金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。     

百合病毒的DNA芯片检测技术研究

根据已知的黄瓜花叶病毒,百合无症病毒、百合斑驳病毒基因核苷酸序列,设计引物和探针,制备寡核苷酸芯片.用Cy3标记核苷酸引物,不对称RT-PCR扩增产物与芯片上的寡核苷酸探针杂交,荧光扫描仪检测并分析信号.研究制备的基因芯片能够检测侵染百合的3种重要病毒核酸的特异性荧光信号,该项技术具有特异、灵敏、快速的优点.     

肝特异性表达HCV5′NCR调控荧光素酶质粒的构建及表达

小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价 HCV特异性反义药物及肝靶向性运载系统的作用具有重要的实际意义     

凋亡相关基因的整合分析及基因表达芯片的制备

利用IPI和GenBank,收集了与凋亡相关的5 333条基因序列,用一定的标准,整合筛选得到1 384个凋亡相关的基因．通过亚细胞定位、组织表达差异显著性分析、自然正义/反义RNA对预测、基因簇在pathway上的定位、蛋白质/蛋白质相互作用等方面的分析发现,一些基因只在一个组织里显著差异表达,一些基因存在自然正义/反义RNA对现象,一些基因簇同时位于多条pathway等重要信息．同时,制作了一张凋亡相关基因的寡核苷酸芯片,并且对于一对NAIF1表达质粒转染前后的HeLa样品,通过该芯片的筛选,得到24个差异表达的基因．发现NAIF1过表达诱导的细胞凋亡,伴随了PAX2、PDCD8、PDCD10、DFFA、CASP7等基因表达的显著变化,同时还发现,U58668,该mRNA没有任何基因或蛋白质的注释信息,当camptothecin诱导U937细胞系凋亡时上调,在这里的NAIF1过表达诱导的HeLa细胞系中也上调(上述数据结果见http://gpcrome.cbi.pku.edu.cn:2005/chip)．     

Antisense EDRF1 gene inhibited GATA-1 transcription factor DNA-binding activity in K562 cells

Our previous studies showed that EDRF1 influenced expression of α-globin mRNA and synthesis of hemoglobin in K562 cells and modulated self-renewal of K562 cells. To illuminate the function of EDRF1 in K562 cells, sense and antisense EDRF1 constructs were prepared and transfected into K562 cells. By using microarray and dot blot assay, 60 cytokine receptors and some oncogenes sharing important functions in cell proliferation and differentiation were investigated. The results of this study demonstrated that IL-6 receptor, GM-CSF receptor, c-Jun/c-Fos, c-Myc and c-kit genes were regulated by antisense EDRF1 expression. The regulation was confirmed by RNA blot assay. GATA-1 mRNA expression was modulated by EDRF1 gene transfection. Electrophoretic mobility shift assay suggested that the DNA-binding activity of GATA-1 was remarkably inhibited in K562 cells expressing EDRF1 antisense gene. DNA binding activity of NF-E2 was at the same level as control experiment. Therefore EDRF1 may play a role in erythroid proliferation and differentiation by affecting the interaction between GATA-1 and its cis-elements.     

用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白

目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。     

Antisense EDRF1 gene inhibited GATA-1 transcription factor DNA-binding activity in K562 cells

Our previous studies showed that EDRF1 influenced expression of a-globin mRNA and synthesis of hemoglobin in K562 cells and modulated self-renewal of K562 cells. To illuminate the function of EDRF1 in K562 cells, sense and antisense EDRF1 constructs were prepared and transfected into K562 cells. By using microarray and dot blot assay, 60 cytokine receptors and some oncogenes sharing important functions in cell proliferation and differentiation were investigated. The results of this study demonstrated that IL-6 receptor, GM-CSF receptor, c-Jun/c-Fos, c-Myc and c-kit genes were regulated by antisense EDRF1 expression. The regulation was confirmed by RNA blot assay. GATA-1 mRNA expression was modulated by EDRF1 gene transfection. Electrophoretic mobility shift assay suggested that the DNA-binding activity of GATA-1 was remarkably inhibited in K562 cells expressing EDRF1 antisense gene. DNA binding activity of NF-E2 was at the same level as control experiment. Therefore EDRF1 may play a role in erythroid pro     

登革热病毒反义寡核苷酸的合成及抗病毒活性

根据碱基互补原理, 反义寡核苷酸可与特定病毒基因结合从而选择性地抑制该病毒的复制, 这是病毒性疾病治疗的新途径. 基于上述原理设计并合成了D2-04 RNA特异的6个5′末端脂肪链修饰的硫代反义寡核苷酸. 体外抗病毒活性评价显示互补于5′端起始密码、3′端重复序列和末端序列的3个反义寡核苷酸呈较强的抗病毒活性.     

几种基因芯片技术的比较

基因芯片技术因其自身的优越性将成为基因组序列分析和基因表达研究的主要工具。但是由于不同的实验室使用不同的技术平台 ,从 2 5到 80个碱基的寡核苷酸芯片和长度从数百到几千个碱基的cDNA阵列。不同技术平台的存在 ,为芯片资料的利用和芯片领域的标准化分析带来了困难。通过对不同技术平台的研究比较 ,短的和长的寡核苷酸芯片技术具有明显的优势 ,可望成为将来主要的技术方法。     

一种融合表达谱相关性信息的激活子网辨识算法

传统表达谱数据分析方法集中于寻找差异表达基因和共表达基因集合,没有考虑基因表达产物之间已知的相互作用.近年来在系统生物学的研究中发展了将基因表达谱与蛋白质相互作用网络进行整合分析的方法.现有方法未能综合考虑基因表达差异性和相关性信息,容易导致辨识结果中重要功能分子缺失且生物学功能相关度不高.提出一种融合表达谱差异性和相关性信息的激活子网辨识算法,能够在蛋白质相互作用网络中辨识高功能相关度的激活子网.应用到人免疫缺陷病毒HIV-1感染过程的研究,结果表明,该算法可以有效避免仅考虑基因表达差异性所引入的偏差,揭示了高相关性低表达差异基因在相关通路中的关键性作用.