水稻RNA结合蛋白C3H12与RNA结合位点的鉴定

CCH型锌指蛋白质C3H12是进化上保守的RNA结合蛋白质,它含有5个串联的CCCH锌指结构域ZnF1-5,形成2个紧密的锌指簇ZnF1-3和ZnF4-5。早期的研究发现,C3H12可能通过与mRNA结合的方式在转录后水平调控基因的表达。然而,与C3H12结合的mRNA类型和他们的结合模式,并未通过实验得到证明。本文表达纯化了一系列C3H12截短及全长蛋白质,并合成了一些潜在RNA底物ARE9、ARE19及对照Random21。通过等温滴定量热法 (isothermal titration calorimetry, ITC) 确定了C3H12与富含腺嘌呤尿嘧啶单元 (AU-rich element, ARE) mRNA底物的结合,并揭示了互作核心区域和热力学性质。通过荧光光谱分析和微型热泳动 (microscale thermophoresis, MST)技术对ITC的结果进一步佐证。结果表明：(1) C3H12与ARE底物的相互作用是焓驱动的能量有利的 (ΔG<0) 特异性结合,结合比为1:1。(2) C3H12与ARE19的亲和力较ARE9更高（约2倍）。(3) C3H12中ZnF1-3在与ARE类底物的结合活性中发挥主导作用。(4) C3H12结构中的141个氨基酸残基的接头不直接参与和ARE底物的相互作用。本研究揭示的CCCH型锌指蛋白质C3H12与ARE底物结合模式,将为进一步在分子结构水平阐明C3H12与ARE底物结合的机制奠定基础。     

铁死亡发生机制的研究进展

铁死亡(ferroptosis)是近几年发现的一种新的细胞死亡方式,是在小分子物质诱导下发生的氧化性细胞死亡,具有铁离子依赖性.其发生是细胞内脂质活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成与降解的平衡失调所致.铁死亡诱导剂通过不同的通路直接或间接作用于谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPXs),导致细胞抗氧化能力降低、ROS堆积、最终引起细胞氧化性死亡.铁死亡与帕金森综合征、胰腺癌等多种疾病相关,并发现可以通过激活或抑制铁死亡来干预疾病的发展,因此铁死亡成为近年来的研究热点.本文就铁死亡的发现、特点、发生机制及其与疾病的关系展开论述,将近年研究成果进行总结,期望为以铁死亡为基础的疾病治疗提供参考.     

慢病毒介导的小鼠PINK1基因RNAi载体的构建及在NIH3T3细胞中的筛选

目的:构建筛选靶向特异PINK1-siRNA慢病毒表达载体,感染小鼠胚胎细胞(NIH3T3)验证该病毒载体的敲减效率,为研究帕金森病的发病机制奠定基础。方法:构建2对靶向小鼠PINK1-siRNA序列(KD1和KD2),将这2对序列连接在GV118上,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293 T细胞,获得慢病毒颗粒,再将该病毒颗粒转染入NIH3T3细胞,用qRT-PCR验证细胞内PINK1 mRNA表达水平以验证敲减效果。结果:筛选出可以用于后续实验的高效靶向KD2序列,并成功转染到小鼠NIH3T3细胞中,在感染复数(MOI)为50时,KD2的沉默效果最好,敲减率达到66.4%。结论:成功构建了高效靶向小鼠PINK1-siRNA慢病毒载体,其可稳定转染小鼠NIH3T3细胞,可高效抑制PINK1 mRNA的表达。为下一步利用其感染神经细胞或注入动物脑内,进一步研究PINK1基因在帕金森病发病过程中的作用环节和机制提供了分子生物学的技术基础。     

核糖体失活蛋白抗HIV-1作用的研究进展

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-1感染细胞的凋亡及相应的信号转导、诱发活性氧的产生,以及对HIV-1整合酶的抑制作用等几个方面做了较详尽的阐述,并对RIPs的结构修饰和抗HIV-1构效关系进行了综述。对RIPs类化合物在抗病毒领域进行深入而系统地研究,能拓宽其在抗HIV/AIDS临床上的进一步应用。     

外源钙调素与拟南芥悬浮培养细胞结合位点的观测及其胞外效应

以拟南芥悬浮培养细胞为实验体系,借助外源荧光及同位素标记钙调素,研究结果表明外源钙调素不能被主动内吞入细胞内,而是主要以完整分子形式结合在细胞外表面;外源纯化钙调素可促进正向型质膜囊泡中的鸟苷酸三磷酸水解酶活性升高,也可引起拟南芥悬浮细胞质游离钙离子浓度的特异升高,表明外源钙调素可能通过细胞表面位点跨膜信号转换为细胞内信号,从而调节生物学活性。     

杀虫剂敌敌畏和除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的急性毒性实验

采用静态换水法研究了杀虫剂敌敌畏、除草剂丁草胺对饰纹姬蛙(Microhyla ornata)蝌蚪的急性毒性影响。结果表明,杀虫剂敌敌畏对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h、48-h的半致死浓度(LC50)分别为3．91μl／l和1．97μ/l;除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h LC50和48-h LC50分别为3．37μl／1和1．88μl／1,饰纹姬蛙蝌蚪对丁草胺的敏感性稍大于敌敌畏。     

散结镇痛胶囊联合孕三烯酮对子宫内膜异位症患者性激素、子宫动脉血流动力学和血清MMPs的影响

目的：探讨孕三烯酮和散结镇痛胶囊联合治疗对子宫内膜异位症（EMT）患者性激素、子宫动脉血流动力学和血清基质金属蛋白酶（MMPs）的影响。方法：选取中国人民解放军中部战区总医院2021年1月～2022年12月期间收治的EMT患者195例,采用双色球法将患者分为对照组（孕三烯酮治疗,n=97）和观察组（散结镇痛胶囊联合孕三烯酮治疗,n=98）。对比两组疗效、性激素指标、子宫动脉血流动力学和血清MMP-2、MMP-3、MMP-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平,同时观察两组不良反应发生率。结果：与对照组相比,观察组的临床总有效率更高（P<0.05）。治疗后,观察组卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）低于对照组（P<0.05）。治疗后,观察组搏动指数（PI）、阻力指数（RI）低于对照组,收缩期最大流速（PSV）、舒张末期流速（EDV）高于对照组（P<0.05）。治疗后,观察组MMP-2、MMP-3、MMP-9/TIMP-1低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：散结镇痛胶囊联合孕三烯酮...     

门多萨假单胞菌NK-01合成中长链聚羟基脂肪酸酯的发酵条件优化

为了提高PHA_MCL在门多萨假单胞菌NK-01中的积累,采用单因素实验和正交实验确立了发酵生产PHA_MCL的最佳条件,即以PHA产量为指标的最佳发酵条件为15 g/L葡萄糖浓度、C/N=50、发酵时间48 h,该条件下获得产量0.8 g/L以上的PHA;以PHA占菌体干重百分含量为指标的最佳发酵条件为10 g/L葡萄糖浓度、C/N=60、发酵时间48 h,该条件下获得占菌体干重50%以上的PHA。该研究将为门多萨假单胞菌NK-01用于PHA_MCL的规模化生产提供理论依据。     

不同病毒载量慢性乙型肝炎患者树突状细胞B7-H1表达及对免疫功能的影响

目的：观察慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表面共刺激分子B7-H1 的表达及对免疫功能的影响。方法：检测慢性乙型肝炎患者肝功能、HBV-DNA 水平,将患者分为高病毒载量高ALT 组（A 组）、高病毒载量低ALT 组（B 组）、低病毒载量组（C 组）及正常对照组（D 组）。流式细胞术检测各组患者外周血树突状细胞表面HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1a、B7-H1 表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DC 培养上清液和混合淋巴细胞培养上清液中细胞因子IL-12、IL-10 水平。结果：慢性乙肝患者的树突状细胞膜表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1a的表达均明显降低（A、B、C组与D组比较分别为42.3± 4.9 %、46.7± 7.0%、52.5± 6.3 %vs 94.5± 3.5 %;34.5± 5.3 %、39.9± 6.4 %、45.6± 5.2 %vs 90.6± 6.5 %;38.2± 8.6 %、36.1± 5.4 %、42.5± 6.8 % vs87.7± 5.1 %;28.3± 6.5 %、25.6± 3.4 %、33.5± 4.3% vs 82.6± 4.8 %;32.3± 5.8 %、29.3± 5.3 %、48.3± 4.9 % vs 68.2± 5.2 % P〈0.05）,B7-H1 表达水平明显升高（27.48± 21.4 %、21.83± 20.2 %、15.43± 10.32 %vs 4.23± 2.2%P〈0.05）。B7-H1 表达水平与ALT呈正相关,与IL-12 水平呈负相关。结论：慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能低下,其机制可能与树突状细胞高表达B7-H1 有关。B7-H1 高表达抑制了淋巴细胞的功能,导致乙型肝炎病毒持续感染。     

PAHG取出同期和二期乳房再造的效果及术后评价

摘要 目的：对聚丙烯酰胺水凝胶注射物（polyacrylamide hydrogel,PAHG）取出同期和二期乳房再造术的疗效及预后情况进行比较,为临床治疗提供一定的经验。方法：以2017年4月~2019年4月我院收治的PAHG取出乳房再造患者为研究对象,采用随机法结合患者需求分为I组和II组,I组进行PAHG取出同期乳房再造,II组进行PAHG取出后二期乳房再造,以手术指标（手术时间、出血量、拔管时间和住院时间）、并发症（疼痛、感染、肿胀和形态不佳等）、术后生命质量及自尊评分为指标对两组疗效及预后情况进行评价。结果：I组和II组第一阶段手术时间、出血量、拔管时间和住院时间比较,均无显著差异(P＞0.05),II组第二阶段各项指标较第一阶段均显著降低(P＜0.05);两组患者各项并发症发生率均无显著差异（P＞0.05）,但I组患者疼痛和形态不佳发生率略高于II组,II组包膜挛缩发生率略高于I组,两组并发症总发生率无统计学差异（P＞0.05）;I组术后1个月生命质量和自尊评分均显著高于II组（P<0.05）,两组术后6个月和12个月两组生命质量和自尊评分无明显差异（P＞0.05）;与术后1个月相比,两组患者术后6个月和12个月的生命质量和自尊评分均显著提高（P<0.05）。结论：两种PAHG取出后乳房再造术的效果和预后均良好,可根据患者情况和自身意愿进行选择,值得临床推广应用。