维管形成的影响,并对其进行了RT-PCR分析。结果表明,转基因烟草植株的叶片形态和叶脉发生了多种变化,包括叶片对称性丧失、出现裂片、皱缩、异位茎、杯状叶片、瘤状结构、叶脉脉序紊乱等。RT-PCR分析表明,该基因仅强烈表达于转基因烟草植株中,而在野生型和组织培养材料中均未检测到该基因的存在。表明Pttkn1基因已经成功转入烟草中,而且在叶片形态发生和维管形成过程中发挥一定的作用。     

T—DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用

T-DNA介导的基因诱捕技术是近年来发展起来的鉴定和分离基因的方法。在拟南芥和水稻基因组测序已经完成的今天,该技术将在两者基因功能的研究中扮演举足轻重的角色。本文就T—DNA介导的基因诱捕系统、基因克隆和突变体库构建的研究进展及其在植物功能基因组学上的应用等内容进行了综述,并讨论了该技术应用中的一些问题。     

洋葱雄配子形成过程中染色体数目变化同染色质胞间转移的关系

在小孢子和雄配子形成过程中,中期Ⅱ、小孢子和生殖细胞有丝分裂中期染色体数目增加和减少细胞的百分率分别与前一时期(中期Ⅰ、中期Ⅱ和小孢子有丝分裂中期)染色体数目增加和减少细胞的百分率相近,而中期Ⅰ染色体数目增加和减少细胞的百分率又分别与凝线期2.3→1和1→2.3型染色质胞间转移的百分率相近,统计学上无显著差异。据此认为:(1)染色体数目的改变与染色质的胞间转移活动有关;(2)中期Ⅰ那些染色体数目增加或减少的细胞基本上都能够进一步发育,直至形成雄配子。     

C~(6+)重离子对山黧豆种子的诱变效应

本实验探讨了C~(6+)重离子对山黧豆种子的诱变效应,结果发现,C~(6+)重离子对山黧豆种子的萌发率、成苗率、幼根及幼苗生长速度有着显著的影响,而且辐照剂量与效应呈明显正相关,此外,与~(60)Co-γ射线相比,C~(6+)重离子不仅诱导形成了较高的有丝分裂畸变率,而且还能在所用剂量的低中级剂量范围内(10~2—10~5P/cm~2)产生较宽广的畸变谱,表明C~(6+)重离子照射有可能在辐射损伤较小的情况下产生有用突变。文章还推论了C~(6+)重离子在山黧豆无毒或低毒品系的诱变育种中可能采用的剂量范围。