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过量DMSO显著降低低模板浓度PCR扩增的特异性 总被引:2,自引:0,他引:2
DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率,但是过量的DMSO可以显降低特异序列的扩增效率,尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。在6%的DMSO存在时,开始出现非特异条带,同时特异扩增产物减少。本首次报道DMSO对PCR产物特异性的影响并确定了克服上述现象产生的途径,即通过增加模板-引物的比例消除非特异条带。而通常提高复性温度只能部分减少非特异产物,不能避免非特异扩增。本结果有助于提高常规PCR,尤其是分子遗传学分析中经常使用的随机扩增多态性DNA(random amplifeid polymorphic DNA,RAPD)检测的准确度。 相似文献
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非水介质中脂肪酶催化亚油酸油醇酯合成的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
利用实验室自制及购买的几种脂肪酶制剂催化的酯化反应来制备亚油酸油醇酯,其中本实验室制备的丝孢酵母脂肪酸酯化效果最好,作为进一步研究的实验用酶。以正己烷为反应溶剂,在微水系统中对影响亚油酸油醉酯合成的各种因素进行了研究,确定酯化反应合成的最适温度为35℃,0~100℃反应10h的酯化率均可达到90%,最适酯化pH为8.0,最适底物浓度为0.25mol/L,最适水含量为0.05%,在选用的11种有机溶剂中,以环己烷的酯化率最高,二甲亚砜最低。 相似文献
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斜卧青霉114-2 cbh1基因的TAIL-PCR克隆及与抗阻遏突变株JU-A10的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)114-2与其抗阻遏突变株JU-A10外切酶基因序列的差异.[方法]用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和RT-PCR扩增得到斜卧青霉114-2外切葡聚糖酶Ⅰ(cbh1)基因全长和cDNA全长.[结果]cbh1基因全长为1500 bp,含有两个内含子,编码453个氨基酸(GenBank,EF397602).克隆并分析了1.9 kb的cbh1基因上游序列,分别发现了葡萄糖代谢抑制因子CRE Ⅰ与纤维素酶转录调控蛋白ACE Ⅰ的两个的潜在结合位点.[结论]在相同的培养条件下,其抗阻遏突变株JU-A10的外切酶活明显高于野生株114-2.两菌株的cbh1基因序列完全一致,说明外切酶活明显提高不是由于cbh1基因发生突变引起的. 相似文献
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真菌和细菌纤维素酶的差别及内、外切葡聚糖苷酶的底物专一性 总被引:1,自引:0,他引:1
通常认为纤维素的降解过程,首先是纤维素酶(纤酶)分子吸附到纤维素表面,然后,内切葡聚糖苷酶(内切酶)在葡聚糖链的随机位点水解底物,产生寡聚糖;外切葡聚糖苷酶(外切酶),从葡聚糖链的非还原端进行水解,主要产物为纤维二糖,需要两类酶的"协同"才能完成对纤维素的降解。纤维素酶分子由催化结构域(catalyticdomain,CD)、纤维素结合结构域(cellulose-bindingdomain,CBD)和一个连接桥(linker)三部分组成。近年来,纤维素酶分子结构与功能的研究取得了实质性的进展。不同… 相似文献
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有机相中脂肪酶催化作用的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
近年来,由于许多微生物酶在有机相中的催化反应具有高度的立体选择性和区域选择性这一新特性的发现,使生物转化技术获得突破性进展,成为国际上非常热门的一个研究领域,尤以有机相中脂肪酶的研究最为活跃,在有机溶剂中,利用脂肪酶的催化作用已成功地进行了许多生物转化。酶拆分的独特作用是由于它们由卜氨基酸组成,其活性中心构成了一个不对称环境,有利于识别消旋体,但适于拆分的酶应有广泛的底物选择性,其中水解酶是较理想的酶类。脂肪酶(甘油酯水解酶,EC3.1.1.3)是专门在异相系统即在油一水的界面上起催化作用的酶,它对… 相似文献
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产电和污染物降解是微生物燃料电池(Microbial Fuel Cells,MFCs)的两个基本功能,也是MFCs作为一种新型的环境治理和能源技术最具吸引力的优势。大量的研究已表明:相对于一般厌氧生物降解技术,MFCs具有更高效的废弃物、废水或污染物降解的能力。解析MFCs强化污染物降解的机理对于进一步优化MFCs的性能具有重要的指导意义,也可以为MFCs在实际环境中的原位应用提供理论支持。本文在综述MFCs强化污染物降解研究报道的基础上,从MFCs中微生物群落的代谢模式、生物膜的活性以及MFCs对局部氧化还原环境的影响等方面为MFCs强化污染物降解的功能提供可能的理论依据,并对MFCs在污染物降解方面的几个可能的发展方向进行展望,为不同学科背景的相关研究者提供参考。 相似文献
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